CC BY
21
перспективы определения ферментативной Активности глутатионпероксидазы GPx3 в клеточной культуре эндометрия при оценке гестагенной Активности аналогов прогестерона
© А.В. Разыграев1, М.А. Петросян1, К.И. Таборская2
1 ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург;
2 ГНИИИ военной медицины МО РФ, Санкт-Петербург
Ферменты группы глутатионпероксидаз (GPx) наряду с пероксиредоксинами составляют семейство тиолпероксидаз — ферментов, катализирующих восстановление H2O2 и органических гидропероксидов. Это обуславливает их защитную роль при окислительном стрессе. Среди GPx у человека различают восемь форм, пять из которых (GPxl,2,3,4 и 6) — селензависимые.
Наибольшее число фактов, подтверждающих важное значение GPx в функционировании эндометрия матки, относятся к ферменту GPx3 (секретируемая GPx). Промотор гена GPx3 содержит больше вероятных прогестерон-реактивных элементов, нежели эстроген-реактивных; экспрессия гена GPx3 в эндометрии усиливается после овуляции и во время беременности; в строме эндометрия прогестерон усиливает транскрипцию гена GPx3 через транскрипционный фактор HIFla. На лабораторных животных показана сопряженность процессов активации гена GPx3, экспрессии белка GPx3 в строме и имплантации бластоцисты в стенку матки. Подтверждено, что GPx3 снижает концентрацию H2O2 в эндометрии при беременности и при дециду-ализации in vitro. При недостаточной экспрессии Gрx3 в эндометрии предполагается уязвимость репродуктивной функции в условиях физиологического стресса (для обзора см. статью: Разыграев А.В., Матросова М.О., Титович И.А. // Журнал акушерства и женских болезней. - 2017. - Т. 66. - № 2. - С. 104-111).
Поскольку экспрессия GPx3 в эндометрии усиливается под влиянием прогестерона, мы сформировали гипотезу о том, что высокоактивные гестагенные препараты могут повышать экспрессию GPx3 в эндометрии через усиление транскрипции гена GPx3.
В большинстве предыдущих работ основное внимание уделялось изучению экспрессии гена GРx3 и уровня самого белка GPx3. При этом не проводилось полноценное количественное измерение активности GPx3 как
скорости каталитической реакции, отнесенной к количеству белка. Между тем именно каталитическая активность является показателем функциональной активности белка-фермента, а не само количество белка, измеренное, например, иммуногистохимически, и тем более не уровень экспрессии его гена. При скрининге гестагенной активности синтетических аналогов прогестерона в культуре клеток принципиально важным является определение именно ферментативной активности GPx3. При наблюдаемом увеличении экспрессии гена GPx3 и белка GPx3 под действием исследуемого препарата невозможно гарантировать увеличение активности фермента GPx3, так как не исключается влияние того же препарата на экспрессию других генов, продукты которой могут являться ингибиторами активности GPx3.
GPx3 имеет широкую тиоловую специфичность по сравнению с цитозольным ферментом GPxl и, вероятно, по сравнению со многими другими формами GPx. Исследование ферментативной активности GPx3, на наш взгляд, целесообразнее всего проводить с использованием гомоцистеина (HcySH) либо цистеина в качестве тиоловых субстратов вместо глутатиона. В случае сочетания HcySH и пероксида водорода нами получено статистическое подтверждение того, что соответствующая тиолпероксидаз-ная активность принадлежит ферменту GPx3 (Разыграев А.В., Таборская К.И., Петросян М.А., Тумасова Ж.Н. // Биомедицинская химия. - 2016. - Т. 62. - № 4. - С. 431-438) — при этом использовалась плазма крови в качестве источника ферментативной активности.
В наших пилотных исследованиях на лабораторных животных выявлено, что как в го-могенатах цельной матки, так и в гомогенатах эндометрия принципиально возможно определять ферментативную активность тиолпе-роксидаз, причем можно подобрать условия, в которых определяется очень высокая актив-
■ ЖУРНАЛЪАКУШЕРСТВА11ЖЕНСКИХЪ БОЛЪЗНЕЙ ТОМ LXVI СПЕЦВЫПУСК 2017 ISSN 1684-0461
ность. В цельной матке мышей тиолперокси-дазная активность (Me (q1—q3)) составляет 154 (122—214) нмоль ЫсуБЫ/мин/мг белка (субстраты — ЫсуБЫ (0,9-1,1 мМ) и трет-бутилгидропероксид (1,6 мМ), рН — 8,5, ^ — 37 °С). Тиолпероксидазная активность (Me (q1—q3)) в эндометрии матки крыс составляет 112 (98—112) нмоль ЫсуБЫ/мин/мг белка (субстраты — ЫсуБЫ (1,1 мМ) и перок-сид водорода (0,192 мМ), рН 8,5, ^ — 37 °С). Также нами была установлена принципиальная возможность определения гомоцистеин-пероксидазной активности в клеточной культуре эндометрия человека. Таким образом, использование ЫсуБЫ в качестве субстрата для определения ферментативной активности представляет собой перспективный под-
ход для определения ферментативной активности вРхЗ.
Поскольку посттранскрипционный этап синтеза вРхЗ является селензависимым процессом, при проверке гестагенной активности новых синтетических стероидов на культуре клеток эндометрия планируется использование соединения селена (0,1 мкМ селенит натрия) для добавления в культуральную среду.
Селективное определение ферментативной активности вРхЗ при скрининге гестагенных препаратов позволит ответить на вопрос, обусловливают ли тестируемые препараты повышение активности данного фермента, достаточное для антиоксидантной (антипе-роксидной) защиты плода в период имплантации и в постимплантационный период.
эндотелиальная дисфункция и баланс ангиогенных факторов у беременных с артериальной гипертензией
© Т.А. Рождественская, О.В. Лысенко, Л.Е. Радецкая, О.В. Дядичкина, Ж.В. Хотетовская
УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», Витебск, Республика Беларусь
Актуальность работы
Преэклампсия (ПЭ) является частым осложнением беременности с катастрофическими последствиями как для матери, так и для плода. ПЭ является ведущей причиной материнской смертности в развивающихся странах, в развитых — причиной ятроген-ных преждевременных родов и вносит существенный вклад в рост расходов на здравоохранение, связанных с недоношенностью. В развитии ПЭ основная роль отводится воспалению, аномальной плацентации и дисбалансу факторов ангиогенеза. С открытием роли факторов ангиогенеза в патогенезе ПЭ активно разрабатываются новые методы прогнозирования и диагностики данного осложнения, чтобы своевременно повлиять на тактику ведения беременности и тем самым улучшить исходы гестации. В данной статье рассматривается роль сосудисто-эндотели-ального фактора роста (УЕвБ) и воспаления в патогенезе ПЭ и плацентарной недостаточности (ПН) у беременных с артериальной ги-пертензией (АГ).
Цель исследования
Определить значение VEGF и индуцибель-ной NO-синтазы (iNOS) в развитии осложнений гестации у беременных с АГ.
Материалы и методы исследования. Под наблюдением находились 86 беременных женщин. Основную группу составили 46 женщин с АГ 1-й степени, группу контроля — 40 практически здоровых беременных без АГ. У всех пациенток в 18-20, 26-28, 36-38 нед. гестации измеряли активность iNOS и концентрацию VEGF в сыворотке крови. Выбор сроков обусловлен периодами гестации, которые являются критическими с точки зрения нагрузки на сердечно-сосудистую систему, существующим риском развития осложнений со стороны матери и плода. Активность iNOS определяли методом иммуноферментного анализа с тест-системой Uscn, «Life Sciens Inc.» (Китай). Содержание VEGF — методом иммуноферментного анализа с использованием наборов реагентов компаний «Вектор-Бест» (Российская Федерация). Результаты представляли в виде Ме (25 %; 75 %), где Ме — медиана (25 %; 75 %) — верхний и ниж-
ЖУРНАЛЪ АКУШЕРСТВА и ЖЕНСКИХЪ БОЛЪЗНЕЙ
ТОМ LXVI СПЕЦВЫПУСК 2017
ISSN 1684-0461 ■
