CC BY
37
УДК 616.832-004.2-097:612.017.1
Bienap Р. Я., Аюмова В. М., Лаповець Л. €., Кость А. С.
ОСОБЛИВОСТ1 КЛ1ТИННОГО 1МУН1ТЕТУ У ХВОРИХ НА РОЗС1ЯНИЙ СКЛЕРОЗ
Нацюнальний медичний ушверситет ¡мен1 Данила Галицького (м. Льв1в)
Дане дослщження е фрагментом планово! НДР «Клшко-патогенетичн особливост хвороб нервово! системи р1зного ^енезу (розЫяний склероз, ептеп-Ыя, вертеброневролопчн патологи, хвороба Парюн-сона) в мешканц1в ЗахщноукраУнського репону» (№ державно! реестрацп: 0109U000018).
Вступ. РозЫяний склероз (РС), згщно сучасних уявлень, це мультифакторне хроычне прогресую-че захворювання, яке характеризуеться ураженням центрально! нервово! системи, провщним патоф1-зюлопчним мехаызмом якого е запалення та ауто-¡мунн1 процеси [5,7]. Велика юльюсть дослщжень присвячена складному i неоднозначному характеру клЫко-¡мунолопчних взаeмовiдносин при рiзних формах РС [2,4,6]. 1мунолопчы пiдходи в дiагности-цi, терапп, профiлактицi розсiяного склерозу широко використовуеться в практична медицинi. Однак механiзми iмунопатогенезу РС ще не е остаточно розкритими. 1мунн реакцп при цьому захворюванн проявляються вiдхиленнями у функцiонуваннi ^i-тинно! та гуморально! ланок iмунiтету.
Метою дослщження було вивчити стан кл^ин-ного iмунiтету у хворих на розЫяний склероз iз рiз-ним типом перебiгу захворювання.
Об'ект i методи дослщження. Обстежено 68 хворих з верифкованим дiагнозом розЫяний склероз (РС) на основi критерпв MacDonaldetal вiком вiд 19 до 65 роюв (37 жшок, 29 чоловiкiв) [6]. Первинно прогресуючий тип переб^у встановлено у 19 па^ен-тiв, вторинно-прогресуючий - у 23, рем^ючо-реци-дивуючий тип переб^ - у 26 пацieнтiв. Контрольну групу склали 80 практично здорових чоловшв-до-бровольцiв вiком 25-45 роюв. Для дослiджень показ-никiв кл^инного iмунiтету проводили забiр венозно! кровг Визначали популяцiйний i субпопуляцiйний склад лiмфоцтiв кровi з використанням монокло-нальних антитiл до диференцiювальних антигеыв лiмфоцитiв: CD3+ (T-лiмфоцити), CD4+ (Т-хелпери), CD8+ (Т-кiлери/супресори), CD19+ (В^мфоцити), CD56+ (NK кл^ини), в реакцп непрямо! iмунофлю-оресценцп з антитiлами мiченими Ф1ТЦ (реактиви фiрми "Cорбент"). З метою визначення процеЫв ранньо! активацп лiмфоцитiв визначали експресiю на поверхн лiмфоцитiв CD25+. Розраховували ств-вщношення CD4+/CD8+, CD3+/CD19+, CD3+/CD56+, пролiферативних шдекс CD3+/CD25+. Результа-ти дослiджень аналiзували методом варiацiйно! статистики за допомогою програми STATISTICA 6 (Statsoft, USA). Значення представлен у вигля-дi середньоарифметичних чисел (M), стандартних похибок середнього (m), n - об'ем вибiрки. Кожен
показник тестували на нормальний розподт за допомогою критерт Шапiро-Уiлка. У залежностi вщ умов експерименту та розподiлу даних вщмшност1 мiж групами оцiнювали за допомогою парного або непарного t критерю Cтьюдента i непараметричних критерпв Mанна-Уiтнi [1].
Результати дослiджень та !х обговорення. У результат наших дослiджень показано, що при розЫ-яному склерозi загальна юльюсть лейкоци^в кров1 становила 8,64±0,7Г/л, що на 33% бтьше вiд контролю. У пащентв з первинно-прогресуючим типом переб^ РC загальна юльюсть циркулюючих лей-коцитiв була у 1,46 рази бтьше контролю, у груп1 з вторинно-прогресуючим типом - у 1,42 рази, а при рем^уючо-рецидивуючому тип переб^ - на 29% бтьше контролю. За нашими даними, при РC в периферичнм кровi зменшуеться кiлькiсть еозино-фтьних гранулоцитiв, лiмфоцитiв (РC 24,65±2,0%, контрольна група 34,0±1,51%) збiльшена вщносна кiлькiсть нейтрофiлiв до 68,72±2,7 % (контрольна група 55,2±2,0 %), вщносна юльюсть паличкоядер-них нейтрофiлiв ^C 5,21 ±0,4%, контрольна група 2,01 ±0,18%) порiвняно з контролем. Такий процес е характерним для розгорнуто! ктычно'! картини запального процесу [5]. Лейкограма не вiдрiзнялася залежно вiд типу переб^ РC.
Високий рiвень лейкоцитв забезпечуе нормальний рiвень циркулюючих лiмфоцитiв, тому абсолютна юльюсть лiмфоцитiв в усiх групах була в межах норми. Порiвнюючи по групах, у хворих на первин-но-прогресуючу та вторинно-прогресуючу форму переб^ РC абсолютна кiлькiсть лiмфоцитiв не вщ-рiзняeться вiд показника контролю, при рем^ючо-рецидивуючому типi е нижчою на 20 % вщ контрольного значення.
Вивчення фенотипового складу лiмфоцитiв пе-риферично! кровi хворих на РC показало вщмшност1 вiд контролю (табл. 1).
Так, при РC встановлено зниження абсолютно! юлькост T-хелперiв на 28%, збтьшення юлькос-тi Т-цитотоксичних лiмфоцитiв на 38% порiвняно з контролем. Вщповщно вiрогiдно знижуеться стввщ-ношення CD4+/CD8+ (табл. 2). Аналопчна тенденцiя спостер^алася i у групах з рiзним типом перебiгу РC. У бтыхнй мiрi була знижена абсолютна юльюсть CD4+-лiмфоцитiв (на 31%) у груп з рем^уючо-ре-цидивуючим типом переб^. Такий перерозподiп T-хелперiв та Т-цитотоксичних лiмфоцитiв у пери-феричнiй кровi свiдчить про активний запальний процес, про переважання в патогенезi РC запальних механiзмiв.
Таблиця 1.
Фенотиповий склад л1мфоцит1в периферичноГ кров1 хворих на розсшний склероз з рюним типом переб1гу захворювання, М±т
Групи Показники Контрольна група, п=80 Розс!яний склероз, п=68 Первинно-про-гресуюча форма РС, п=19 Вторинно-прогресу-юча форма РС, п=23 Рем!туючий-реци-дивуюча форма РС, п=26
Лейкоцити 6,5±0,6 8,64+0,7* 9,5+0,8* 9,22+0,8* 8,37+0,7*
Л!мфоцити 2,0±0,2 1,83+0,1 1,84+0,09 1,91+0,1 1,59+0,1*
Сй3+, % 59,2±2,1 59,31+2,3 58,25+1,3 58,4+1,25 57,0+1,12
Сй3+, Г/л 1,44+0,08 1,08+0,09 1,1+0,08* 1,25+0,05 1,01+0,09*
Сй4+, % 39,0±1,9 36,3+0,56 36,0+1,08 36,6+1,04 35,72+1,18*
Сй4+, Г/л 0,93+0,05 0,67+0,05* 0,69+0,06* 0,79+0,06* 0,64+0,05*
Сй8+, % 19,6+1,6 21,2+0,31 22,0+0,4* 21,78+0,67 21,17+0,87
Сй8+, Г/л 0,29+0,02 0,40+0,03* 0,41+0,03* 0,47+0,04* 0,38+0,02*
Сй19+, % 18,4+1,6 23,24+0,32* 23,75+0,6* 22,21+0,98* 23,82+0,54*
Сй19+, Г/л 0,36+0,02 0,45+0,02* 0,43+0,04* 0,44+0,04* 0,41+0,03*
Сй56+, % 10,25+1,0 17,7+0,42* 20,5+1,4* 18,41+0,83* 19,56+0,91*
Сй56+, Г/л 0,15+0,01 0,36+0,06* 0,34+0,02* 0,41+0,03* 0,44+0,03*
Сй25+, % 6,5+0,5 25,9+0,55* 24,0+1,1* 26,2+1,8* 24,9+0,95*
Сй25+, Г/л 0,18+0,02 0,42+0,02* 0,39+0,04* 0,48+0,03* 0,42+0,04*
Примггка. * - в!ропднють вщмшност! в|д показника контролю (р<0,05).
С025+л1мфоц|/тв зростала в 1,8 рази пор!вняно з контролем. Нами встановлено, що при розс!яному склероз! посилюеться експрес!я С025+ на л!мфоци-тах, що свщчить про ¿х активацю внаслщок антиген-
Таблиця 2.
Деяк ¡ндекси сшввщношення л1мфоцит1в периферичноГ кров1 хворих на розсшний склероз з р^ним типом переб¡гу захворювання, М±т
Зниження СД3+ характерне для загострення РС а нормал!зац!я при рем!си РС. Одночасно встановлено пщвищення вщносноУ та абсолютно! ктькос-т! В-л!мфоцит!в та ЫК-кл!тин, вщповщно зниження
Групи Показники Контрольна група, п=30 РС,п=68 Первинно-про-гресуючий, п=19 Вторинно-прогре-суючий, п=23 Рем!туючий-реци-дивуючий, п=26
Сй4/Сй8 2,05+0,2 1,71+0,1* 1,63+0,1* 1,65+0,1* 1,69+0,1*
Сй3/Сй19 3,21+0,21 2,55+0,11* 2,45+0,2* 2,6+0,12* 2,39+0,12*
Сй3/Сй56 5,7+0,46 3,35+0,21* 2,84++0,21* 3,17+0,16* 3,07+0,25*
Прол!феративний шдекс 8,0+0,5 2,62+0,1* 2,81+0,1* 2,63+0,12* 2,42+0,15*
сшввщношення С03+/С019+ та С03+/С056+. Деяк автори вказують на те, що при РС не змшюеться ктьюсть В-л!мфоцит!в кров! [3,5]. Наш! дослщжен-ня показали збтьшення ктькост! циркулюючих л!мфоцит!в у хворих на РС незалежно вщ типу пе-реб!гу захворювання. Вщомо, що при РС активац!я Т-хелпер!в I типу призводить до зростання р!вня IЬ- 2, який е фактором прол!фераци л!мфоцит!в, у тому чиогм В-л!мфоцит!в та ЫК-кл!тин. При РС вщ-буваеться пол!клональна активац!я В-л!мфоцит!в. Проанал!зувавши ¡мунограми хворих на РС, можна сказати, що клмтинний ¡мун!тет вщображае активний запальний процес.
До активац!йних антигеыв (диференц!юваль-них), експрес!я яких повязана ¡з проходженням кл!-тинами певного етапу кл!тинного циклу вщносять С025+ [4,6]. С025+ е ранн!м активац!йним маркером, який вщповщае за процес активацп прол!фера-цп л!мфоцит!в, експресуеться на активованих Т- та В-л!мфоцитах. 1ндуктором його експресп на л!мфо-цитах е 11_2. У хворих на розс!яний склероз ктьюсть
112
но! стимуляцп. Активован! Т-л!мфоцити здатн! про-никати через гемато-енцефал!чний бар'ер. Запуск прол!феративно! вщповщ! Т-л!мфоцит!в е каскадним процесом ключову роль в якому вщ!грае 11_-2, як рос-товий фактор, ! рецептор до 11_-2 - молекула С025+. С025+ е а-субодиницею складного рецепторного комплексу до 11_-2. 1з порушенням експресп С025+ на л!мфоцитах пов'язують розвиток ряду авто!мун-них порушень. На експрес!ю С025+ впливае IЬ-2. С025+ також експресують регуляторы (депресорн!) Т-л!мфоцити, функц!ею яких е супрес!я активност автореактивних Т-л!мфоцит!в. Тому збтьшення кть-кост! С025+л!мфоцит!в у кров! можна розглядати, як зростання числа активованих Т-л!мфоцит!в в число яких можуть входити Т-л!мфоцити регуляторы.
Одночасно з тим, С08+л!мфоцити розглядають як цитотоксичн! кл!тини протипухлинного та проти-в!русного !мунного захисту, як! провокують г!пер-чутливють сповтьненого типу. Тому значення !н-дексу С04+/С08+ набувае не !мунорегуляторного значення, а значення шдексу, який вщображае вщ-
ношения регуляторних процеЫв, як представля-ють Т-хелпери, до ефекторних, що забезпечуються Т-цитотоксиними л1мфоцитами. Разом ¡з тим у нау-ковм лiтературi досi зустрiчаються висновки про те, що пщвищення рiвня CD8+лiмфоцитiв свiдчить про супреЫю ¡мунноУ вiдповiдi.
CD56+лiмфоцити е природними ктерами (NK-клiтини), якi можуть безпосередньо знищувати кгмти-ни-мiшенi i е також представниками противiрусного та протипухлинного iмунiтету. У результатi проведе-них дослiджень встановлено збiльшення вщносноУ кiлькостi NK-клiтин при розсiяному склерозi у 1,7 рази, абсолютно'!' ктькост - у 2,4 рази (р<0,05) по-рiвняно з контролем. Вщомо, що IL-2, який синтезу-
еться Т-хелперами I типу, стимулюе пролiферацiю та посилюе цитотоксичну активнiсть NK-^i™^
Висновок
1. При розсiяному склерозi незалежно вiд типу перебiгу захворювання спостеркаеться активацiя кiлерноï та гуморальноУ ланки iмунiтетy
2. У хворих на розЫяний склероз збiльшена кть-кiсть CD25+, що свiдчить про активацю лiмфоцитiв.
Перспективи подальших дослщжень. До^-дження показникiв клiтинного та гуморального ¡му-нiтету хворих на PC е актуальним i перспективним напрямком для вивчення механiзмiв ¡мунопатогене-зу PC.
Л^ература
1. Borovy'kov V. STATISTICA: y'skusstvo analy'za dannyx na komp'yutere. Dlya professy'onalov / V. Borovy'kov. - S-Pb: Py'ter, 2001. - 656 s.
2. Epy'demy'ology'chesky'e y'ssledovany'ya rasseyannogo skleroza / E.Y. Gusev, A.N. Bojko, V.A. Zavaly'shy'n [y' dr.] // Metod. Rekomendacy'y' MZ RF №2003/82. - M., 2003. — 80 s.
3. Berridge M.J. Lymphocyte activation in health and disease / M.J. Berridge // Crit. Rev. Immunol. — 1997. — 17. — P. 155-178.
4. Immunology and Oxidative Stress in Multiple Sclerosis: Clinical and Basic / Genaro G. Ortiz, Fermнn P. Pacheco-Moisés, Oscar K. Bitzer-Quintero [et al.] // Approach Clinical and Developmental Immunology Volume 2013, Article ID 708659, 14 pages. — http://dx.doi.org/10.1155/2013/708659.
5. Leist T.P. The potential role for cladribine in the treatment of multiple sclerosis: clinical experience and development of an oral tablet formulation / T.P. Leist, P. Vermersch // Curr Med Res Opin. — 2007. — № 23. — P. 2667-2676.
6. McDonald W.I. Recommended diagnostic criteria for multiple sclerosis: guidelines from the International Panel on the diagnosis of multiple sclerosis / W.I. McDonald, A. Compston, G. Edan [et al.] // Ann Neurol. - 2001. - V. 50 - P. 121-127.
7. Trapp B.D. Multiple sclerosis: an immune or neurodegenerative disorder? / B.D. Trapp, K.-A. Nave // Annual Review of Neuroscience. - 2008. - V. 31. — P. 247-269.
УДК 616.832-004.2-097:612.017.1
ОСОБЛИВОСТ1 КЛ1ТИННОГО 1МУН1ТЕТУ У ХВОРИХ НА Р03С1ЯНИЙ СКЛЕРОЗ В1вчар Р. Я., Аммова В. М., Лаповець Л. £., Кость А. С.
Резюме. В робот вивчався стан кл^инного ¡муытету у хворих на розаяний склероз (PC) ¡з рiзним типом переб^ захворювання. Обстежено 68 хворих з верифкованим дiагнозом PC на основi критерив MacDonaldetal вком вщ 19 до 65 роюв (37 жкок, 29 чоловшв). Первинно прогресуючий тип переб^ встановлено у 19 пащентв, вторинно-прогресуючий - у 23, рем^уючо-рецидивуючий тип перебку -у 26 па^енпв. Контрольну групу склали 80 практично здорових чоловшв-добровольщв вком 25-45 роюв.
Нами встановлено, що у хворих на розсiяний склероз, незалежно вщ типу переб^ захворювання спостеркаеться активащя ктерно'|' та гуморальноУ ланки ¡муытету та збтьшення ктькост CD25+, що свщчить про активацю лiмфоцитiв.
Ключов1 слова: розаяний склероз, популяцп та субпопуляци лiмфоцитiв.
УДК 616.832-004.2-097:612.017.1
ОСОБЕННОСТИ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ РАССЕЯННЫМ СКЛЕРОЗОМ Вивчар Р. Я., Акимова В. Н., Лаповец Л. Е., Кость А. С.
Резюме. В работе изучалось состояние клеточного иммунитета больных рассеянным склерозом (PC) с различным типом течения болезни. Обследовано 68 больных с верифицированным диагнозом PC на основании критериев MacDonaldetal возрастом от 19 до 65 лет (37 женщин, 19 мужчин). Первично прогрессирующий тип течения установлено у 19 пациентов, вторично-прогрессирующий - у 23, ремитирующе-рецидивирующий тип течения - у 26 пациентов. В контрольную группу вошли 80 практически здоровых мужчин-добровольцев возрастом 25-45 лет.
Нами установлено, что у больных рассеянным склерозом, независимо от типа течения заболевания наблюдалась активация киллерного и гуморального звена иммунитета и увеличение количества CD25+, что свидетельствует об активации лимфоцитов.
Ключевые слова: рассеянный склероз, популяции и субпопуляции лимфоцитов.
UDC: 616.832-004.2-097:612.017.1
PECULIARITIES OF CELL-MEDIATED IMMUNITY IN PATIENTS WITH MULTIPLE SCLEROSIS
Vivchar R. Y., Akimova V. M., Lapovets L. Y., Kost' A. S.
Abstract. Multiple sclerosis (MS), according to modern notions, is a multifactor chronic progressive disease, characterized by the damage to the central nervous system, a significant pathophysiological mechanism of which being inflammation and autoimmune processes. However, mechanisms of MS immunopatho-genesis have not been studied completely.
The condition of cell-mediated immunity in patients with multiple sclerosis with different types of disease course has been studied in the research. In general, 68 patients with verified MS diagnosis based on MacDonald et al criteria aged from 19 to 65 years (37 females, 29 males) have been examined. Primary progressive type of the course has been established in 19 patients, secondary progressive course - in 23, relapsing-remitting course - in 26 patients. Control group included 80 generally healthy men-volunteers aged 25-45 years. Population and subpopulation composition of lymphocytes in the blood was determined using monoclonal antibodies to differential antigens of lymphocytes: CD3+, CD4+, CD8+, CD19+, CD56+. To determine processes of early lymphocyte activation, expression on the surface of CD25+ lymphocytes was estimated. Correlation CD4+/CD8+, CD3+/CD19+, CD3+/CD56+ was calculated, proliferative index - (CD4++CD19+)/ CD25+. The results of investigation were analyzed by the method of variation statistics by means of STATIS-TICA 6 (Statsoft, USA) program.
Based on our research, it has been shown that total leukocyte count in the blood in multiple sclerosis was by 33% higher than in control. In patients with primary progressive multiple sclerosis, total count of circulating leukocytes was by 1.46 times higher than in control, in relapsing-remitting course - by 29% higher than in control. According to our data, in MS amount of granulocytes and lymphocytes decreases in peripheral blood (MS 24.65±2.0%, control group 34.0±1.51%), relative amount of neutrophils is increased to 68.72±2.7 % (control group 55.2±2.0 %), relative amount of stab cells is higher (MS 5.21±0.4%, control group 2.01±0.18%) as compared with control. In patients with MS, the decrease in absolute amount of T-helpers by 28%, the increase in amount of T-cytotoxic lymphocytes by 38% in relation to control has been established. Respectively, CD4+/CD8+ correlation probably decreases. Similar tendency was also observed in groups with different types of MS course. Largely, absolute amount of CD4+-lymphocytes (31%) was decreased in the group with relapsing-remitting type of the course. Reduction of CD3+ is typical for MS exacerbation, while normalization - for MS remission. Simultaneously, the increase in relative and absolute amount of B-lymphocytes and NK-cells has been established, respectively the decrease in CD3+/CD19+ and CD3+/CD56+ correlation has been recorded. Our investigation showed elevation of circulating lymphocytes in patients with MS regardless of the type of the disease course. It has been established that expression of CD25+ on lymphocytes intensifies in multiple sclerosis, indicating their activation due to antigenic stimulation. Elevation of CD25+lymphocytes in the blood can be regarded as the increase in amount of activated T-lymphocytes, which may include regulatory T-lymphocytes. Simultaneously, CD8+lymphocytes are regarded as cytotoxic cells of antitumor and antiviral immune defense, which provoke delayed hypersensitivity. Thus, meaning of CD4+/CD8+ index acquires not immunoregulatory significance, but meaning of the index which presents relation of regulatory processes, represented by T-helpers, to effector ones, provided by T-cytotoxic lymphocytes. CD56+lymphocytes are natural killers, able to destroy target cells directly, and they also represent antiviral and antitumor immunity. Based on conducted investigations, it has been established that relative amount of NK-cells in multiple sclerosis is increased by 1.7 times, absolute amount - by 2.4 times (p<0.05) as compared with control.
Investigation of indices of cell-mediated and humoral immunity in patients with MS is a current issue and perspective direction for the study of MS pathogenesis mechanisms.
Keywords: multiple sclerosis, populations and subpopulations of lymphocytes.
Рецензент — проф. Литвиненко H. В.
Стаття надшшла 12.06.2017 року
