CC BY
69
665.37.002.612.001.4
ОЦЕНКА ГРУППОВОГО СОСТАВА ФОСФОЛИПИДОВ РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЕЛ И ФОСФОЛИПИДНЫХ ' БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК
Е.А. БУТИНА, Н.Е. КОНОВАЛЕНКОВА, В.В. НОСАЧЕВА, А.В. КСЕНОФОНТОВ, Е.П. КОРНЕНА
Кубанский государственный технологический университет
Растительные масла и жиры - сложная смесь веществ, разделение которой на индивидуальные компоненты представляет собой важную задачу прикладных и научных исследований.
Одним из наиболее доступных, простых в исполнении и достаточно точных методов разделения сложных многокомпонентгных смесей является метод тонкослойной хроматографии (ТСХ). Эффективность данного метода в определяющей степени зависит от вида пластин, используемых для разделения.
До недавнего времени широко используемыми, а также качественными и доступными были пластины БИиМ, выпускаемые фирмой КауаНсг (Чехия). В настоящее время на рынке лабораторного оборудования появились пластины нового поколения, разработанные и выпускаемые ЗАО Сорбполимер (Краснодар) под маркой БоЛГи, которые существенно превосходят пластины БПиГо! и другие имеющиеся аналоги по эффективности разделения смесей и обнаружения их компонентов, а также по чувствительности и воспроизводимости.
По эффективности разделения пластины БотЬИ не уступают одним из лучших и дорогостоящих пластин ТСХ фирмы Мегск. Получаемые пятна индивидуальных веществ отличаются четкостью и компактностью, что позволяет использовать их для количественного определения веществ методом сканирующей денситометрии.
Преимущества пластин БогЪй! обусловлены использованием силикагеля определенного фракционного состава с оптимально подобранным сочетанием удельной поверхности и размеров пор. Кроме того, в составе сорбционного слоя пластин БогЬШ отсутствует органическое связующее вещество, что делает их универсальными для исследования практически всех классов соединений, а также существенно удлиняет срок годности.
Пластины БогЬШ выпускаются нескольких модификаций, различающихся типом подложки (полимерной или алюминиевой), трех типоразмеров (10x10, 10x15, 10x20 мм), с использованием и без использования люминофоров в сорбционном слое.
По разделяющей способности пластины делятся на аналитические и высокоэффективные, предназначенные для проведения количественных исследований со -става смесей.
Опыт использования пластин БогЬШ для разделения различных классов веществ позволил разработать общие рекомендации по их применению. Перед проведением анализа пластины активируют путем термообработки в течение 60 мин при температуре 100-110 °С, после чего их помещают в эксикатор для охлаждения и хранения.
Линию старта выбирают перпендикулярно бороздкам на обратной стороне подложки. Нанесение проб осуществляют микрошприцем, микропипеткой или специальным капилляром на стартовую линию в виде пятен диаметром не более 2 мм. Возможно нанесение проб в виде черты длиной 3-5 мм. Расстояние между пятнами должно быть не менее 10 мм.
Для исключения риска возникновения краевых эффектов при развитии хроматограмм после нанесения пятен срезают углы на 5-8 мм под углом 45 °со стороны, погружаемой в элюент.
При изучении группового состава фосфолипидов методом ТСХ использовали систему растворителей: жюроформ-метанол-вода (65 : 25 : 4) [1].
Образцы в виде 1 %-х растворов фосфолипидов в хлороформе наносили микрошприцем в количестве 1-2 мкл на стартовые точки, находящиеся на расстоянии 10 мм друг от друга и не менее чем на 5 мм выше линии погружения. Развитие хроматограмм продолжали до подъема фронта растворителя до линии, отстоящей от края пла тины на 5-10 мм.
Пластины после развития хроматограмм извлекали из камеры, давали растворителю испариться и помешали в сосуд для проявления или опрыскивали проявителем. В качестве универсального проявителя использовали сосуд, насыщенный парами йода. Хроматограммы также проявляли 5 %-м спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты. Пластинки после опрыскивания нагревали в течение 20 мин при 100-110 °С. Идентификацию полученных пятен проводили по метчикам и специфическим тестам на индивидуальные группы фосфолипидов.
Отмечали полученные пятна, после чего пластины обрабатывали специфическими реагентами. В качестве теста на холинсодержащие фосфолипидыиспользо-
вали реактив Дрангендорфа. Тестом на лизо- и фосфа-тидилсерины, лизо- и фосфатидилэтаноламины служил раствор нингидрина в бутаноле с добавлением уксусной кислоты; на фосфолипиды, содержащие вици-нальные группы (фосфатидилглицерины, фосфатиди-линозитолы) - реактив Шиффа; на фосфатидилинози-толы - аммиачный раствор азотнокислого серебра. Фосфатидные и полифосфатидные кислоты идентифицировали при помощи смеси 0,1 моль/дм3 водного раствора нитрата серебра и 7 моль/дм^ водного раствора аммиака в соотношении 1 : 1 (по объему). Для обнаружения лизоформ фосфолипидов использовали 0,05 %-й водный раствор малахитового зеленого [1,2].
Для групп фосфолипидов в результате разделения
получены следующие значения
Фосфатидилинозитолы 0 (старт)
Лизофосфатидилхолины - ■ 0,06-0,07
Фосфатидилинозитсшы ^ \ ; :... 0,15-0,16
Фосфатидилхолины 0,20-0,22
Фосфатидилсерины ” > - . ■ . 0,30-0,33
Фосфатидилэтаноламины , •• 0,38-0,42
Фосфатидилглицерины 0,54-0,57
Фосфатидные и полифосфатидные кислоты 0,82-0,84
Нейтральные липиды , . . , .. 0,94-0,96
Количественное определение индивидуальных групп фосфолипидов проводили с помощью высокоэффективных ТСХ пластин ЗогЬШ методом сканирующей денситометрии с использованием программы оценки и расчета параметров хроматографии.
Следует отметить, что при количественном определении компонентов смеси методом ТСХ использование денситометрии является одним из наиболее простых и точных приемов. Альтернативные методы количественной оценки связаны с необходимостью удаления с пластины разделенных пятен, содержащих анализируемые вещества, элюирования их с сорбента
и исследования, как правило, с использованием фотометрии. Указанные операции трудоемки, требуют много времени и не обеспечивают достаточной точности.
В настоящее время специалистами ЗАО Сорбполи-мер разработан эффективный денситометр Сорбфил и программное обеспечение, использование которого не требует изменения существующих методик хроматографического разделения.
Денситометр Сорбфил позволяет на основе хроматограмм произвести расчет процентного состава вещества в смеси и (или) расчет концентрации в пробе. Предназначенную для обсчета хроматограмму помещают в осветительную камеру, изображение хроматограммы, экспонируемое видеокамерой, передается на компьютер, записывается, а затем обрабатывается по специальной программе. Возможно также непосредственное сканирование хроматограмм, если для их проявления использовался реагент, позволяющий сохранить начальную интенсивность окраски пятен в течение не менее 30 мин.
Результаты обработки, включая хроматограмму, графики и цифровые данные, сводятся в протокол, который сохраняется в электронном виде или выводится на печать.
Денситометр Сорбфил внесен в Государственный реестр средств измерения (номер госрегистрации 18503-99).
ЛИТЕРАТУРА
1. Арутюнян Н.С., Корнена Е.П. Фосфолипиды растительных масел. - М.: Агропромиздат, 1986.-256 с.
2. Кейтс М. Техника липидологии. - М.: Мир, 1975. -322 с.
Кафедра технологии жиров, товароведения и экспертизы товаров
Поступила 16.01.03 г.
578.08.664.002.235
ПОВЫШЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ СЛАДКИХ БЛЮД
З.Т. БУХТОЯРОВА, Н.А. БУГАЕЦ, О.А. КОРНЕВА,
И. А. БУГАЕЦ
Кубанский государственный технологический университет
Сладкие блюда - традиционное дополнение любого меню. Ими непременно заканчиваются обеды, они являются украшением и завершением праздничного стола. Сладкие блюда приятны на вкус, очень питательны, вызывают чувство насыщения, усиливают деятельность пищеварительных желез и способствуют улучшению пищеварения.
Для приготовления сладких блюд используют фрукты и ягоды или продукты их переработки, а также сахар, шоколад, молоко, сливки, яйца, муку, крупы,
крахмал и другие высококалорийные продукты. Блюда из свежих плодов и ягод, фруктово-ягодных соков, сиропов, пюре, содержащих значительное количество сахара в его наиболее легкоусвояемой форме (глюкоза, фруктоза, сахароза), органические кислоты, минеральные соли, витамины, представляют особую пищевую ценность.
Ассортимент сладких блюд весьма разнообразен. К ним относится и самбук - разновидность мусса с плотной консистенцией, который приготавливают из пло-дово-ягодного пюре с добавлением сахара, яичных белков и желатина.
