Влияние макрофагов на ангиогенез Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

влияние продуктов секреции плаценты на трансмиграцию nk-клeток через трофобласт

© д.о. Баженов лаб.-иссл., в.А. Михайлова, м. н. с., л.в. колударова, лаб.-иссл., Е.в.хохлова, лаб.-иссл.

ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», г. Санкт-Петербург, Россия

Актуальность проблемы

Трофобласт — гетерогенная популяция клеток, выполняющая разнообразные функции, в том числе трофическую и барьерную. Эндоваскулярный трофобласт замещает эндотелиальные клетки (ЭК) спиральных артерий матки и приобретает фенотип ЭК. В настоящее время не изучена способность трофобласта контролировать миграцию лейкоцитов, в том числе NK-клеток в децидуаль-ную оболочку.

Цельработы: изучить трансмиграционную активность NK-клеток через монослой клеток тро-фобласта в присутствии секреторных продуктов плацент 1-го и 3-го триместров беременности.

Материалы и методы исследования

Клетки трофобласта линии JEG-3 вносили в верхнюю камеру вставки с поликарбонатным фильтром (размер пор 8 мкм) для 24-луночных планшетов, инкубировали 24 часа. Затем в верхнюю камеру вносили NK-клетки линии NK-92mi. В нижнюю камеру вносили кондиционированную среду, полученную после культивирования эксплантов плацент 1-го и 3-го триместров, физиологическая беременность. Инкубировали 24 часа. Затем NK-клетки из нижней и верхней камеры обрабатывали антителами против CD 45, CD 11а, CD 11Ь, CD 11с, CD 18. Подсчет мигрировавших в нижнюю камеру NK-клеток и анализ экспрессии поверхностных маркеров проводили с помощью проточного цитофлуориметра FACSCantoП № США).

Результаты исследования

Как при спонтанной миграции, так и при миграции в присутствии секреторных продуктов плацент NK-клеток через трофобласт, экспрессия CD 11е, CD 1 1Ь, CD 18 NK-клетками из нижней ка-

меры по сравнению с клетками из верхней камеры была ниже (р < 0,001). При спонтанной миграции также снижался CD lla (р < 0,001).

В присутствии секреторных продуктов плацент 1-го триместра количество мигрировавших клеток увеличивалось в 1,8 раза по сравнению со спонтанным уровнем. В верхней камере в присутствии продуктов плацент 1-го триместра количество NK-клеток, несущих CD 11с, было выше по сравнению со спонтанным уровнем (р < 0,01). Уровень экспрессии CD 11с NK-клетками нижней камеры был выше спонтанного в 1,3 раза.

В верхней камере в присутствии продуктов плацент 3-го триместра количество NK-клеток, несущих CD 11о, было выше по сравнению со спонтанным уровнем (р < 0,01). Кроме того, в верхней камере в присутствии продуктов плацент 3-го триместра количество NK-клеток, несущих CD 11а, было выше как по сравнению со спонтанным уровнем (р < 0,01), так и по сравнению с миграцией в присутствии секреторных продуктов плацент 1-го триместра (р < 0,05). В присутствии продуктов плацент 3-го триместра уровень экспрессии CD 11о NK-клетками из нижней камеры был выше спонтанного в 1,3 раза.

выводы

NK-клетки способны мигрировать через клетки трофобласта. В результате миграции через тро-фобласт меняется фенотип NK-клеток, а именно снижается экспрессия адгезионных молекул как при спонтанной миграции, так и в присутствии секреторных продуктов плацент. Трансмиграция NK-клеток через трофобласт усиливается в присутствии секреторных продуктов плацент 1-го триместра, что может быть связано с повышенной экспрессией NK-клетками CD 11а

влияние макрофагов на ангиогенез

© к.л. Белякова, студ., А.Р. шевелева, студ., М.М. худинян, студ., л.в. колударова, студ., Е.в. хохлова, студ., т.ю. львова, асп.

ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», г. Санкт-Петербург, Россия

Актуальность проблемы

Ангиогенез является важнейшим процессом, за счет которого происходит развитие плаценты, что в свою очередь обеспечивает рост и развитие

плода. Формирование и рост сосудов, а также их ремоделирование зависят от функционального состояния эндотелиальных клеток (ЭК), взаимодействия ЭК с клетками микроокружения и сба-

ЖУРИАЛЪ АКУШЕРСТВА " ЖЕНСКИХЪ Б0ЛМНЕЙ

ТОМ LXV СПЕЦВЫПУСК 2016

ISSN 1684-0461 ■

Международная конференция «Репродуктивная медицина: взгляд молодых — 2016» International conference "Reproductive medicine: young scientists' overlook — 2016"

лансированной секреции цитокинов, ростовых факторов и хемокинов ЭК с клетками иммунной системы, в частности макрофагами. В связи с этим изучение взаимодействия ЭК и макрофагов является актуальной задачей современной медицины и биологии.

Цель исследования: изучение влияния моноци-топодобных клеток линии ТНР-1 на формирование капилляроподобных структур ЭК в присутствии факторов роста, про- и противовоспалительных цитокинов.

Материалы и методы исследования

В работе использовали ЭК линии EA.Hy926 и моноцитоподобные клетки линии THP-1. В лунки 24-луночного планшета с трехмерным ма-триксом Matrigel (BD, США) вносили 150 000 ЭК линии EA.Hy926 и 2,5 % ЭТС, к части лунок добавляли 250 000 клеток линии THP-1, а к части лунок — культуральную среду без клеток линии THP-1, инкубировали в течение 24 часов. Для активации клеток использовали ростовые факторы: VEGF (1, 10, 100 нг/мл), bFGF (1, 10, 20 нг/ мл), PlGF(1, 5, 20 нг/ мл), TGFß (1, 5, 10 нг/ мл); про-и противовоспалительные цитокины: IFNy (40, 400 и 1000 Ед/ мл), IL-4 (10, 50, 100 Ед/мл), IL-6 (1, 2,5, 4 нг/ мл), IL-10 (1, 10, 20 нг/мл), TNFa (10, 50, 400 Ед/мл), IL-1ß (10, 100, 1000 Ед/ мл) и хемокин IL-8 (1, 10, 100 нг/ мл). Для визуализации клеток линии THP-1 использовали краситель Calcein AM (Sigma, США). При помощи микроскопа AxioObserver.Z1 (Carl Zeiss Microscopy, Германия) и компьютерной системы анализа изображений оценивали длину и количество образованных капилляроподобых структур в микрометрах.

Результаты исследования

При монокультивировании ЭК (118,6 ± 0,7) VEGF (125,5 ± 2,6, p< 0,05; 126,5 ± 2,4, p< 0,01;

133.3 ± 2,6, p < 0,001), bFGF (117,9 ± 1,0; 135,0 ± 1,4, p< 0,001; 134,4 ± 1,3, p< 0,001), IL-8 (118,4 ± 1,8; 127,6 ± 2,4, p < 0,001; 145,7 ± 3,8, p < 0,001), IL-1ß (124,1 ± 2,9; 130,9 ± 2,9, p < 0,001; 138,3 ± 5,3, p < 0,001), IL-6 (121,0 ± 2,2; 121,4 ± 2,2; 125,9 ± 2,6, p < 0,01) и TNFa (132,6 ± 2,4, p < 0,001; 120,2 ± 2,8;

130.4 ± 3,1, p < 0,001) во всех концентрациях увеличивали, а TGFß (120,5 ± 4,6; 119,3 ± 4,2; 105,1 ± 4,5, p < 0,01) снижал длину капилляроподобных структур, образованных ЭК. Плацентарный фактор роста (117,8 ± 1,6; 115,9 ± 1,4; 114,6 ± 2,2) не оказал влияния на длину клеточных тяжей по сравнению с культивированием ЭК в отсутствие факторов роста. При этом противовоспалительные цитокины

^-10 в концентрациях 1 нг/мл (115,5 ± 2,0) и 10 нг/мл (111,6 ± 2,7, р < 0,05) и 1Ь-4 в концентрациях 10 Ед/мл (117,7 ± 1,7) и 50 Ед/мл (117,9 ± 3,2) снижали длину капилляроподобных структур, а в концентрации 20 нг/мл (122,2 ± 3,3) и 100 Ед/ мл (124,2 ± 2,3, р < 0,05) соответственно увеличивали. Провоспалительный цитокин №N7 в концентрации 40 Ед/мл (102,1 ± 1,6, р < 0,001) уменьшал длину клеточных тяжей, образованных ЭК, а в концентрациях 400 Ед/мл (119,0 ± 2,0) и 1000 Ед/мл (142,6 ± 3,6, р< 0,001) увеличивал их длину. При совместном культивировании клеток линии ТНР-1 с ЭК длина капилляроподобных структур (125,7 ± 0,8, р< 0,001), образованных ЭК линии ЕА.Ну926, была выше по сравнению с культивированием ЭК в отсутствие клеток линии ТНР-1 (118,6 ± 0,7). Во всех концентрациях VEGF (133,8 ± 2,6, р< 0,05; 141,7 ± 2,9, р< 0,001; 136,9 ± 2,6), bFGF (130,8 ± 1,7, р < 0,001; 129,8 ± 1,8, р< 0,05; 138,6 ± 2,1) и PlGF (124,3 ± 2,0, р< 0,05; 126,22 ± 2,4, р< 0,001; 132,1 ± 2,8, р< 0,001), хемокин 1Ь-8 (121,4 ± 2,7; 129,0 ± 2,4; 144,1 ± 6,4), а также противовоспалительные цитокины ^-4 (121,4 ± 3,0; 126,9 ± 2,8, р < 0,001; 132,3 ± 2,8, р < 0,01) и 1Ь-10 (121,0 ± 3,0; 123,8 ± 3,0, р < 0,001; 125,9 ± 5,1) увеличивали, а TGFp (106,3 ± 5,1, р < 0,05; 93,7 ± 3,6, р < 0,001; 81,4 ± 1,2, р < 0,001), ЮТа (111,9 ± 2,2, р < 0,001; 113,8 ± 2,6; 129,0 ± 2,5) и 1Ь-6 (121,4 ± 4,2; 121,6 ± 3,2; 117,9 ± 2,8) снижали длину капилляроподобных структур, образованных ЭК линии ЕА.Ну926, в присутствии клеток линии ТНР-1 по сравнению с монокультивированием ЭК в присутствии цитокинов. Провоспалительный цитокин 1ККу в концентрациях 40 Ед/мл (111,2 ± 1,5, р < 0,001) и 400 Ед/мл (122,5 ± 1,9) способствовал увеличению длины клеточных тяжей, а в концентрации 1000 Ед/мл (139,2 ± 4,4) уменьшал их длину, а ^-1р в концентрациях 10 Ед/мл (115,0 ± 2,5, р < 0,05) и 100 Ед/мл (125,7 ± 2,6) снижал, а в концентрации 1000 Ед/мл (128,5 ± 3,2) увеличивал длину клеточных тяжей по сравнению с монокультивированием ЭК в присутствии цитокинов.

Выводы

Цитокины и факторы роста оказывают влияние на формирование капилляроподобных структур, при этом макрофаги за счет секреторной активности и контактного взаимодействия с ЭК изменяют секреторный профиль ЭК и характер действия ростовых факторов и цитокинов, тем самым влияя на формирование капилляроподобных структур ЭК линии ЕА.Ну926.

■ ЖУРИАЛЪ АКПИЕРСШ " ЖЕНСШХЪ БОЛМНЕЙ

ТОМ LXVСПЕЦВЫПУСК 2016

ISSN 1684-0461