CC BY
18
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
Ю.В. Сидорова, Н.А. Северина, Б.В. Бидерман, Н.В. Рисинская, О.А. Глинщикова, А.С. Пшеничный, О.М. Королева, В.А. Васильева, Л.А. Кузьмина, Е.Н. Паровичникова, А.Б. Судариков
СЛУЧАЙ АЛЛОГЕННОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ АЛЛОГЕННЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ
СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ОТ НЕРОДСТВЕННОГО ДОНОРА С МУТАЦИЕЙ DNMT3A
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. Соматические мутации гена DNMT3A (ДНК-метилтрансфераза 3А) выявляются у 30-36% пациентов с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) с нормальным карио-типом. При гематологических опухолях на аминокислотную замену в положении 882 приходится 92% всех точечных соматических мутаций гена DNMT3A, по данным базы COSMIC. Мутации гена DNMT3A относят к ранним, предлейкемическим изменениям. Соматические мутации гена DNMT3A p.R882 обнаруживаются у 0,8% здоровых людей старше 55 лет, так называемый клональный гемопоэз, что однако не всегда приводит к развитию опухоли. ДНК-метилтрансферазы отвечают за метилирование ДНК, что играет важную роль в эпигенетическом регулировании экспрессии генов. Считается, что нарушение метилирования ДНК - база для последующих мутационных изменений. Мутации гена DNMT3A являются факторами неблагоприятного прогноза при ОМЛ, а также ассоциированы с появлением других мутационных изменений, чаще в генах NPM1, FLT3, IDH1/2.
Цель. Описание клинического случая трансплантации ал-логенных гемопоэтических стволовых клеток от неродственного донора с соматической мутацией в гене DNMT3A.
Материалы и методы. Исследована ДНК костного мозга пациентки с ОМЛ, 36 лет, которая проходила лечение в НМИЦ гематологии с 2016 года. Для исследования мутаций применяли методы аллель-специфичной ПЦР (ас-ПЦр) и NGS.
Результаты. В декабре 2016 года у пациентки верифицирован диагноз острого миеломонобластного лейкоза, трансформация из миелодиспластического синдрома. При первичном молекулярно-генетическом обследовании выявлены мутации DNMT3A p.R882L (40%), IDH2 p.R140Q (40,6%), FLT3 p.D835A (1,8%), NPM1 (31,5%). Пациентке успешно было проведено химиотерапевтическое лечение. В материале костного мозга через три месяца от начала лечения не было обнаружено мутаций, выявляемых ранее. Учитывая молодой возраст
больной, неблагоприятный прогноз основного заболевания, в схему лечения решено включить трансплантацию аллоген-ных гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) от неродственного HLA-идентичного донора. Через три года после трансплантации при повторном исследовании у пациентки не обнаружено мутаций в генах №М1, FLT3, ШН2, однако обнаружена мутация гена DNMT3A с другой аминокислотной заменой р^882Н (6,25%). Эта соматическая мутация гена DNMT3A (р^882Н) была нами выявлена в лейкоконцентрате донора с аллельной нагрузкой 0,6%, но отсутствовала в костном мозге пациентки до алло-ТГСК. Мы исследовали костный мозг пациентки в динамике после алло-ТГСК и обнаружили постепенное увеличение количества клеток с мутацией р^882Н в костном мозге: 0,8%-1,23%-2%-4,4%-6,25%, соответственно через 1 мес, 3 мес, 6 мес, 1,5 года, 3 года после алло-ТГСК. Из осложнений посттрансплантационного периода у пациентки через год после алло-ТГСК развилась изолированная тром-боцитопения (снижение тромбоцитов до 7 тыс. в мкл) с геморрагическим синдромом и гипоплазия костного мозга, по данным трепанобиоптата. Тромбоцитопения была расценена как реакция трансплантат против хозяина. После выполнения процедур экстракорпорального фотофореза количество тромбоцитов практически нормализовалось (105 тыс. в мкл). В настоящее время пациентка находится под наблюдением.
Выводы. Вопрос о генетическом типировании доноров костного мозга возможно станет актуальным уже в ближайшее время. Вероятно, часть осложнений в посттрансплантационном периоде может быть связана с генетическими аномалиями, приобретенными пациентом в ходе ТГСК. В данном случае кроме самого факта пересадки аллогенного костного мозга с мутацией гена DNMT3A, мы наблюдаем постепенный рост клонального гемопоэза, что может привести к развитию миелодиспластического синдрома/вторичного острого лейкоза.
С.Ю. Смирнова, Н.Г. Габеева, Е.Е. Никулина, В.А. Ковалева, Э.Г. Гемджян, Е.Е. Звонков, А.Б. Судариков
СВОБОДНО-ЦИРКУЛИРУЮЩАЯ ДНК ПЛАЗМЫ КРОВИ У ПАЦИЕНТОВ С ДИФФУЗНОЙ В-КЛЕТОЧНОЙ КРУПНОКЛЕТОЧНОЙ ЛИМФОМОЙ
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. Диффузная В-клеточная крупноклеточная лимфома (ДБККЛ) - гетерогенная группа лимфатических опухолей, различающихся прогнозом и ответом на лечение. На сегодняшний день универсального прогностического маркера для пациентов с ДБККл нет. Все больший интерес приобретает изучение свободно-циркулирующей ДНК плазмы крови (сцДНКп). Kurtz и соавт. в своем исследовании показали, что по количеству опухолевой сцДНКп до лечения и скорости ее элиминации в процессе терапии можно прогнозировать течение заболевания. Мы исследовали сцДНКп у пациентов с ДБККЛ, выбрав в качестве маркера опухоли В клеточную клональность (В-КК).
Цель работы: оценить концентрацию и В-КК сцДНКп у пациентов с ДВККЛ на различных этапах терапии, сравнить их с клиническими данными.
Материалы и методы. В исследование включены 16 пациентов с ДВККЛ и 7 здоровых доноров (ЗД). До лечения у всех больных В-КК исследовали в опухолевом материале (ОМ) и сцДНКп (ПЦР, фрагментный анализ). Плазму получали из цельной крови центрифугированием. СцДНКп выделяли коммерческим набором Quagen, измеряли концентрацию на флуориметре Qubit. Лечение проводили по схеме NHL-BFM-90.
Результаты. У больных с ДБККЛ до начала терапии концентрация сцДНКп была достоверно выше (411 пг/мкл), чем у ЗД (<50 пг/мкл). Начало лечения (2 дня предфазы) значимо увеличило концентрацию сцДНКп - 2800 пг/мкл vs 411 пг/ мкл у пациентов без терапии. У 13 из 14 (93%) больных при исследовании В-КК в сцДНКп до начала лечения был выявлен клональный продукт (КП), который по длине совпадал с выявленным в ОМ. У 2 больных при исследовании В-КК
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 2, 2021
сцДНКп до лечения помимо опухолевого клона были выявлены 2-3 дополнительных КП, что предположительно могло отражать опухолевую гетерогенность. У 1 пациента с изолированным поражением толстой кишки было выполнено радикальное удаление опухоли, после чего В-КК в сцДНКп не выявлялась, а ее концентрация была такой же, как у ЗД. После 1 курса ХТ отмечено увеличение концентрации сцДНКп (М-639 пг/мкл), что вероятнее всего связано с токсическим действием препаратов в том числе и на здоровые ткани, поскольку опухолевого маркера (В-КК) после 1 курса выявлено не было у 7 из 9 (78%) пациентов. После 2 курсов средняя концентрация сцДНКп составила 379 пг/мкл, В-КК выявлена у 1 из 7 (14%) пациентов. После 3 и 4 курсов ХТ концентрация
сцДНКп была сопоставима с концентрацией сцДНКп у ЗД, а В-КК не выявлена ни в одном случае. Связи В-КК, концентрации сцДНКп с распространенностью процесса, экспрессией маркера пролиферации Ю-67, нодальным/экстранодальным поражением и молекулярными маркерами агрессивного течения не выявлено.
Выводы. Исследование СцДНКп у пациентов с ДБККЛ представляется перспективным, доступным при малоинва-зивном вмешательстве, но недостаточно изученным диагностическим подходом. Для определения значения сцДНКп как маркера опухолевой гетерогенности и предиктора рецидива необходимы исследования в динамике на более репрезентативных выборках.
К.А. Сычевская, С.К. Кравченко, Е.Е, Никулина, А.Е. Мисюрина, Н.В. Рисинская, А.У. Магомедова, А.Б. Судариков
АНАЛИЗ ИЗМЕНЕНИИ МИКРОСАТЕЛЛИТНОГО ПРОФИЛЯ В-КЛЕТОЧНЫХ ЛИМФОМ И ИХ ПРОГНОСТИЧЕСКОГО ЗНАЧЕНИЯ ПРИ ФОЛЛИКУЛЯРНОЙ
ЛИМФОМЕ
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. Идентификация в дебюте заболевания пациентов с неблагоприятным течением В-клеточных лим-фом представляет сложность. Это связано с отсутствием на настоящий момент прогностических шкал, которые бы в полной мере характеризовали биологию опухоли. Система репарации представляет собой сложный аппарат контроля исходной последовательности ДНК. В этом качестве ее значение велико как на этапе возникновения новой опухоли, так и при эволюции опухолевых клонов. Роль нарушений системы репарации неспаренных нуклеотидов и возникающей вследствие этих нарушений нестабильности микро-сателлитных повторов (MSI - microsatellite instability) уже доказана для солидных опухолей. Поскольку В-клеточные лимфомы характеризуются высокой генетической пластичностью, мы предполагаем, что в их патогенезе могут принимать участие изменения системы репарации, определяющие поведение опухоли и прогноз заболевания.
Цель. Анализ изменений микросателлитного профиля и их прогностического значения у пациентов с агрессивными и индолентными В-клеточными лимфомами.
Материалы и методы. В исследование включили 38 пациентов с диффузной B-клеточной крупноклеточной лим-фомой (ДВККЛ), 40 больных B-клеточной лимфомой высокой степени злокачественности (HGBL) и 84 пациента с фолликулярной лимфомой (ФЛ). В последней группе было 28 пациентов с ФЛ 1-2 типа, 25 пациентов с ФЛ ЗА типа и 31 пациент с ФЛ 3В и трансформацией ФЛ в крупноклеточную лимфому. Все пациенты дали добровольное согласие на участие в исследовании. Исследование выполняли с использованием диагностических панелей COrDIS Plus и COrDIS MSI (ООО Гордиз, Россия) в материале опухолевой ткани и клетках периферической крови в качестве контрольного образца. Амплификацию и фрагментный анализ проводили на автоматическом термоциклере DNAEngine (BioRad, США) и генетическом анализаторе Нанофор-05 (ООО Синтол, Россия), соответственно. Статистический анализ был выполнен в программе STATISTICA12 (StatSoft, USA).
Результаты. Выявленные изменения микросателлит-ного профиля были классифицированы следующим образом: EMAST (elevated microsatellite alterations at selected tetranucleotide repeats) - появление нового аллеля тетрану-клеотидного локуса; LOH (loss of heterozygosity) - аллельный дисбаланс; monoMSI - аберрации мононуклеотидных маркеров. В группе ФЛ наблюдались различия между типами с ин-долентным течением (1-2 и ЗА типы) и агрессивной формой
ФЛ (ЗВ и трансформация в крупноклеточную лимфому). Вероятность выявления EMAST, monoMSI и LOH при ФЛ с трансформацией была выше, чем при ФЛ 1-2 и ЗА морфологического типа, однако различия не достигали статистической значимости. При сравнении общей группы ФЛ с ДВККЛ и HGBL показана большая вероятность появления аберраций микросателлитов, особенно в отношении феномена EMAST (p <0,05 в тесте х2), при ДВККЛ и HGBL . Согласно полученным результатам, можно говорить о том, что при гистологической трансформации ФЛ в геноме не происходит накопления значительного количества аберраций микросателлитов, сравнимого с агрессивными В-клеточными лимфомами de novo. Вероятно, факторы, лежащие в основе появления нестабильности микросателлитных повторов, являются свойством опухоли на ранних этапах ее развития и не приобретаются в процессе опухолевой прогрессии. Поскольку ФЛ 3 типа является гетерогенной по клиническому течению группой лимфом, и разработка новых прогностических моделей представляется актуальной задачей, дополнительно был проведен анализ возможного прогностического значения аберраций микросателлитов. В когорте пациентов с ФЛ 3 типа (ЗА, ЗВ и ФЛ с трансформацией) общая выживаемость и бессобытийная выживаемость не различались в группах с наличием или отсутствием аберраций микросателлитных повторов.
Выводы. На основании полученных данных можно утверждать, что феномен нестабильности микросателлитов распространен в группе В-клеточных лимфом. Особенности распределения частот EMAST, MSI и LOH имеют нозологическую специфичность. Данные генетические аберрации в большей степени характерны для агрессивных лимфом, возникших de novo, чем для ФЛ с трансформацией в крупноклеточную лимфому. Прогностическая значимость EMAST, monoMSI и LOH не доказана в группе ФЛ З типа, однако для формирования окончательного заключения необходимо расширение когорты пациентов и проведение дополнительного анализа.
