CC BY
12
Andrzej Milczak, Beata Abramowicz, Krzysztof Buczek ©
Природничий Утверситет в ЛюблШ Bióóin Ветеринарноí Медицини Кафедра i Клтта Внутрштх Хвороб Тварин, Любящ Польща
ПОР1ВНЯННЯ ТРЬОХ ШВИДКИХ МЕТОД1В ОЦ1НКИ ЧИСЛА ТРОМБОЦИТ1В У ВИПАДКАХ ТРОМБОЦИТОПЕНП СПРИЧИНЕНО1
ШВАЗ1СЮ BABESIA CANIS
У хворобах, яю пробйають з тромбоцитопетею, зростае загроза спонтанних кровотеч у тварини. Ця загроза збыьшуеться обернено пропорцтно до числа тромбоцитiв. Швидка оцтка числа тромбоцитiв мае отже ктотне значення для оцтки стану тварини, в якт ми тдозрюемо тромбоцитопент.
З - nомiж багатьох методiв визначення числа тромбоцитiв важко вибрати iдеальну. Деят з цих методiв дуже трудомктю, iншi - дуже дорогi або мало доступн у ветеринартй практищ.
Одне iз захворювань, при якому дуже часто виступае тромбоцитопетя - це бабезюз собак. Метою ведених до^джень була оцтка трьох швидких методiв тдрахунку тромбоцитiв. Порiвняно мiж собою метод Фото, iмnедансний метод та QBC. 1мпедансний метод у до^джуваних випадках виявився маловiрогiдний. Перевагами методу QBC виявилися короткий час, потрiбний для отримання результату а також високий коефщент кореляцИ результатiв з результатами, одержуваними за допомогою здавна застосовуваного в клшчтй практиц методу Фото. Безперечною вадою методу QBC е досить значна вартють означення.
Ключовi слова: тромбоцитопетя, число тромбоцитiв, метод Фото, метод QBC, бабезюз
Вступ:
Тромбоцитопетя може супроводжувати багато захворювань. Зменшення числа тромбоцита у кровi може виникнути внаслщок розладiв виготовлення, надмiрного знищення або неправильного розмщення цих кров'яних тшець [1, 5]. У переб^у деяких хворобливих сташв тромбоцитопетя може бути рiвнодiючим двох або вЫх згаданих механiзмiв. З клмчно! точки зору кожний вид тромбоцитопени, незалежно вщ причини, яка довела до зменшення числа тромбоцита, проявляеться бшьш або менш заавансованимi розладами первинного гемостазу. Найлагщшший вид цих розладiв - це незначне подовження часу кровотеч^ Ця ознака часто не мае клмчного значення i в багатьох випадках лжар не бере И до уваги. У разi важких тромбоцитопенш часто доходить до спонтанних кровотеч, яю загрожують життю тварини. Вважаеться, що зменшення числа тромбоцита до 100 тис./мкл не спричиняе у
© Andrzej Milczak, Beata Abramowicz, Krzysztof Buczek, 2008
300
собак ютотних, з кшшчно! точки зору, розладiв гемостазу. Важка тромбоцитопешя - це стан, коли число тромбоцита у собак зменшуеться нижче 25 тис./цл [7]. Спонтанш кровотечi е тодi дуже частим ускладненням основно! хвороби. Як випливае з вищевказано! уваги, оцшка числа тромбоцитiв мае iстотне значення для означення ризику виступу кровотеч.
Одне iз захворювань, при яким дуже часто виступае тромбоцитопешя -це бабезюз собак [2, 4]. Цкаво, що у хворих на бабезюз собак майже не зустрiчаеться спонтанних кровотеч, незважаючи, що результати лабораторних дослщжень часто вказують на кнування тромбоцитопени з числом тромбоцита багато нижчим нiж 25 тис./цл [4]. З медично! точки зору важко цей факт пояснити. У таких випадках найпростше було б провиною за невiдповiднiсть результатiв лабораторних дослщжень з клмчною дiйснiстю обтяжити помилку анал^ичного методу. Чи справдi методи оцiнки числа тромбоцитiв е так недосконалi?
Протягом пiвстолiття для означення числа тромбоцита вживаеться iмпеданснi гематолопчш аналiзатори. Результати, одержуванi за допомогою цих апаратiв, докладнi i повторюванi, хоча не без застережень. Сумшвш або фальшивi результати одержуеться цим методом мiж iншимi тод^ коли в зразку кровi виступають скупчення тромбоцитiв, шизоцiти або також значний вщсоток великих тромбоцитiв [1, 7].
Не рекомендуеться також стосувати цього методу в розвинених випадках тромбоцитопени. Щоправда, аналiз гiстограм, викреслюваних бiльшiстю iмпедансних апаратiв, уможливлюе в певнш сферi контроль коректностi одержаних результата, але остаточна верифiкацiя можлива лише при застосуваннi референс-методу [3, 7].
У зв'язку з цим ICSH (International Council for Standardization in Haematology) далi рекомендуе застосування у сумнiвних випадках як референс-методу - камерного методу [3, 8]. Його трудомкткють i, ^м всього, мала докладнiсть спричиняе те, що в багатьох лабораторiях далi стосуеться старий, посереднiй метод Фоню [1, 8, 9]. Перевагою цього методу е l! простота а також можливкть оцшки морфологiчних ознак тромбоцита. Цжавий спосiб оцiнки числа кров'яних тшець, у тому також числа тромбоцита - це стосований з 1994 року метод QBC (Quantitative Buffy Coat) [6]. З техшчно! точки зору вш простий а результати одержуеться порiвняно швидко. Основною вадою е тут однак цшковитий брак можливостi критично! оцшки одержаних результата. Обмеження вище описаних методiв елiмiнуе бiльш технологiчно розвинений цитометричний метод. Вш однак вщносно дорогий i у зв'язку з цим мало доступний для малих лабораторш.
У клiнiчнiй практицi ютотне значення мае не тiльки яккть результатiв лабораторних дослiджень але також час, потрiбний до !х одержання. Не без значення е також варткть позначення.
301
Мета роботи:
Ведет дослщження мали на мет nopiBMHra клмчно! придатностi трьох швидких методiв означення числа тромбоцитiв у випадках тромбоцитопени. Моделлю послужила тромбоцитопенiя, наявна у перебiгу бабезiозу собак.
Матер1ал i методи:
Для дослiджень використано консервовану ЕДТА кров, що походить вщ 30 собак, хворих на бабезюз. У цш кровi означено число тромбоцита трьома методами: посередтм методом Фоню, методом QBC з використанням апарату QBC Vet Autoread фiрми IDEXX а також iмпедансним методом Coultera при використаннi гематолопчного аналiзатора MS9-5, французько! фiрми MELET SCHLOESING LABORATOIRES. Пiд час рахування тромбоцитiв методом Фонiо одночасно оцшювано морфологiчнi ознаки клiтин кровi.
У процес дослiджень вимiрювано також час з моменту вдабрання зразка кров^ до моменту одержання результату.
Одержат результати тддано статистичному аналiзу з використанням робочого аркуша Microsoft Office Excel 2003. Суттeвiсть вiдмiнностей результата, одержаних описуваними методами, перевiрено за допомогою тесту суми рангiв.
Результати:
Вщносно числа тромбоцита у периферiчнiй кровi дослiджувана популяцiя собак характеризувалася досить великим розкидом одержаних вартостей. Це стосувалося результатiв одержаних за допомогою кожного з дослщжуваних методiв. Середнi вартостi числа тромбоцитiв, а також стандартш вiдхилення зiбрано в табелi 1.
Табель 1. Основн статистичнi параметри числа тромбоцитiв у дослiджуванiй rpyni собак.
.................................................. параметр
метод середня ктькють [*103/мкл] стандартне вщхилення [х103/ мкл] м1н [х103/ мкл] макс [х103/ мкл]
MS9-5 91,77 51,78 38 204
Фоню 49,02 19,62 11,52 64,32
QBC 55,23 39,63 2 128
Результати, одержат за допомогою аналiзатора MS9-5, виявляли найбшьший розкид. Число тромбоцитiв, означене цим методом, знаходилось у межах норми в приблизно 14% дослщжуваних зразюв. У такому самому вщсотку зразюв одержано результати нижче 50х103/мкл. Великий розкид спостережено також у результатах, одержаних за допомогою методу QBC, при цьому результат, який знаходиться у межах норми, одержано лише в одному
302
випадку. Iншi результати вказували на юнування тромбоцитопени pi3Horo ступеня вираженост^ Бiльшiсть результатiв (близько 53%) знаходилося в iнтервалi 50 - 100х103/мкл., але в чотирьох випадках означене описуваним методом число тромбоцита було крайньо низьке i не перевищало 4х103/мкл. Результати, одержат методом Фоню характеризував вщносно найменший розкид та всi одержанi вартост були меншi нiж 100х103мкл.
Статистичний аналiз при використаннi тесту суми ранпв виявив, що результати, одержат окремими методами, не вiдрiзняються вщ себе в статистично iстотний споЫб (п > 0,01), але в окремих випадках щ вiдмiнностi з клмчно! точки зору були значт Середня рiзниця мiж результатами, одержаними за допомогою методу Фонiо та результатами шших двох методiв, виносила ±42,92х103/мкл., що для результатiв, як розмiщуються в нижнiх межах норми i нижче норми, е вартютю дуже велику, значно переступаючу межi помилки застосовуваних методiв. У крайньому випадку ця рiзниця винесла 169х103/мкл. В одного з дослiджуваних собак з'явилася спонтанна гематурiя. Клiнiчне дослщження а також ультразвукове дослiдження тварини не виявило змiн, якi можуть пояснити цей симптом. Правильт були також у нього параметри плазмового гемостазу (ПТ i АПТТ). У того собаки число тромбоцита, одержане методом Фоню, QBC i при використанш апарату MS9-5 виносила вщповщно: 34,8х103/мкл., 11х103/мкл. i 204х103/мкл. Результати, одержат двома першими методами, виявили кнування тромбоцитопени, яко! посилення могло тлумачити самостшт кровотечi. З того також приводу два першi результати можна б визнати за правдоподiбнi. Число пластинок одержане методом Фоню хiба найбшьш достовiрне, оскiльки у забарвлюваному мазку кровi тромбоцити були розташоват досить рiвномiрно i не спостережено скупчень тромбоцита. Варткть числа тромбоцита, що мктиться у межах фiзiологiчних норм, одержана у вищевказаному випадку iмпедансним методом, можна пщдати пiд сумнiв. Причиною помилки могла бути в даному випадку значна кшькють шизоцтв (близько 0,01%) а також мжроцита [1, 7, 8] у дослщжуваному зразку кровi. Ц елементи могли бути злiченi апаратом як кров'ят пластинки. З другого боку, в шшому випадку, в якому то шизощтоз був значно вищий (0,12%) результат, одержаний апаратом MS9-5, був низький (76х103/мкл). Обидва дослщжуват зразки вiдрiзнялися однак значно числом еритроцита: у першому випадку воно було правильне, у другому спостережено значну анемш (2,17^106/мкл). Тим самим абсолютне число шизоцiтiв у другому зразку не мало такого ктотного впливу на результат числа тромбоцита, як у першому випадку.
Отже, слщ ствердити, що рекомендований у деяких американських тдручниках [5] оцшний метод оцшки числа тромбоцита, полягаючий у помножент середнього числа тромбоцита у полi зору на 12 - 15х103/мкл, не повинен бути нi в якому разi застосований у випадках тромбоцитопени з супроводжуючою !й анемiею. Вiдмiнностi результатiв, одержуват таким чином i результатiв, одержаних методом Фоню, дуже значт. У обстежуванш груш собак середня рiзниця результата виносила 121,6х103/мкл а максимальна
303
рiзниця винесла 230,94х103/мкл. Найбiльшi розбiжностi, зрозумшо, спостережено у собак з розвиненою анемieю, в яких число еритроцита виносило 3х10б/мкл i менш.
Аналiз кореляцiй, яю iснують мiж результатами, одержаними за допомогою трьох дослщжуваних методiв, виявив, що метод Фоню не корелюе в ютотний спосiб з iмпедансним методом, натомiсть у високому ступеш вiн додатнiо скорельований з методом QBC (коефщкнт кореляци = 0,704). Цю залежнiсть можна пояснити фактом, що iмпедансний метод вразливий на змшу розмiрiв клiтин, а принаймш з теоретично! точки зору метод QBC не повинен бути вразливий на вплив змши величини лiчених кров'яних тшець на якiсть результату. У дослщжуваному матерiалi спостережено змшу морфолопчних ознак тромбоцитiв. У вЫх обстежуваних собак вiдсоток великих пластинок перевищував 44% а в деяких випадках тромбоцити, у яких дiаметр бшьший нiж 1/3 дiаметру еритроциту становили 89% уЫх кров'яних пластинок. У 40% собак стверджено наявнкть тромбоцита, яких вимiри наближалися або навт перевершували вимiри кров'яних червоних тшець. У одному випадку вщсоток таких тромбоцитiв виносив трохи понад 50%. Такi великi кров'янi пластинки можуть бути злiченi як кл^ини, що належать до iншого фонду (еритроцити або лiмфоцити) [3]. Це впливае в ктотний спосiб на вiрогiднiсть результатiв.
Очевидно, щоб пояснити, який з описуваних методiв рахування тромбоцита найбшьш достовiрний, слiд було б дослщити ïхнi кореляци з камерним методом, рекомендованим ICSH, однак цей останнш метод не належить до швидких i вiн також обтяжений помилкою, яка дорiвняе школи 30% [1, 7, 8].
Середнш час з моменту забору кровi до моменту одержання результату виносив в окремих методах: Фоню - 22,4 хв., iмпедансний - 20,3 хв i QBC - 15,4 хв. Час, потрiбний для одержання результату, залежить очевидно вщ оргашзаци роботи лабораторiï. Одержаний авторами вщносно короткий час припадаючий для реалiзацiï означення методом QBC виникав з факту, що апарат QBC Vet Autoread становив обладнання амбулатори. Подiбний час в умовах амбулаторiï зафжсували також iншi автори [б].
Кошти виконання одного означення при застосуванш описуваних методiв виносили приблизно: Фоню - < 2 грн., iмпедансний - 1б грн. i QBC - 26 грн.
Висновки:
1. У випадку тромбоцитопени, наявноï в перебку бабезiозу, iмпедансний метод рахування тромбоцита не дае достовiрних результатiв i, не можна його застосовувати в клмчнш практищ.
2. Висока додатна корелящя мiж результатами, одержаними методом Фоню i методом QBC дозволяе вважати, що результати, одержуваш за допомогою цього останнього, достовiрнi i цей метод можна б застосувати але лише як скриншговий метод.
304
Hay^em вiснuк ЛНУBМБT 1мет С.З. fжuцькoгo
Том 10 № 3(38) 4a^una 1, 2008
3. Перевaгaми методу QBC виявилися короткий чaс, потрiбний для отримaння результaту, вaдою - досить зтачта вaртiсть ознaчення.
Лггература:
1. Bomski H. Podstawowe laboratoryjne badania hematologiczne. PZWL, Warszawa, 1989
2. Bordeau P., Guelfi J. F.: Babesioza psów. Mag. Wet. 1998, 1, 35-4l.
3. Charie L.A., Harrison P., Smith C. U., Cobb J. R., Briggs C., Machin S.: Accuracy in the Low Platelet Count Range:A comparison of automated platelet counts on Beckman Coulter high-volume hematology analyzers with the ISLH/ICSH platelet reference method laboratory hematology 2001, l, 236-244
4. Milczak A., Riha T., Abramowicz B., Madej E.: Zaburzenia ukladu hemostazy w przebiegu babeszjozy psów. Medycyna. Wet., 2004, 60, 106l-10l0
5. Nelson R. W. : Small Animal Internal Medicine, Second Edition, Mosby, 1998
6. Paul RI, Badgett JT, Buchino JJ. : Evaluation of QBC Autoread performance in an emergency department setting Pediatr Emerg Care. 1994, 10, 359-6
l. Pawelski S. Diagnostyka laboratoryjna w hematologii. PZWL, Warszawa 1990
8. Vives Cororrons J. L., Agular Bascompte J. L: Manual de técnicas de laboratorio en Hematología. Elsevier, España, 2006
9. Смиян Ю. П.: Спрaвочник специaлистa ветеритарной лaборaтории. Урожaй, Киев 198l
Сmammя нaдiйшлa до pедaкцiï 20.09.2008
305
