Научная статья на тему 'Тонкослойная хроматография экспресс метод анализа химических соединений'

Тонкослойная хроматография экспресс метод анализа химических соединений Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

CC BY
5946
809
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ / МЕТАБОЛИЗМ / ЯДЫ / THIN-LAYER CHROMATOGRAPHY / METABOLISM / POISONS

Аннотация научной статьи по прочим медицинским наукам, автор научной работы — Кабиров Г. Ф., Кадырова Р. Г., Муллахметов Р. Р.

Тонкослойная хроматография (ТСХ) является экспресс-методом анализа химических соединений различных классов. ТСХ широко используется в медицине, фармации, ветеринарии, токсикологических исследованиях и других областях.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по прочим медицинским наукам , автор научной работы — Кабиров Г. Ф., Кадырова Р. Г., Муллахметов Р. Р.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

THIN-LAYER CHROMATOGRAPHY -EXPRESS METHOD OF CHEMICAL COMPOUNDS ANALYSIS

Thin-layer chromatography (TLCH) is an express method of chemical compounds analysis of different classes. Thin-layer chromatography is widely used in medicine, pharmaceutics, veterinary, toxicologic investigations and other spheres of science.

Текст научной работы на тему «Тонкослойная хроматография экспресс метод анализа химических соединений»

УДК 543. 544

ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ - ЭКСПРЕСС МЕТОД АНАЛИЗА ХИМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ

Кабиров Г.Ф., Кадырова Р.Г., Муллахметов Р.Р.

ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»

Ключевые слова: тонкослойная хроматография, метаболизм, яды.

Key words: thin-layer chromatography, metabolism, poisons.

Метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) - важный

аналитический, физико-химический и микропрепаративный метод, который отличается простотой, высокой экономичностью и универсальностью. Тонкослойная (планарная) хроматография -оперативный метод хроматографии для анализа всех классов химических соединений, приобрела значение в качестве экспресс-метода анализа и широко используется в науке, промышленности, медицине, фармации, ветеринарии, в контроле загрязнений окружающей среды, в центрах Госсанэпидемнадзора, стандартизации и метрологии и. т.д.[1-3].

В развитии современной тонкослойной хроматографии можно выделить следующие направления: инструментализация и автоматизация ТСХ на всех стадиях анализа; использование новых сорбционных материалов и элюентов; разработка новых способов и приемов хроматографирования. Перспективными считаются варианты:

хроматографирование под давлением, в непрерывном потоке элюента, с управляемой газовой фазой (ТСХ-УГФ) [2, 4].

Исследования показали, что с помощью метода ТСХ можно получить важную информацию о характере метаболизма углеводов в биологических жидкостях при патологических состояниях организма [3]. Для ранней диагностики нарушений минерального обмена у животных предложен способ определения гексоз в сыворотке крови методом ТСХ

[5].

Тонкослойная хроматография применяется в контроле лекарственных средств с целью использования их в терапевтической практике [6, 7] и ветеринарии [3].

Разделение и определение водорастворимых и жирорастворимых витаминов осуществляется методом ТСХ [3, 6, 8].

Хроматографические методы анализа являются надежным методом экспрессного контроля за содержанием в атмосфере и других объектах окружающей среды (а также продуктах питания) чрезвычайно токсичных

хлорсодержащих пестицидов и полихлорбифенолов, которые добавляют к ядохимикатам для усиления их действия [9].

Несмотря на все возрастающие усилия, направленные на ограничение применения некоторых хлорорганических пестицидов, в первую очередь персистентных и легко распространяющихся в окружающей среде хлорфеноксикарбоновых кислот и циклодиенов, их метаболиты и продукты фотолиза все еще обнаруживают в различных экологических системах и в организме человека.

Установлено, что в естественных условиях под действием УФ-облучения, высоких температур из хлорароматических соединений может образовываться

2, 3, 7, 8-тетрахлорбензодиоксин (диоксин), который является одним из самых сильных синтетических ядов (ЬО50 5 • 105 г/кг) [10].

Для правильной токсикологической оценки пестицидов, установления остаточных их количеств в биологических объектах необходимы высокочувствительные, селективные методы анализа. В качестве таких методов могут служить хроматографические методы -ГЖХ, ТСХ [3], ВЭЖХ [11, 12].

Актуальными становятся также вопросы изучения токсических свойств новых лекарственных средств для ветеринарии и разработки эффективных методов их исследования [13].

В литературе имеется значительное число работ, посвященных обнаружению методом ТСХ пестицидов в различных пищевых продуктах, почве, воде, лекарственных растениях [3].

Определение содержания пестицидов в различных объектах включает несколько стадий:

- извлечение обнаруживаемых веществ (пестицидов) из проб органическими растворителями: диметилсульфоксидом из сливочного масла; гексаном из молока, овощей; петролейным эфиром из почвы; хлороформом из воды, кормов;

- очистка экстрактов;

- хроматографирование;

- определение веществ и стандартов (пестицидов), нижний предел обнаружения - от 0,1 до 0,005 мкг.

Предложено [14] в тонкослойной (планарной) хроматографии использовать в качестве первичной основной величины удерживания не подвижность Яр, а новую величину - планарную подвижность Яр, которая для /-соединения определяется по уравнению:

I.

Яр{ = —; для стандартного соединения ^),

п = ^ ї'-рзґ

Ь.ї

і, І8{ - расстояние от линии старта до центра зоны /-го соединения и стандарта (.ї), соответственно. Ьі, Ь8І - расстояние от центра зоны /соединения и стандарта (.ї) до линии фронта подвижной фазы, соответственно. При этом величину относительного удерживания определяют по уравнению:

Пр

г = р*ї

ПРі

которая идентична величине относительного удерживания (г^), используемой в колоночной хроматографии.

Количественное определение веществ (пестицидов) осуществляется по площади пятен на хроматограмме, путем сравнения с пятнами стандартов. Для сканирования пятен предлагается видеоденситометр «Сорбитол» [2, 3].

Тонкослойная хроматография пестицидов успешно осуществляется на сорбентах: силикагель, окись алюминия. Для хлорированных веществ удобным сорбентом является окись алюминия, пропитанная нитратом серебра. Часто пользуются готовыми хроматографическими пластинками силуфол УФ254, выпускаемыми зарубежными фирмами [3].

В нашей стране пластины для ТСХ выпускают на полимерной (лавсановой) подложке ПТСХ-П и алюминиевой подложке ПТСХ-АФ -пластины «Сорбофил» [2].

Для хроматографического разделения пестицидов в качестве элюентов применяют малополярные (или средней полярности) системы растворителей. Ввиду того, что к пестицидам относятся соединения самой разной природы, описано значительное количество различных реагентов для их обнаружения (проявления) на хроматографических пластинках. Для хлорорганических пестицидов часто пользуются нитратом серебра в смеси с азотной кислотой или аммиаком, флуоресцентными реактивами (родамином В). Идентификацию фосфорорганических пестицидов проводят реагентами: иодом, нитратом серебра в смеси с бромфеноловым синим, о-динитробензолом. Удобно опрыскивание (или пропитка) сорбента флуоресцентными реактивами. Разделенные на хроматограмме вещества также детектируются при рассмотрении пластинки в УФ-свете (УФ254 или УФ365) [3].

Приведены величины некоторых хлорорганических пестицидов (табл.1) [3, 6].

1. Величина Яр хлорорганических пестицидов [3]

Пестицид Элюент Величина

На окиси алюминия На силикагеле

Г ексахлорбензол Г ексан 0,90 -

Альдрин Г ексан 0,83 0,68

ДДЭ Г ексан 0,78 0,66

Г ексан-ацетон (6:1) 0,87 -

Г ептахлор Г ексан 0,76 0,65

о, П-ДДТ Г ексан 0,67 0,54

п, П-ДДТ Г ексан 0,61 0,50

Г ексан-ацетон (6:1) 0,75 -

Линдан Г ексан 0,34 0,20

ДДД Г ексан 0,30 0,40

Г ексан-ацетон (6:1) 0,62 -

Метоксихлор Г ексан 0,15 -

Г ексан-ацетон (6:1) 0,60 -

Кельтан Г ексан 0,05 -

Г ексан-ацетон (6:1) 0,40 -

Бензол 0,44 -

Тедион Г ексан 0,03 -

Г ексан-ацетон (6:1) 0,55 -

Эфирсульфонат Г ексан 0,00 -

Г ексан-ацетон (6:1) 0,45 -

Диктал Г ексан-ацетон (2:1) 0,90 -

Из таблицы 1 следует, что в указанной системе растворителей разделение эффективнее идет на окиси алюминия.

Шесть изомерных гексахлорциклогексанов (из которых эффективен только у-изомер) подвергли разделению на силуфоле в системе растворителей: петролейный эфир - четыреххлористый углерод (1 :1); гексан; циклогексан-хлоро

форм (8 : 2); гептан-пропанол-2 (10 : 0,5) [6].

Целый ряд веществ удалось разделить простой или двумерной хроматографией в гептане, содержащем 0,3 % этанола. Силуфол удобен для разделения изомеров гексахлорциклогексана и гексахлорбензола. Для элюирования служил н-гептан для обнаружения - смесь нитрата серебра и 2-феноксиэтанола. При применении силикагеля, пропитанного 5 % жидким парафином, элюировали 96 %-ным этанолом. Хорошо разделялись а-, Р-, у-, и 5-изомеры гексахлорциклогексана и гексахлорбензола.

Для разделения ДДТ в присутствии полигалогенированных дифенилов использовали двумерное элюирование в ^-образной камере. В первом направлении элюировали гептаном, во втором смесью - гептан-ацетон (98 : 2) [6].

2,4-Д (2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота) и метаболит 2,4-ДХФ (2,4-дихлорфенол) разделяли на силуфоле. В качестве элюента использовали смесь растворителей: циклогексан, бензол, ледяная уксусная кислота в объемном соотношении 10 : 2 : 2. Для обнаружения применяли 0,1 н раствор нитрата серебра в 3 н.растворе азотной кислоты. Значения Яр: для 2,4-Д - 0,33; 2,4-ДХФ - 0,42 [3].

Приведены величины Яр некоторых фосфорорганических пестицидов (табл.2) [3].

2. Величина Яр фосфорорганических пестицидов [3]

Пестицид Элюент Пестицид Элюент

Гексан- ацетон (4 : 1) Гексан-ацетон (7 : 3) хлороформ Гексан- ацетон (4 : 1) Гексан- ацетон (7 : 3) хлороформ

Амифос 0,04 0,18 0,00 Метилнитрофос 0,33 0,46 0,95

Антио 0,18 0,32 0,18 Фосфамид 0,08 0,22 0,05

Афуган 0,35 0,46 - Сайфос* 0,02 - 0,00

Базудин 0,40 - - Цианокс 0,27 0,40 0,88

Бромофос 0,60 0,72 - Цидиал 0,42 0,51 -

Валексон 0,54 - - Фенкаптон 0,64 0,79 -

Г ардона 0,35 - - Фозалон 0,35 0,46 0,84

Карбофос 0,29 0,40 0,59 Фталофос 0,22 0,36 0,48

Метафос 0,35 0,48 0,89

* В системе гексан : ацетон (1 : 2) ЯРсайф0са 0,40.

Значительную группу фосфорорганических пестицидов представляют собой тиофосфаты. Для хроматографического разделения тиофосфатов пользуются системами растворителей средней полярности. В качестве сорбента служат преимущественно силикагель. Метод определения антио и фосфамида в кормах основан на извлечении их хлороформом с последующей очисткой экстракта. Хроматографическое разделение проводят на силикагеле в системе растворителей хлороформ-ацетон (9 : 1).

Для обнаружения антио и фосфамида применяют аммиачноацетоновый раствор нитрата серебра. Значения Яр: для антио - 0,72;

фосфамида - 0,45 [3].

Фосфорорганические пестициды (карбофос, метафос, фосфамид, фталофос) определяли в лекарственных растениях на газовом хроматографе «Кристалл 2000» [3].

Заключение. Из литературных данных и собственных экспериментальных исследований следует, что тонкослойная хроматография (ТСХ) является экспресс-методом анализа химических соединений различных классов. ТСХ широко используется в медицине,

фармации, ветеринарии, токсикологических исследованиях и других областях.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Березкин В.Г. О вкладе Н.А. Измайлова и М.С. Шрайбер в развитие тонкослойной хроматографии. // ЖАХ. - 2008. - т.63, №4, с. 438-443; 2. Новый справочник химика и технолога. Аналитическая химия. - СПб.: НПО «Мир и семья», ч.11, 2003. С. 338-340; 3. Кадырова Р.Г. Тонкослойная хроматография. Идентификация и разделение углеводов, витаминов и токсичных соединений: Монография. - Казань: Казан.гос.энерг.ун-т, 2010, - 96 с. 4. Сумина Е.Г., Штыков С.Н., Березкин В.Г., и др. Новый метод тонкослойной хроматографии с управляемой газовой фазой. // ЖАХ - 2009. - т.64, №12, с.1256-1264; 5. Пат. 2101705. Россия. ЯиС1. (6001 № 33/50). 12.01.95. Способ определения галактозы в сыворотке крови / Р.Г. Кадырова, М.Г. Зухрабов; 6. Шаршунова М.

Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии. - М.: Мир. ч. II, 1980. с. 382-387, с.510-519.; 7. Темердашев З.А., Киселева Н.В., Клищенко Р. А., Удалов А.В. Разделение и идентификация соединений ряда фенотиазина методом тонкослойной хроматографии. // ЖАХ. - 2006. - т. 61, № 1. с. 6-9; 8. Бородина Е.В., Китаева Т.А., Сафонова Е.Ф., Селеменев В.Ф., Назарова А.А. Определение а-токоферола и эргокальцеферола методом тонкослойной хроматографии.// ЖАХ. - 2007. - т.62, № 11, с. 1181-1185; 9. Другов Ю.С., Беликов А.Б., Дьякова Г.А., Тульчинский В.М. Методы анализа загрязнений воздуха. - М.: Химия, 1984. с. 232-253.; 10. Гранберг И.И. Органическая химия. - М.: Дрофа, 2002. с.569-588.;11. Хроматография. Практическое приложение метода. ч.2. пер. с анг.(Ш. Чармс, Л.Фишбейн, Дж. Вагман и др.) / Под ред. Э.Хефтмана. -М.: Мир, 1986. 422 с.; 12. Тремасов М.Я., Папуниди К.Х., Степанов В.И., Шангараев Н.Г, Иванов А.В. Принципы диагностики отравлений животных. // Ветеринария. - 2010. - № 6.56-58 с. 13. Смирнов А.М. Достижения и актуальные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии. // Ветеринария.-2010. - №2. 3-6 с. 14. Березкин В.Г. Новый подход к определению величин относительного удерживания в тонкослойной жидкостной хроматографии. // ЖАХ.- 2007. т.62, №4 406-408 с.

ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ - ЭКСПРЕСС МЕТОД АНАЛИЗА

ХИМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ

Кабиров Г.Ф., Кадырова Р.Г., Муллахметов Р.Р.

Резюме

Тонкослойная хроматография (ТСХ) является экспресс-методом анализа химических соединений различных классов. ТСХ широко используется в медицине, фармации, ветеринарии, токсикологических исследованиях и других областях.

THIN-LAYER CHROMATOGRAPHY -EXPRESS METHOD OF CHEMICAL

COMPOUNDS ANALYSIS

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Kabirov G.F., Kadyrova R.G., Mullakhmetov R.R.

Summary

Thin-layer chromatography (TLCH) is an express method of chemical compounds analysis of different classes. Thin-layer chromatography is widely used in medicine, pharmaceutics, veterinary, toxicologic investigations and other spheres of science.

УДК 619:615.33:616.348-002:636.4

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТЕТРАГОЛДА ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ ПОРОСЯТ

Казимиров О.В., Бригадиров Ю.Н., Михайлов Е.В.

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии, г.Воронеж

Ключевые слова: колибактериоз, поросята, терапевтическая

эффективность, тетраголд.

Key words: сolibacteriosis, pigs, therapeutic efficacy, tetragold.

Одной из главных проблем промышленного свиноводства являются болезни молодняка свиней, среди которых чаще всего встречаются желудочно-кишечные болезни бактериальной этиологии.

Многочисленными исследованиями в нашей стране и за рубежом установлено, что болезни молодняка на фоне неблагоприятного воздействия на животных предрасполагающих факторов, снижающих общую неспецифическую резистентность организма, имеют инфекционную природу (Ю.Н. Бригадиров, 2002; А.Г. Шахов с соавт., 2003).

Наиболее широко распространены эшерихиозы и сальмонеллёзы. По данным И. А. Волкова (2008), потери поросят от колибактериоза в первые недели после опороса составляют от 10 до 50%.

В настоящее время, для борьбы с данным заболеванием поросят, превалирует стратегия вакцинопрофилактики и антибиотикотерапии. Однако недостаточная эффективность специфических средств и антимикробных препаратов при колибактериозе объясняется значительным разнообразием антигенного состава и факторов патогенности возбудителя. В связи с этим в решении проблем,

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.