CC BY
9
Результаты исследований обработаны статистическим методом размаха (световая чувствительность в относительных единицах и процентах) во все сроки измерений и указывают на равнозначность по чувствительности всех вариантов.
Пороговой концентрацией, влияющей на световую чувствительность глаз, оказалась доза мета-нитрохлорбензола 0,012 мг/м3 и 3,4-дихлорани-лина 0,025 мг/м3.
Результаты исследований световой чувствительности глаз методом темповой зрительной адаптации при предварительном «засвете» обоих глаз красным светом, а также одного глаза красным или белым светом позволяют сократить время исследования до 20 мин. вместо 40 мин., принятых в практике гигиенического нормирования атмосферных загрязнений с предварительным «засветом» обоих глаз белым светом. Чувствительность метода при этом сохраняется прежняя.
ЛИТЕРАТУРА
Богословский А. И., Кравков С. В., Семеновская Е. Н. Физиол. ж. СССР, 1935, т. 19, № 4, с. 815.— Буштуева К. А. В кн.: Предельно допустимые концентрации атмосферных загрязнений. М., 1957, в. 3, с. 30.—Г о ф м е к л е р В. А. Гиг. и сан., 1961, № 4, с. 9.— Дубровская Ф. И. В кн.: Предельно допустимые концентрации атмосферных загрязнений. М., 1957, в. 3, с. 46.— И з м е р о в Н. Ф. Там же, 1961, в. 5, с. 72.— Кравков С. В. Глаз и его работа. М.— Л., 1950, с. 184.— Кравков С. В., Семеновская E.H.B кн.: Зрительные ощущения и восприятия. М., 1935, т. 2, с. 138.— Семеновская E.H. Вестн. офтальмол., 1937, т. 10, в. 6, с. 868.
Поступила 14/V 1966 г.
УДК 614.777:в 15.778.381-074
ОБНАРУЖЕНИЕ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ДДТ, ГЕПТАХЛОРА И ЛИНДАНА В ВОДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С ФЛЮОРЕСЦЕИНОМ
Т. М. Петрова, Т. И. Голубев
Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, Ленинград
Широкое использование пестицидов в сельском хозяйстве и ветеринарии вызывает опасность загрязнения ядохимикатами внешней среды, в частности открытых водоемов и грунтовых вод. В связи с этим особую важность приобретает вопрос контроля за содержанием в воде хлорорганиче-ских инсектицидов (ДДТ, гептахлор, линдан и др.), обладающих значительной стойкостью и кумулятивностью, между тем до сего времени нет надежных, простых и апробированных методов их обнаружения. Оправдывает себя метод тонкослойной хроматографии с флуоресцирующими агентами. Этот метод, по данным ряда исследователей (М. А. Константинова-Шлезингер; С. Юденфренд, и др.), является высокочувствительным, более специфичным и простым по сравнению с колориметрическим, хрома-тографическим на бумаге и другими методами. В работах зарубежных авторов, появившихся в последнее время, показано, что анализ пестицидов можно проводить в тонком слое с флюоресцирующими агентами (Э. Шталь и др.). Однако отечественных работ, посвященных этому вопросу, нам не известно.
В настоящей статье излагается метод обнаружения микроколичеств ДДТ, гептахлора и линдана в воде, основанный на применении тонкослойной хроматографии в сочетании с люминесцентным способом исследования. Сущность метода заключается в экстрагировании инсектицидов из воды петролейным эфиром, упаривании экстракта до 0,2—0,3 мл и нане-
5 Гигиена и санитария № 9
65
Таблица 1 Значения Rf ДДТ, гептахлора и линдана
Rf инсектицида Rf инсектицида
Вещество (сорбент—окись (сорбент—сили-
алюминия) кагель)
О.р ДДТ . . . 0,60—0,61 0,56—0,57
р.р ДДТ . . . 0,48—0,50 0,45—0,46
Гептахлор . . 0,66—0,69 0,60—0,62
1—эпоксид—
гептахлора 0,41—0,42 0,37—0,39
2—эпоксид ге-
птахлора . . 0,31—0,33 0,30—0,31
Линдан . . . 0,23—0,25 0,16—0,17
сении его на тонкий слои сорбента, содержащего флюоресцеин" натрия. После разделения в н-гексане хлорорганические инсектициды обнаруживаются на пластинке при дневном свете в виде розовых пятен, а в ультрафиолетовом свете — в виде коричневых на желтовато-зеленом фоне. Метод позволяет определить до 0,5 мкг ДДТ, гептахлора и около 5 мкг линдана. В качестве сорбентов мы использовали нейтральную окись алюминия и силикагель марки КСК, приготовленный по методу Шевченко (3. А. Шевченко и И. А. Фаворская).
Флюоресцеин натрия вносили непосредственно в сорбенты. Для этого 30 г сорбента смешивали с 10 мл 0,02% водного раствора флюоресцеина и подсушивали в термостате 2 часа при 105°.
На пластинки сорбент наносили в виде хлороформной суспензии, которую готовили'следующим образом: 3 г гипса энергично встряхивали
с 5 мл метилового спирта и 10 мл хлороформа. После того как суспензия становилась однородной, добавляли 30 г силикагеля или окиси алюминия, содержащих флюоресцеин, и 20 мл хлороформа. Смесь хорошо перемешивали и объем доводили до 60 мл хлороформом. Приготовленная суспензия может храниться в банке с притертой пробкой длительное время. Полученной смеси достаточно для покрытия тонким слоем 15 пластинок размером 9х 12 см. При этом для каждой пластинки брали по 4 мл суспензии, которые быстро разравнивали по поверхности. После испарения растворителя пластинки активировали в термостате 3 мин. при 105°.
Эфирные растворы инсектицидов наносили на пластинку, отступя 1,5 см от нижнего края и 2 см друг от друга, при помощи микропипетки. Пластинку помещали под углом 75° в хроматографическую камеру, на дно которой был налит подвижный растворитель — н-гексан. После подъема растворителя на 10 см пластинку вынимали и проветривали в вытяжном шкафу 2—3 мин. Через 1—2 часа хлорорганические инсектициды обнаруживались в виде розовых пятен. Это окрашивание можно получить сразу после разделения, при осторожном увлажнении слоя сорбента парами воды (кипящая водяная баня). Интенсивность окрашивания достигает максимума лишь при достаточной влажности (увлажнение можно произвести повторно). Пластинку просматривали в ультрафиолетовом свете на хемоскопе. При этом на хроматограмме отчетливо было видно, что ДДТ, гептахлор и линдан тушат желто-зеленую флюоресценцию и дают коричневые пятна. Значения Rf для ДДТ, гептахлора и линдана, идентифицированных на силикагеле и окиси алюминия, представлены в табл. 1.
Изложенный метод был применен нами для обнаружения ДДТ, гептахлора и линдана в воде. Для этого в делительную воронку на 250 мл вносили 100 мл воды с определенным количеством инсектицидов. Заданные инсектициды экстрагировали, при энергичном встряхивании в течение 10 мин, 10-ю мл петролейного эфира, температура кипения равнялась 50°. Операцию повторяли дважды. Эфирные слои объединяли и общий объем вытяжки упаривали до 0,2—0,3 мл на водяной бане, нагретой до температуры кипения петролейного эфира. Пробу наносили на хромато-грамму микропипеткой. Одновременно на ту же хроматограмму наносили свидетели — известное количество ДДТ, гептахлора или линдана. Хроматограмму обрабатывали так, как описано выше. Сравнивая интенсив-
ность окрашивания пятна исследуемого образца и свидетеля, определяли содержание инсектицида в пробе (рис. 1 и 2, см. вклейку).
Этим методом мы исследовали мягкую воду из р. Невы, жесткую воду из артезианских скважин городов Луга и Ломоносов и водопроводную воду со значительным содержанием железа. Следует отметить, что при встряхивании мягкой воды с петролейным эфиром в делительной воронке образуется эмульсия, которая легко разрушается несколькими каплями этилового спирта. Результаты исследований сравнивали с данными Ленинградской санэпидстанции, которая содержание ДДТ определяла методом Куль-берга и Шима (табл. 2).
Ни в одном из образцов воды ДДТ не был нами обнаружен. Однако проявились пятна, светящиеся ярким синим светом, что, по нашим наблюдениям, характерно для коэк-страктивных веществ. То, что эти пятна не относятся к инсектицидам, свидетельствует следующий факт: при нагревании пластинки в термостате (после нанесения вытяжки) в течение 3 мин. при 105° пятна коэкстрактивных веществ исчезают, тогда как пятна ДДТ, гептахлора и линдана (свидетели) остаются без изменения.
При нанесении тех же вытяжек на тонкий слой без флюоресцирующего вещества, после обработки пластинки азотнокислым серебром с 2-феноксиэта-нолом, на хроматограмме также обнаруживаются пятна коэкстрактивных веществ, не исчезающие при нагревании (рис. 3). Это показывает, что метод обнаружения ДДТ, гептахлора и линдана в тонком слое с флюоресцирующим веществом более специфичен, чем с азотнокислым серебром и 2-феноксиэтанолом.
Мы полагаем, что высокое содержание ДДТ в воде методом Кульберга и Шима обнаружено за счет коэкстрактивных веществ.
Выводы
1. Метод тонкослойной хроматографии с флюоресцеином, примененный для обнаружения ДДТ, гептахлора и линдана в воде, является быстрым, более специфичным и чувствительным, чем с азотнокислым серебром и 2-феноксиэтанолом.
2. На хроматограмме можно обнаружить до 0,5 мкг ДДТ, гептахлора и около 5 мкг линдана.
ЛИТЕРАТУРА
Константинова-Шлезингер М. А. Люминесцентный анализ. М., 1961.— Шевченко 3. А., Ф а в о р с к а я И. А. Вестн. ЛГУ. Серия физики и химии, 1964.—№ 4.—Ш т а л ь Э. Хроматография в тонких слоях. М., 1965.— Ю д е н ф р е н д С. Флюоресцентный анализ в биологии и медицине. М., 1965.
__Поступила 13/VI 1966 г.
Таблица 2
Содержание в воде ДДТ, обнаруженное 2 методами
Образец
Содержание ДДТ в воде (в мг/л)
Вода из р. Луги, выше выпуска сточных
вод.................
Вода из р. Луги, ниже выпуска сточных
вод.................
Вода из артезианской скважины завода
«Химик» г. Луга..........
Вода из артезианской скважины у школы № 1, г. Луга..........
Вода из артезианской скважины на ул.
Комсомола, г. Луга ........
Вода из артезианской скважины на
Б. Заречной ул., г. Луга......
Вода из артезианской скважины на 2 Заречной ул., г. Луга
0,3 1,10 1,3 1,00 0,12 0,29 1,30
