CC BY
14
изучение фармакологической Активности гестагенных препаратов на клеточной культуре эндометрия
© Н.О. Мележникова
Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
Актуальность проблемы
На сегодняшний день опубликовано много работ, посвященных изучению различных гестагенов и эстрогенов, их рецепторному взаимодействию, влиянию на пролиферацию, дифференциацию и апоптоз клеток. Однако влияние женских половых стероидов на органы и ткани до сих пор остается предметом обширных литературных дебатов. Существующие препараты не лишены побочных эффектов, поэтому поиск новых эффективных и безопасных гестагенов и эстрогенов продолжается во всем мире. Клеточная модель позволит за короткое время проводить тестирование большого числа новых кандидатов в лекарственные препараты и отбирать для дальнейших исследований только те соединения, которые в этой модели покажут свою активность.
Цель исследования
Оценить клеточную культуру эндометрия, как модель для поиска молекул с улучшенными биологическими свойствами, а также для проверки фармакологического эффекта различных препаратов на основе женских половых гормонов.
Материалы и методы исследования
Эндометриальная ткань была получена из матки пяти пациенток (25-40 лет) в результате проведения диагностической гистероскопии, аспирационной пайпель-биопсии. Выделение клеток проводилось механическим, а затем ферментативным путем с помощью коллаге-назы II типа (в1Ьсо, США). Клетки культивировали на среде БМЕМ-Б12 с добавлением 10 % эмбриональной телячьей сыворотки (БББ, НуС1опе, США) и антибиотиков (1 % пенициллина и 1 % стрептомицина) в стандартных условиях при 37 °С и 5 % СО2. При достижении 90 % конфлюэнта культуру клеток эндометрия диссоциировали раствором трипсин-версена (1 : 3) и рассеивали в куль-туральные флаконы в соотношении 1 : 3. Для определения концентрации рецепторов
эстрогена и прогестерона эндометриальные клетки на разных пассажах были посеяны на покровные стекла. Для иммуноцитохимиче-ского исследования образцы фиксировали и инкубировали с антителами к рецептору прогестерона (1 : 50, Dako, США) и эстрогена (1 : 60, Dako, США). Этот метод отличается очень высокой чувствительностью и позволяет выявлять даже небольшие количества антигена при минимальном фоновом окрашивании. Анализ экспрессии рецепторов проводился при помощи конфокального микроскопа (Olympus UC30, Япония).
С целью децидуальной дифференцировки эндометриальные клеточные линии инкубировали в условиях воздействия эстрогена, прогестерона, их комбинации, а также комбинации эстрогена и различных аналогов прогестерона в среде DMEM/F12, содержащей 2 % FBS (HyClone, США) и антибиотики (1 % пенициллина и 1 % стрептомицина) в стандартных условиях при 37 °C и 5 % СО2 Контрольные чашки содержали в тех же условиях культивирования, но без добавления в среду гормонов.
Оценка способности полученных эндоме-триальных клеточных линий к дифференци-ровке в децидуальные клетки проводилась на основе различной клеточной морфологии культур с помощью окраски гематоксилином и эозином.
Результаты исследования
В клеточной культуре эндометрия установлена устойчивая экспрессия рецепторов эстрогена и прогестерона. Инкубирование эндометриальной клеточной культуры в присутствии комбинации гормональных препаратов выявило изменение морфологии клеток по сравнению с контролем (при культивировании в стандартных условиях). Клетки, которые подвергались воздействию гестагенных препаратов, стали более округлыми и увеличились в размере. В то время как в контрольной группе преобладающее большинство
■ ЖУРНАЛЪАКУШЕРСТВА11ЖЕНСКИХЪ БОЛЪЗНЕЙ ТОМ LXVI СПЕЦВЫПУСК 2017 ISSN 1684-0461
клеток имело вытянутую форму и плотно прилегало друг к другу, культура формировала характерные завитки. Эти данные указывают на способность эстроген-гестагенной комбинации индуцировать децидуальную трансформацию культуры эндометрия в условиях in vitro.
Выводы
Проведенное исследование показало, что полученные эндометриальные клеточные линии экспрессируют рецепторы женских половых стероидных гомонов. Кроме того, при
воздействии гестагенных препаратов данные клеточные культуры подвергаются дециду-альной трансформации. Этот факт позволяет рассматривать культуру эндометрия как подходящую клеточную модель для тестирования аналогов прогестерона. Результаты, полученные на клеточных линиях, конечно, нельзя экстраполировать на весь организм. Однако если то или иное вещество не вызывает в клеточной культуре изучаемой ответной реакции, то скорее всего в условиях эксперимента in vivo оно также будет проявлять низкую активность.
функциональные особенности м-клеток при беременности
© В.А. Михайлова, Д.О. Баженов, К.Л. Белякова, Е.В. Хохлова
ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург
Актуальность проблемы
ЫК-клетки представляют собой лимфоциты, способные к контактному цитолизу ви-рус-инфицированных и опухолевых клеток и являющиеся источником цитокинов, стимулирующих другие клетки иммунной системы и способствующих развитию иммунного ответа. ЫК-клетки являются основной популяцией лейкоцитов, присутствующих в децидуальной оболочке в первом триместре беременности и принимающих участие в процессе образования и ремоделирования плаценты. Одним из вариантов формирования пула децидуальных ЫК-клеток является их миграция из периферической крови и пролиферация в зоне маточно-плацентарного контакта. ЫК-клетки при беременности могут взаимодействовать с клетками трофобласта, что определяет возможное наличие регуляции пролиферативной активности ЫК-клеток в децидуальной оболочке. Ремоделирование клеточных структур плаценты может осуществляться ЫК-клетками за счет реализации ими цитотоксической активности, направленной против клеток трофобласта. Нарушение регуляции цитотоксичности ЫК-клеток в отношении трофобласта может приводить к развитию такой патологии, как невынашивание беременности, в связи с чем актуальной является разработка метода оценки взаимодействия ЫК-клеток и клеток тро-фобласта при беременности.
Цель исследования
Оценка пролиферативной и цитотоксиче-ской функций ЫК-клеток периферической крови в отношении клеток трофобалста при беременности.
Материалы и методы исследования
Для оценки пролиферативной активности ЫК-клеток обследовали 91 женщину во время и вне беременности: здоровые небеременные женщины в пролиферативной фазе цикла, здоровые небеременные женщины в секреторной фазе цикла, женщины с физиологической беременностью на сроке 6-7 недель. Для оценки цитотоксической функции ЫК-клеток обследовали 89 пациентов: здоровые небеременные женщины, здоровые мужчины, женщины с физиологической беременностью на сроке 6-7 недель. В работе использовали мо-нонуклеары периферической крови и выделенную из периферической крови с помощью проточного сортировщика клеток БасзАпаШ (ББ, США) популяцию ЫК-клеток. Также использовали клетки трофобласта линии 1Ев-3. Оценку пролиферативной активности ЫК-клеток проводили по интенсивности экспрессии белка Ю-67 (ББ, США). Оценку цитотоксической функции ЫК-клеток проводили по количеству нежизнеспособных клеток трофобласта после совместной инкубации с ЫК-клетками.
ЖУРНАЛЪ АКУШЕРСТВА и ЖЕНСКИХЪ БОЛЪЗНЕЙ
ТОМ LXVI СПЕЦВЫПУСК 2017
ISSN 1684-0461 ■
