CC BY
4
да, имеющая рН 6,5—7,0. При рН 4,0 и 8,5 отмечается гибель до 50 % тетрахимен, а при рН 3,0 и 9,7 — соответственно до 100 и 70%, причем в среде с рН 3,0 100% гибель инфузорий наступает в течение 30 мин после посева. Учитывая, что многие вещества способны влиять на рН питательной среды, контроль рН необходимо осуществлять на всех этапах проведения опытов по изучению токсичности веществ [3].
В токсикологических исследованиях, используя в качестве критерия оценки токсичности веществ задержку роста культуры инфузорий, учет результатов рекомендуют проводить через 18—20 ч экспозиции с исследуемым веществом. Мы в своих опытах обычно применяем примерно такую же (18—24 ч) продолжительность экспозиции, так как чем длительнее исследование, тем больше вероятность испарения исследуемого вещества из культуральной жидкости, а при меньшей продолжительности исследований обычно нарастание плотности культуры недостаточно велико, что затрудняет учет результатов.
Между количеством инфузорий, внесенных при посеве и выросших через сутки, имеется прямая корреляция: при культивировании в колбах г=0,84, в пробирках г=0,63. При отсутствии в среде токсичных веществ или других неблагоприятных воздействий на культуру через 24 ч после посева количество простейших, внесенных на 1 мл питательной среды, увеличивается при культивировании в пробирках приблизительно в 13—14 раз. Обычно при посеве мы вносим около 20 тыс. инфузорий на 10 мл питательной среды, т. е. исходная плотность в пробирке устанавливается в пределах 2000 особей/мл.
Для повышения плотности культуры инфузорий при изучении их биологических свойств используют аэрацию культуры воздухом. В токсикологических исследованиях этот метод применим, если изучают нелетучие вещества, например микроэлементы. В то же время пропускание газов через культуру, видимо, может быть одним из методов их токсикологического исследования. Так, пропуская через культуру инфузорий отработанные газы двигателя автомобиля, мы наблюдали разную степень задержки роста культуры в зависимости от условий прокачки газа. Но к таким исследованиям, на наш взгляд, надо подходить весьма критично, так как остается открытым, например, вопрос о том, какие компоненты прокачиваемых смесей и в каком количестве были поглощены питательной средой, а какие и сколько прошли через нее и т. д.
В заключение необходимо отметить, что в целом инфузории просты в культивировании и методы работы с ними как с тест-объектом могут быть реализованы в любой санэпидстанции, где имеется бактериологическая лаборатория. Уже сейчас имеются методические разработки, позволяющие использовать инфузорий тетрахимен для ускоренного ориентировочного определения токсичности химических веществ [3, 4] ^и вытяжек из полимерных материалов [4]. Дальнейшие исследования, вероятно, дадут возможность в большей мере конкретизировать роль и место, а также .установить наиболее, целесообразную область применения биологических тест-объ-ектов, в том числе и инфузорий тетрахимен, в токсикологических исследованиях.
Литература
1. Игнатьев А. Д., Шаблий В. #. Использование инфузорий тетрахимена пириформис как тест-объект при биологических исследованиях в сельском хозяйстве.— М., 1978.
2. Корнеева Н. А. // Ускоренное прогнозирование отдаленных проявлений реакции живых систем на химические воздействия.—Рязань, 1983.—С. 50—52.
3. Ускоренная ориентировочная оценка токсичности веществ с использованием в качестве тест-объекта инфузорий тетрахимен: Метод, рекомендации.— Таллинн, 1988.
4. Ускоренный способ определения токсичности химических веществ и вытяжек из полимерных материалов: Метод, рекомендации.— Минск, 1982.
5. Этлин С. Н., Лахонина Г. М., Ирлина И. С. и др. // Гиг. и сан.— 1987.—№ 9.—С. 80—82.
6. Hutner S. И. // The Biology of Tetrahymena.— Strousberg PA, Dowden, 1973.—P. 411—433.
7. Shultz T., Wayne, Moulton B. A. // QSAR Environ. Toxicol. Proc. Workshop Quant. Struct.— Activ. Relat. Environ. Toxicol.—Dordrecht, 1984.—P. 337—352.
8. Wilkins M., Mcardle E. // Trans. Amer. Microbiol. Soc.— 1980.—Vol. 99, N 2.— P. 232.
9. Yoshioka Yoshitada, Ose Yoiiki, Sato Takahiko // Sei. Total. Environ.— 1985.—Vol. 43, N 1—2.—P. 149—157.
i ê « • "^^íe^^lds Щ - - ' W * : * ' •
Поступила 22.11.89
© Ф. М. ФАЗЛИЕВА, Н. Н. ДРЮЧИНА, 1991 УДК 614.7:615.917.099]-092.9-074
Ф. М. Фазлиева, Н. Н. Дрючина ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕНАЗОЛА II В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
НИИ санитарии, гигиены и профзаболеваний Минздрава Узбекской ССР, Ташкент
Д. Ж у уг г • V .. • ' . ^' * . ! г I % : у • , • • . 4 е / 1 Ч
_ * > Р| .'4 ' * \ I. Л -»-. . - | ^ " ;* г » 1 <Ц • *у • _х -•« • 1 . • , л * \ • ■ , . •*' • в , Г'. г ш- • . _ •
Беназол II (тинувин II) используют как светостабилизатор полистирола, поливинилхлорида, полипропилена, ацетата целлюлозы, полиамидных волокон, лакокрасочных покрытий на основе перхлорвиниловых смол и термостабилизатор полиамидов.
Действующее вещество препарата — 2-(2'-гидрокси-5'-ме-тилфенил)бензтриазол.
Химически чистое вещество представляет собой кристаллический порошок бледно-желтого цвета, молекулярная масса 225,22, содержание основного вещества 98—100 %; растворим в ацетоне, бензоле, ксилоле, хлороформе, водных растворах щелочей. Температура плавления 129 °С. Агрегатное состояние в воздухе — аэрозоль. Препарат относится к группе гетероциклических соединений ароматического ряда.
Получают беназол II диазотированием о-нитроанилйна, сочетанием полученного диазосоединения с п-крезолом и последующим восстановлением.
Имеются единичные источники литературы [1, 4, 5], описывающие токсикологические свойства беназола II. Наши исследования показали, что беназол II относится к группе малоопасных соединений [2, 3]. Поскольку в литературе нет
сведений о методах определения беназола II, целью настоящей работы являлась разработка метода определения данного соединения в объектах окружающей среды — возХухе, воде, почве.
Метод основан на извлечении действующего вещества препарата из исследуемой пробы органическим растворителем (ацетоном). Идентификацию и количественный анализ беназола II осуществляли методом газожидкостной хроматографии на хроматографе, снабженном детектором по захвату электронов. Хроматографирование проводили на стеклянной колонке длиной 1,5 м с внутренним диаметром 3 мм, заполненной хроматоном-Ы-Бирег (0,16—0,20 мм). В качестве газа-носителя использовали азот, расход котопого равен 40 мл/мин. Расход воздуха 300 мл/мин. Температуре испарителя 250 °С, термостата колонок 200 °С, рабочая шкала электрометра 2» Ю-10 а, скорость диаграммной ленты 240 мм/ч, время удерживания 3 мин 36 с. Подготовку проб к анализу проводят в зависимости от характера изучаемого объекта.
Воздух. Воздух со скоростью 10 л/мин аспирируют в течение 30 мин через фильтродержатель с фильтром «синяя лента». Фильтр переносят в стакан и экстрагируют беназол II
ацетоном дважды порциями по 10 мл в течение 15 мин. Экстракты объединяют и отгоняют на ротационном испарителе до объема 0,3—0,5 мл, затем подсушивают на воздухе досуха. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл ацетона и вводят в испаритель хроматографа 2 мкл этого раствора.
Вода. 200 мл исследуемой воды помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют бензолом порциями 30, 20 и 20 мл. Экстракты объединяют и сушат над 8—10 г безводного сернокислого натрия, .'фильтруют. Затем фильтр и безводный сернокислый натрий промывают бензолом в количестве 5—10 мл, тщательно отжимают стеклянной палочкой, присоединяют промывную жидкость к фильтрату. Объединенный раствор упаривают на вакуум-ротационном испарителе до объема 0,3—0,5 мл. Остаток бензола удаляют в вытяжном шкафу досуха. К сухому остатку добавляют 0,5 мл ацетона и 2 мкл полученного раствора используют для анализа.
Почва. 50 г исследуемого образца почвы помещают в коническую колбу, увлажняют 10 мл воды, заливают 80 мл ацетона и встряхивают на механическом встряхивателе в течение 15 мин. После отстаивания экстракт фильтруют через плотный бумажный фильтр со слоем безводного сернокислого натрия (8—10 г), упаривают до объема 2—3 мл при температуре водяной бани 70 °С. Далее экстракт очищают на хро-матографической колонке с окисью алюминия, используя в качестве элюента 50 мл бензола. Элюат количественно переносят в колбу вакуум-ротационного испарителя и испаряют растворитель до объема 0,3—0,5 мл. Остаток бензола удаляют в вытяжном шкафу. Далее пробу готовят к анализу, как пробу воздуха.
Диапазон определяемых концентраций для воды 0,025— 0,25 мг/л, почвы 0,01 — 1 мг/кг; для воздуха минимальное определяемое количество 0,01 мкг в 2 мкл.
Количественное определение проводят методом расчета по соотношению высота пика — концентрация. Для этого до и после анализа проб в хроматограф вводят по 2 мкл стандартного раствора, содержащего 10 мкг/мл беназола II, измеряют высоту пиков.
Разработанный нами метод применен нами для оценки состояния воздушной среды производственных помещений при изучении условий труда рабочих, а также для характеристики производственных сточных вод в процессах производства беназола II. Кроме того, данный метод был использован при проведении экспериментальных исследований по обоснованию ПДК изучаемого соединения в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе и воде водоемов.
Литература
1. Бройтман, А. Я., Путилина Л. В. // Гигиена и токсикология высокомолекулярных соединений и химического сырья, используемого для их синтеза.— М.; Л., 1966.— С. 207.
2. Дрючина И. И. // Актуальные вопросы антропогенетики и токсикогенетики.— Ташкент, 1988.— С. 26.
3. Дрючина И. И. // Актуальные вопросы токсикологии.— Пермь, 1989.— С. 50.
4. Кельман Г. Я. Токсические свойства химикатов-добавок для полимерных материалов.— М., 1974.— С. 78.
5. Путилина Л. В. // Токсикология и гигиена высокомолекулярных соединений и химического сырья, используемого для их синтеза.— М.; Л., 1966.
Поступила 12.03.90
М. В. ПИСЬМЕННАЯ, 1991
УДК 614.7:615.285.7):632.951-074:543.544
М. В. Письменная
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРИФУМИНА И ПРОДУКТОВ ЕГО ПРЕВРАЩЕНИЙ В СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУРАХ, ВОДЕ, ПОЧВЕ
ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимеров и пластических масс, Киев
Трифумин (трифмин, трифлумизол) — перспективный фунгицид .[действующее начало — 4-хлор-а,а,а-трифтор-Ы-1 - (1Н-имидазол-1 -ил) -2-пропоксиэтилиден-о-толуидин], применяемый за рубежом для опрыскивания растений и протравливания семян. В СССР он разрешен к применению на яблоне и черной смородине, проходит испытания на других культурах, в том числе на зерновых. Фирмой — изготовителем препарата радиометрическим методом показано, что основными продуктами превращений трифумина в сельскохозяйственных культурах и объектах окружающей среды является 1-(4-хлор:2-2-трифторметилфенил)-2-пропоксиамидин (I) и Ы-(4-хлор-2-трифторметилфенил)-1-пропоксиацетамид (II). На степень и характер гидролиза трифумина значительное влияние оказывают рН, температура и солнечная радиация. В связи с этим при изучении применения препарата в различных климатических условиях, на различных культурах целесообразно раздельное определение трифумина и соединений I, II.
Для определения остаточных количеств трифумина в растениях фирмой — изготовителем препарата предложена мето-
I
дика, основанная на экстракции его из исследуемого объекта
водно-метанольным раствором, реэкстракции в дихлорметан, концентрирование и последующем 1,5-часовом гидролизе до соединения II. Последнее из реакционной смеси выделяют с водяным паром, реэкстрагируют в н-гексан, концентрируют и чистят на колонке С18 Бер-рак. Аналитическое определение II проводят методами газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с детектором по захвату электронов (ДЭЗ) на набивной колонке с неподвижной фазой Силикон ДС-200 или высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с УФ-детек-
тором. Апробация метода показала, что он воспроизводим, чувствительность его соответствует указанной в методике (0,02 мг/кг). Однако данный метод трудоемок (стадия подготовки к аналитическому определению занимает не менее
4 ч), требует применения токсичного реактива метанола и дефицитного сорбента для очистки экстракта. Существенным недостатком метода является то, что трифумин и продукты его гидролиза I и II определяются суммарно.
Учитывая, что в отечественной практике контроля остаточных количеств пестицидов методом ГЖХ наиболее широко используется неполярная фаза БЕ-ЗО и среднеполярная ХЕ-60 [3, 4], мы исследовали возможность применения этих фаз для определения трифумина и соединений I, II. Показано, что методом ГЖХ с ДЭЗ при скорости газа-носителя (азота) 60 мл/мин на колонке длиной 1 м с неподвижной фазой
5 % БЕ-ЗО на хроматоне М-Аи^-НМОБ при различных температурных режимах колонки могут быть раздельно определены трифумин (температура колонки 220 °С, время удерживания 2,5 мин, предел обнаружения 1 нг/мкл) и продукты его гидролиза I, II (температура колонки 160 °С, время удерживания 1,7 и 2,5 мин, пределы обнаружения 4 и 0,5 нг/мкл соответственно), погрешность определения ±2,9 %. При тех же условиях на колонке с неподвижной фазой 3 % ХЕ-60 трифумин не определяется, пределы обнаружения I и II увеличиваются до 10 и 1 нг/мкл соответственно.
Кроме того, нами разработаны условия раздельного определения трифумина и продуктов гидролиза I, II альтернативным методом — хроматографией в тонком слое (ТСХ). В связи с этим, исходя из структуры соединений, содержащих
