ОПРЕДЕЛЕНИЕ SH-ГРУПП И ДИСУЛЬФИДНЫХ (—S—S—) СВЯЗЕЙ В БИОЛОГИЧЕСКИХ СУБСТРАТАХ АМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ ТИТРОВАНИЕМ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ственными смесями, показали, что хлорид натрия мешает процессу конденсации фталевого ангидрида с фенолом. Положительные результаты получены выпариванием водной вытяжки досуха с последующей обработкой остатка 3 раза по 2 мл перегнанным этиловым спиртом. Переносят по 1—2 мл в пробирку с воротничком, удаляя каждый раз спирт погружением в кипящую водяную баню, затем добавляют 0,3 мл 20% раствора фенола и поступают как указано выше.

Исследование вытяжек из названных выше марок резины и сосок в модельные среды (физиологический раствор) показало отсутствие фталевого ангидрида, тогда как водные вытяжки тех же образцов сосок дали положительные результаты. Очевидно, хлорид натрия затрудняет миграцию фталевого ангидрида в окружающую среду, что имеегг особое значение для сосок, модельной средой которых является физиологический раствор. Подтверждением правильности полученных результатов явились опыты по определению фталевого ангидрида в физиологическом растворе методом добавки.

Выводы

1. Разработана методика определения фталевого ангидрида в препарате и водных вытяжках, основанная на реакции конденсации с фенолом в сернокислой среде.

2. Определение фталевого ангидрида, мигрирующего в физиологический раствор, проводят после обработки сухого остатка этиловым спиртом. Хлорид натрия уменьшает миграцию фталевого ангидрида из резины разных марок в водные вытяжки.

ЛИТЕРАТУРА

Коган И. Б. Полярографический анализ в промышленно-санитарной химии. М., 1961.— Кравченко Т. И. В кн.: Гигиена применения полимерных материалов и изделий из них. Киев. 1969, в. 1, с. 505,— Чемоданова Л. И. Гиг. и сан., 1952, № 2, с. 48.

Поступила 8/VII 1970 г.

УДК 616-008.932.691-074:543.257.5

ОПРЕДЕЛЕНИЕ SH-ГРУПП И ДИСУЛЬФИДНЫХ (—S-S-) СВЯЗЕЙ В БИОЛОГИЧЕСКИХ СУБСТРАТАХ АМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ ТИТРОВАНИЕМ

Г. В. Селюжицкий, канд. мед. наук В. П. Тимофеев, A.M. Никон

Кафедра общей гигиены Ленинградского санитарно-гигиенического медицинского

института

В составе биологических субстратов сера обычно находится в виде сульф-гидрильных (SH) групп, дисульфидных (—S—S—) и сульфидных (—S—S—) связей (Б. И. Гольдштейн). Из всех функциональных групп белковых тел наибольшей реактивностью обладают SH-группы (Х.С. Коштаянц). Изучение биологической роли SH-групп белков способствует выявлению механизма сложных патологических реакций, возникающих при воздействии на организм некоторых физических факторов и значительной группы химических веществ. Известно также, что отдельные химические вещества под действием энзимов в организме могут превращаться в активные окисляющие агенты, способные вступать во взаимодействие с наиболее реактивными белковыми структурами ферментных систем — SH-группами, переводя последние в неактивные —S—S— соединения. Наряду с этим многие химические соединения являются сильными восстановителями —S—S— соединений в SH-группы.

Поэтому широко применяемое в токсикологической практике определение количества одних только ЭН-групп не всегда может дать необходимые сведения для суждения о механизме действия изучаемого вещества на организм. Параллельное же определение БН-групп и —в—Б— связей дает дополнительную информацию о состоянии тиоловых систем в организме.

Однако одновременное их определение в токсикологической практике тормозится отсутствием достаточно простых, точных и быстрых в исполнении методов. В качестве основы для разработки способа определения — Б—Б— связей мы воспользовались методикой, предложенной Картером в модификации В. И. Окулова, который применил ее для изучения —Б—Б— связей в сывороточном альбумине, у-глобулине и яичном альбумине. С целью широкого применения этого метода в санитарно-токсикологических экспериментах при исследовании цельной крови, а также гомогенатов тканей были определены оптимальные условия восстановления —Б—Б— связей в БН-группы.

Для определения БН-групп нами использовался распространенный и достаточно чувствительный метод амперометрического титрования азотнокислым серебром на аппарате ПАТ. Восстановителем был перекристаллизованный и свежеприготовленный насыщенный раствор сульфита натрия. Опытным путем установлено, что оптимальным является количество насыщенного раствора сульфита натрия, равное 0,1 мл. При меньшем объеме восстановителя не происходило полного восстановления —Б—Б— связей. Добавление же больших объемов резко изменяло электропроводность аммиачного буфера, в котором велось определение.

Установлено также, что инкубировать гемолизат крови или гомогенат ткани при восстановлении —Б—Б— групп совсем не обязательно, так как это хорошо происходит и при нормальной комнатной температуре. Уже через 10 мин. после прибавления восстановителя можно проводить определение —Б—Б— связей. Ценность предлагаемой модификации заключается в том, что определение этих связей проводится в той же пробе гемолизата или гомогената, что и ЭН-групп.

Ход определения следующий. В пробирку наливают 1,9 мл дистиллированной воды, туда же помещают 0,1 мл крови. После определения количества БН-групп в пробу прибавляют 0,1 мл насыщенного раствора сульфита натрия, который восстанавливает —Б—Б— связи в сульфгидрильные. Титрование БН- и —Б—Б— групп проводится в 25 мл буферной смеси, содержащей 0,01 М раствора ЫН4ОН и 0,08 М раствора ЫН4Ы03, при каломельном электроде сравнения, азотнокислым серебром (В. В. Соколовский; Г. В. Селюжицкий и соавт.).

Определение БН-групп и —Б—Б— связей в гомо'генатах органов проводится следующим образом. Навеска органа 100—120 мг (надпочечники целиком) гомогенизируется на холоду в 2 мл воды. Для амперометрического титрования используется 0,1 мл гомогената ткани. Титрование проводится аналогично описанному в крови. Разница между количеством БН-групп при втором и первом титровании составляет истинное содержание —Б—Б— связей.

Расчет после графической обработки результатов титрования проводится по формулам:

А) для гемолизата крови:

ЭНмг ,/о=^а8мо^;л-в-о.озз>

где А — разведение крови; В — пересчет на 100; С — количество разведенной крови, взятой для титрования (в мл)-, Э — количество крови, взятой для анализа (в мл)\ 0,033 — мкмоль БН-групп, соответствующее 1 мг%.

Б) для гомогенатов тканей:

с« « о/ _ мл АбЫО.,-/! •£•<).033 о п мг %--с о-•

Содержание SH-групп и —S—S—связей в цельной крови и гомогенатах тканей (Mim)

где С — гомогенат (в мл), взятый для титрования; О — навеска ткани для приготовления гомогената.

Содержание БН-групп и —Б—Э— связей в цельной крови и гомогенатах тканей у интактных животных, определенное по предлагаемому методу, представлено в таблице.

В заключение следует отметить, что предлагаемый метод изучения БН-групп и —Б—Б— связей в одной пробе значительно сократит время исследования, особенно при массовых определениях. Кроме того, он требует небольшого количества биологического материала для анализа. Простота и доступность предлагаемого метода очевидны. Это позволит шире использовать его в токсикологической практике, особенно в тех случаях, когда содержание БН-групп и —Б—Б— связей в крови или органах является спе-•цифическим показателем интоксикации.

Субстрат SH-группы (в мг%) S--S —связи (в мги)

Цельная кровь..... 130,65^0,69 15,22—0,47

Гипофиз ....... 103,9— 1,3 112,0— 14,3

Надпочечники . . . . 213,7—7,1 35,8^2,1

Обонятельная доля мозга 53,1—2,7 • 54,0^2,4

ЛИТЕРАТУРА

Гольдштейн Б. И. Успехи совр. биол., 1954, т. 38, в. 3, с. 280.— Коштоянц X. С. Белковые тела, обмен веществ и нервная регуляция. М., 1951.— Окулов В. И. Лабор. дело, 1965, № 10, с. 591.— Селюжицкий Г. В., Смоль-ский A.B., Шварцман И. Е. В кн.: Вопросы гигены населенных мест. Л., 1965, т. 81, с. 97 — Соколовский В. В. Лабор. дело, 1962, № 8, с. 3.

Поступила I0/VII 1970 г.

УДК 613.36:683.21-074:543.544

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭФИРСУЛЬФОНАТА В ВИНОГРАДЕ, ВИНОГРАДНОМ СОКЕ, ВИНЕ И ВОДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Т. И. Голубев, Л. Г. Владимирова, Е. М. Колобродова

Всесоюзный научно-исследовательский институт виноделия и виноградарства «Магарач»,

Ялта

/

Основываясь на данных К. С. Стефанского, Ц. Л. Брауде и К. К. Си-галовской, мы разработали доступный хроматографический (в тонком слое) микрометод определения эфирсульфоната в винограде, виноградном соке, вине и воде. Сущность метода заключается в экстракции инсектицида органическим растворителем (Н-гексан, петролейный эфир), очистке экстракта от коэкстрактивных веществ, хроматографировании на окиси алюминия в смеси Н-гексана и ацетона и проявлении аммиачным раствором азотнокислого серебра в Уф свете.

При определении эфирсульфоната в винограде 100 г раздавленных ягод помещают в коническую колбу на 500 мл и трижды экстрагируют пестицид петролейным эфиром (по 30 мл) на аппарате для встряхивания в течение 15 мин. После фильтрации и промывания навески эфиром объединенный экстракт 15—20 мин. сушат 10 — 20 г безводного сернокислого натрия. Из экстракта, отделенного фильтрацией, полностью отгоняют растворитель под вакуумом. Сухой остаток количественно переносят при помощи серного эфира в коническую центрифужную пробирку, эфир удаляют на водяной бане при 45°, в пробирку добавляют 0,5 мл н-гексана и 1 мл концентрированной серной кислоты. Содержимое пробирки перемешивают стеклянной