Влияние NK-клеток на ангиогенез в присутствии фактора роста эндотелия сосудов и основного фактора роста фибробластов

Белякова К.Л.; Шевелева А.Р.

цитотоксическая активность м-клеток в отношении клеток трофобласта в присутствии провоспалительных цитокинов

ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург

Актуальность проблемы

Физиологическое развитие плаценты во многом зависит от дифференцировки и инвазии трофобласта — главного клеточного компонента плаценты. В ходе беременности в зоне маточно-плацентарного барьера формируется специфическое микроокружение и цитокино-вая сеть, которые во многом определяют нормальное формирование трофобласта. Одними из ключевых компонентов этой сложной системы являются натуральные киллеры (NK-клетки) и провоспалительные цитокины.

Цель исследования

Оценить цитотоксический эффект NK-кле-ток в отношении клеток трофобласта в присутствии провоспалительных цитокинов.

Материалы и методы исследования

В качестве модельных объектов использовали клеточные линии NK-92 и JEG-3. В 96-луночный планшет вносили клетки линии NK-92, затем к ним добавляли клетки линии JEG-3, окрашенные красителем CFSE. Соотношение клеток было 5 : 1. Затем вносили индукторы: IL-6 (Sigma, США), IFN-y («Фармаклон», Россия), IL-1b (Sigma, США). После совместной инкубации окрашивали клетки красителем PI. Оценку цитотокси-

ческого эффекта индукторов осуществляли с помощью проточного цитометра BD FACSCantoII (BD, США).

Результаты исследования

Цитокин IL-1 в не оказывал влияния на цитотоксическую активность NK-клеток в использованной нами системе кокультиви-рования. Цитокины IL-6 и IFN-y усиливали базовую клеточную гибель в 1,5 (p = 0,001) и 1,3 (p = 0,01) раза соответственно.

Выводы

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что IFN-y и IL-6 стимулируют цитотоксическую активность NK-клеток в отношении клеток трофобласта. Вероятно, in vivo IFN-y, секретируемый NK-клетками и макрофагами, и IL-6, секретируемый макрофагами и эндометриальными клетками, также могут увеличивать цитотоксическую активность NK-клеток в отношении клеток трофобласта. Однако существующие в децидуальной оболочке механизмы иммунной толерантности контролируют чрезмерную цитотоксическую активность NK-клеток, благодаря чему они могут участвовать в ремоделировании структуры плаценты.

влияние м-клеток на ангиогенез в присутствии фактора роста эндотелия сосудов и основного фактора роста фибробластов

ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург

Актуальность проблемы

Физиологическое развитие плода во время беременности зависит от успешного формирования маточно-плацентарного контакта, сосудистой сети плаценты и децидуальной оболочки, взаимодействия эндотелиальных клеток (ЭК) с клетками трофобласта при ре-моделировании спиральных артерий матки, а также с клетками иммунной системы матери,

локализованными в эндометрии, в частности с естественными киллерами (ЫК). В настоящее время показано, что ЫК-клетки влияют на пролиферацию и инвазию трофобласта, участвуют в индукции иммунологической то-лерантости в системе мать — плод, однако до сих пор остается малоизученным влияние ЫК-клеток на ангиогенез. В связи с этим изучение взаимодействий эндотелиальных клеток

ЖУРНАЛЪ АКУШЕРСТВА и ЖЕНСКИХЪ БОЛЪЗНЕЙ

ТОМ LXVI СПЕЦВЫПУСК 2017

ISSN 1684-0461 ■

и естественных киллеров является актуальной задачей современной биологии и медицины.

Цель исследования

Изучить влияние естественных киллеров на формирование капилляроподобных структур ЭК в присутствии фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и основного фактора роста фибробластов (bFGF).

Материалы и методы исследования

В работе использовали ЭК линии EA.Hy926 и естественные киллеры линии NK-92mi. В лунки 24-луночного планшета с трехмерным матриксом Matrigel (BD, США) вносили 150 000 ЭК линии EA.Hy926 и 2,5 % ЭТС, к части лунок добавляли 55 000 клеток линии NK-92mi как непосредственно в лунку к ЭК, так и в поликарбонатную вставку с диаметром пор 0,1 мкм, а к части лунок — культуральную среду без клеток линии NK-92mi, инкубировали в течение 24 часов. Для активации клеток использовали VEGF и bFGF в различных концентрациях. При помощи микроскопа AxioObserver.Z1 (Zeiss, Германия) и компьютерной системы анализа изображений оценивали длину образованных капилляроподобых структур в микрометрах. Статистический анализ проводили в компьютерной программе Statistica 10 (Statsoft Inc., США). Анализировали относительный прирост клеточных тяжей относительно спонтанного уровня культивирования ЭК при помощи непараметрического критерия Манна — Уитни.

Результаты исследования

При контактном культивировании ЭК c естественными киллерами в присутствии фактора роста эндотелия сосудов в концентрации 1 нг/мл (8,2 (-12,2; 28,3), p < 0,05)

обнаружено увеличение длины капилляроподобных структур, а в концентрации 100 нг/мл (-3,0 (-20,0; 20,9), p < 0,05) обнаружено снижение длины клеточных тяжей (по сравнению с культивированием при тех же условиях в отсутствии цитокина (5,4 (-16,9; 35,1)). При дистантном культивировании ЭК с естественными киллерами в присутствии УЕвБ в концентрации 10 нг/мл (-0,3 (-20,3; 25,5), p < 0,01) установлено увеличение длины клеточных тяжей по сравнению с культивированием при тех же условиях без добавления фактора роста (-4,5 (-21,9;19,5)).

В присутствии ЬБвБ в концентрациях 1 нг/мл (-0,3 (-20,1;28,4), p < 0,05) и 10 нг/мл (-0,3 (-18,5; 28,2), p < 0,05) длина капилляро-подобных структур, образованных при контактном культивировании ЭК с естественными киллерами, была ниже по сравнению с культивированием при тех же условиях в отсутствие фактора роста (5,4 (-16,9;35,1)). При дистантном культивировании ЭК с ЫК-клетками совместно с основным фактором роста фибробластов в концентрации 10 нг/мл (-1,0 (-20,8; 23,0), p < 0,05) обнаружено увеличение длины капилляроподобных структур по сравнению с дистантным культивированием ЭК с естественными киллерами в отсутствие цитокина (-4,5 (-21,9; 19,5)).

Выводы

Естественные киллеры за счет секреторной активности и контактного взаимодействия с ЭК влияют на формирование капилляроподобных структур ЭК линии ЕА.Ну926.

Работа поддержана грантом РНФ № 17-15-01230 «Молекулярно-генетические механизмы регуляции ангиогенеза»

КЛИНИКО-АНАМНЕСТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЖЕНЩИН С ГЕНИТАЛЬНЫМ ЭНДОМЕТРИОЗОМ

ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, кафедра акушерства и гинекологии, Челябинск, Россия

Актуальность проблемы рецидивирующим течением и поражает жен-

Эндометриоз — это многофакторное за- щин преимущественно репродуктивного

болевание, этиология которого до конца возраста. Генитальный эндометриоз занима-

неизвестна. Характеризуется хроническим ет в структуре гинекологической патологии

■ ЖУРНАЛЪ АКУШЕРСТВА и ЖЕНСКИХЪ БОЛЪЗНЕЙ

ТОМ LXVI СПЕЦВЫПУСК 2017

ISSN 1684-0461

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Белякова К. Л., Шевелева А. Р.

Текст научной работы на тему «Влияние NK-клеток на ангиогенез в присутствии фактора роста эндотелия сосудов и основного фактора роста фибробластов»