CC BY
8
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
В.Г. Потапенко13, В.В. Байков3, А.В. Горбунова2, А.В. Климович1, Ю.А. Криволапов2, Е.А. Филиппова3, Н.В. Медведева2
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ МИШЕНЕЙ У ПАЦИЕНТОВ СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ГИСТИОЦИТОЗАМИ С ПОМОЩЬЮ МЕТОДОВ
МОЛЕКУЛЯРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
1Санкт-Петербургское государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Городская клиническая больница № 31», г.Санкт-Петербург
2Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
3Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Санкт-Петербургский Государственный Медицинский Университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
Введение. Описана эффективность таргетных препаратов при выявлении мутаций в генах BRAF, MAP2K1 и ALK у пациентов со злокачественными новообразованиями, в том числе гистиоцитозами.
Цель. Определение потенциальных терапевтических мишеней у больных со злокачественными гистиоцитозами.
Материалы и методы. В исследование включено 8 пациентов: 4 мужчины и 4 женщины, медиана возраста 47 (38-69) лет. У всех на основании критериев ВОЗ диагностированы: болезнь Эрдхейма-Честера (n=1), болезнь Розаи-Дорфмана-Дестомбс (n=2), диссеминированная форма гистиоцитоза из клеток Лангерганса (n=2), недетерминированный (n=2) и ALK-позитивный гистиоцитоз (n=l). Для молекулярного анализа использованы биоптаты опухолевой ткани фиксированные формалином и залитые в парафин. Проведено сек-
венирование нового поколения, а также аллель-специфичная полимеразная цепная реакция (ПЦР) для обнаружения мутаций BRAF, MAP2K1 и ALK.
Результаты. У 5 пациентов выполнена ПЦР для определения мутации BRAFV600E. Мутация обнаружена у 1 больного с болезнью Эрдхейма-Честера. У 4 пациентов проведено секвенирование нового поколения. У обоих больных с болезнью Розаи-Дорфмана выявлены мутации MAP2K1 F53L и I103N (класс патогенности 5), при недетерминированном гистиоцитозе обнаружена мутация BRAF c.[1337C>T; 1340 G>A] (класс патогенности 4) и при ALK-позитивном гистиоцитозе - слитный ген SQSTM1-ALк(класс патогенности 5).
Выводы. С помощью методов молекулярной диагностики у 5 из 8 пациентов со злокачественными гистиоцитозами определены потенциальные терапевтические мишени.
А.С. Пшеничный, Н.В. Рисинская, А.А. Юшкова, А.Б. Судариков
СВЯЗЬ ПОТЕРИ ГЕТЕРОЗИГОТНОСТИ 13Q И МУТАЦИИ FLT3/ITD В ГЕНОМЕ
ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК У ПАЦИЕНТОВ С ОСТРЫМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. Острый миелоидный лейкоз (ОМЛ) - это кло-нальное опухолевое заболевание кроветворной ткани. Многочисленные исследования показали, что внутренняя тандемная дупликация фрагмента ДНК околомембранного домена гена FLT3 (13q12.2) (FLT3/ITD - internal tandem duplication) является наиболее частой (от 13% до 32%) мутацией у взрослых больных ОМЛ, в том числе с нормальным кариотипом. В мировой практике критерием включения пациентов с FLT3/ITD в группу высокого риска является аллельное отношение AR (allele ratio) выше 0.5. Величина отношения мутантного аллеля гена FLT3 к дикому зависит от двух параметров - доли опухолевых клеток в образце и формы мутации - гомозиготной или гетерозиготной.
Цель. проанализировать аллельное отношение и аллель-ную нагрузку у пациентов с выявленной мутацией FLT3/ITD и предложить подходы для коррекции этих параметров с учетом количества опухолевых клеток в образце и зиготности мутации.
Материалы и методы. В ретроспективный анализ включен материал от 36 больных ОМЛ, имеющих мутацию FLT3/ITD, выявленную методом ПЦР с последующим фрагментным анализом ПЦР-продуктов на генетическом анализаторе ABI 3130 (Thermofisher Scientific, USA). Контрольная группа пациентов с ОМЛ без мутации FLT3/ITD включала 27 человек, для которых тоже было проведено исследование STR-профилей опухолевой ДНК. Для двоих пациентов с мутацией FLT3/ITD и выявленной потерей гетерозиготности в sTR-локусе D13S317 (13q31.3) был выполнен хромосомный микроматричный анализ (ХМА). Для каждого больного рассчитано отношение аллельной нагрузки к бластозу, и при величине отношения больше 0.5 (в бластах
преобладает мутантный аллель) проведен сравнительный анализ STR профилей данного образца ДНК и контрольного, выделенного из крови или костного мозга этого пациента в ремиссии или буккального эпителия, если ремиссия не доказана.
Результаты. В контрольной группе потеря гетерозиготности в локусе D13S317 была выявлена только у одного пациента из 27 (3.7% против 22% в группе с мутацией FLT3/ITD, р=0.038). Из 8 пациентов с высоким аллельным отношением и аллельной нагрузкой FLT3/ITD у 6 обнаружена потеря гетерозиготности в локусе STRD13S317 (13q31.3), у двоих пациентов этот локус был гомозиготным и в контрольной ДНК. У двух пациентов, которым удалось провести ХМА, была выявлена однородительская дисомия 13q (потеря гетерозиготности с сохранением копийности ДНК l3q). Для всех восьми пациентов были отмечены рецидивы заболевания (в том числе множественные) даже после трансплантации костного мозга. Однако, в рецидивах у некоторых пациентов AR не превышало 0.5 из-за того, что бластоз в момент анализа был еще низким, и соответственно, вклад аллелей дикого типа из здоровых клеток - высоким. Поэтому нами предложен дополнительный параметр - отношение аллельной нагрузки к бластозу, помогающий выявить гомозиготную форму мутации при низком бластозе. Например, при бластозе 25% и гомозиготной форме мутации AR будет 0,33 (отношение суммы мутантных аллелей к сумме диких), аллельная нагрузка 25% (отношение суммарного флуоресцентного сигнала от ампликонов всех мутантных аллелей к сумме сигналов всех аллелей). При делении на долю бласт-ных клеток в образце мы получаем долю мутантных аллелей в
