CC BY
28
И, в частности, специалист, претендующий на занятие руководящей должности, должен получить системные знания по управленческим и психолого-педагогическим дисциплинам. Поэтому, на наш взгляд, актуальной проблемой является специализация бакалавриата (как это принято во многих западных странах).
Отчасти вопросы специализации подготовки могли бы быть решены на последующих этапах обучения. Однако практически нерешенным является вопрос подготовки специалистов сестринского дела в магистратуре. В настоящее время единственно возможным для бакалавров сестринского дела является обучение в магистратуре по общественному здоровью и здравоохранению. Однако, во-первых, по этой специальности могут обучаться и лица с другим профессиональным образованием, имеющие другой
клеточные технологии для поиска новых аналогов прогестерона
уровень подготовки и другие образовательные потребности. Во-вторых, в ряде западных стран не только существует магистратура, связанная именно с сестринским делом, но она к тому же специализирована по различным направлениям (в том числе в рамках управленческой, клинической, преподавательской работы). То же самое справедливо и в отношении написания кандидатских и докторских диссертаций, которые возможны только по специальности «Общественное здоровье и здравоохранение». То есть необходимо введение соответствующей научной специальности (или нескольких). Эти и другие проблемы требуют своего безотлагательного решения, что позволит готовить различные категории высококвалифицированных кадров среднего медицинского персонала с учетом современных требований науки, образования и здравоохранения.
© М.А. Петросян1, Н.О. Мележникова2, А.П. Домнина3, В.А. Андрюшина4, Л.И. Петрова1, Т.С. Горячая3, Н.Н. Ткаченко1, Т.С. Клейменова1, В.О. Полякова1
1 ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург;
2 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого;
3 ФГБНУ «Институт цитологии РАН», Санкт-Петербург;
4 ФИЦ Биотехнологии РАН, Институт биоинженерии
Актуальность проблемы
В последние десятилетия клеточные технологии находят все более широкое применение в разных областях биомедицины, в том числе для тестирования новых лекарственных препаратов. С этой целью успешно используются постоянные клеточные линии, полученные из опухолевых тканей, а также создаются новые путем трансдукции различных репортерных конструкций в определенную клеточную модель. Такие линии стабильны по своим характеристикам, однако могут значительно отличаться от клеточных линий, полученных из здоровых тканей, вследствие чего оценка воздействия лекарственного препарата может оказаться не вполне корректной. К тому же клеточные культуры, полученные из тканей пациента, позволят разработать новые подходы к персонализированному подбору лекарственных препаратов.
В 2004 году из эндометрия человека была впервые выделена популяция эндометриаль-ных стволовых клеток. К настоящему времени она довольно подробно изучена, а недавние исследования продемонстрировали ее способность к децидуальной трансформации при одновременном воздействии прогестерона и эстрадиола. В экспериментах in vivo способность препарата вызывать дециду-альную трансформацию эндометрия является показателем его гестагенной активности. Представляет интерес изучить способность разных аналогов прогестерона индуцировать децидуализацию в клеточной культуре эндометрия.
Цель исследования
Оценить возможность использования культуры эндометрия человека в качестве клеточной модели для изучения фармаколо-
ЖУРНАЛЪ АКУШЕРСТВА и ЖЕНСКИХЪ БОЛЪЗНЕЙ
ТОМ LXVI СПЕЦВЫПУСК 2017
ISSN 1684-0461 ■
гической активности аналогов прогестерона и скрининга новых препаратов гестагенного ряда.
Материалы и методы исследования
Исследования проведены на клеточных линиях, полученных из образцов эндометрия матки пяти пациенток. Биопсия эндометрия выполнялась с диагностической целью путем проведения гистеро- или лапароскопии, а также аспирационной пайпель-биопсии. Выделение клеток проводилось механическим, а затем ферментативным путем с помощью коллагеназы II типа (Gibco). Клеточные линии культивировали на среде DMEM/F12 с добавлением 10 % эмбриональной телячьей сыворотки (FBS; HyClone, Termo Scientific, Inc.), 1 % пенициллина и 1 % стрептомицина. При достижении 90 % конфлюэнта культуру клеток эндометрия диссоциировали раствором трипсин-версена (1 : 3) и рассеивали в культуральные флаконы 1 : 3. На 5-7 пассажах у всех эндометриальных клеточных линий (ЭКЛ) был определен иммунофено-тип, кариотип, проведена оценка экспрессии рецепторов прогестерона и эстрогена. Иммунофенотипирование линий проводили с помощью проточного цитофлуориметра Beckman Coulter (США). Для кариотипиро-вания использовали QFH метод дифференциального окрашивания. Экспрессию рецепторов прогестерона и эстрогена определяли иммуноцитохимическим методом, а также методом ПЦР. Децидуальную трансформацию эндометриальных клеточных линий проводили с помощью комбинации эстрадиола и прогестерона (Sigma-Aldrich), а также комбинаций эстрадиола и аналогов прогестерона, синтезированных в ФИЦ Биотехнологии РАН. Уровни экспрессии пролактина и инсу-линподобного фактора роста (ИПФР) в куль-туральной среде после инкубации эндоме-триальных линий в присутствии индукторов децидуализации определяли методом ИФА. Клеточную морфологию изучали после окраски гематоксилином и эозином.
Результаты исследования
К моменту проведения эксперимента по индукции децидуализации в условиях in vitro выделенные и культивируемые эндометри-
альные клеточные линии были охарактеризованы. Проточный цитофлуометрический анализ показал положительную экспрессию эндометриальных CD9 и CD 13, а также ме-зенхимных CD31, CD44, CD73, CD90, CD105, CD146 поверхностных клеточных маркеров и отрицательную экспрессию гемопоэти-ческих CD34, CD45 маркеров. В клеточных линиях эндометрия установлена устойчивая экспрессия рецепторов эстрогена и прогестерона. Цитогенетический анализ не выявил аномалий кариотипа в метафазных пластинках клеток изученных нами линий.
Инкубирование ЭКЛ в присутствии комбинации эстрадиола и прогестерона, а также комбинаций эстрадиола и аналогов прогестерона выявило увеличение содержания пролактина и ИПФР в культуральной среде по сравнению с контролем (при культивировании в стандартных условиях). Также отмечалось изменение морфологии клеток, подвергшихся гормональному воздействию. Эти данные указывают на способность эстро-ген-гестагенной комбинации индуцировать децидуальную трансформацию культуры эндометрия в условиях in vitro. Причем используемые в эксперименте высокоактивные аналоги прогестерона оказались более сильными индукторами дифференцировки эндометрия в культуре, чем прогестерон.
Выводы
Проведенное исследование показало, что эндометриальные клеточные линии, полученные нами из биоптата эндометрия человека, имеют мезенхимное происхождение, характеризуются стабильным кариотипом, экспрессируют рецепторы женских половых стероидных гомонов. При воздействии комбинации эстрадиола и прогестерона, а также его аналогов данные клеточные линии успешно подвергаются децидуальной трансформации. Установлено, что высокоактивные аналоги прогестерона способны вызывать более выраженную по сравнению с прогестероном клеточную децидуализацию, что открывает перспективы использования ЭКЛ для поиска новых препаратов гестагенного ряда, имеющих широкое применение в акушерстве и гинекологии.
■ ЖУРНАЛЪ АКУШЕРСТВА и ЖЕНСКИХЪ БОЛЪЗНЕЙ
ТОМ LXVI СПЕЦВЫПУСК 2017
ISSN 1684-0461
