CC BY
7
УДК 614.777:[613.32:615.778.381-074
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ИНСЕКТИЦИДОВ В ВОДОЕМАХ
Канд. хим. наук Ф. Г. Дятловицкая, Е. Ф. Гладенко, А. А. Кручинина
Киевский научно-исследовательский институт общей и коммунальной гигиены
Систематическое применение в сельском хозяйстве инсектицидов повышает опасность загрязнения ими открытых водоемов. Это вызывает необходимость разработать и рекомендовать для контроля за санитарным состоянием водоема методы определения малых количеств инсектицидов в воде. В качестве объектов изучения мы избрали хлор-органические (соединения ДДТ и гептахлор), так как они могут не разлагаться в воде несколько лет.
Тонкослойной хроматографии хлорорганических инсектицидов посвящены единичные работы, в которых освещено только качественное определение. Хорошо разработаны методы выявления хлорорганических инсектицидов в пищевых продуктах (бумажная хроматография, колориметрия и т. д.). Так, для исследования ДДТ применяют колориметрический метод Шехтера и Галлера, Л. М. Кульберга, Митчелла и др. Методы изучения ДДТ и гептахлора в воде не описаны.
Аналитическое определение ДДТ мы решили вначале произвести методом, предложенным Л. М. Кульбергом для анализа пищевых продуктов. Данные наших опытов показали, что этот метод не дает воспроизводимых результатов и во многих случаях открывает ДДТ там, где его нет (например, на чистом участке Днепра). По-видимому, в речной воде имеются органические соединения, которые могут нитроваться, давать при восстановлении амины и далее диазосоединения. Последние, сочетаясь с оксихинолином, образуют окрашенные соединения. Таким образом, метод не может считаться специфическим для исследования ДДТ. Поэтому мы попытались применить для определения ДДТ в воде метод Шехтера и Галлера для анализа пищевых продуктов. Этот метод также заключается в нитровании ДДТ до тетра-нитропродукта. Тетранитропродукт далее реагирует со спиртовым раствором щелочи с образованием соединения, окрашенного в голубой цвет. ДДТ выделяли из воды путем экстракции бензолом Количество экстракций, необходимых для полноты извлечения, оказалось равным 6. Затем на основании многочисленных опытов выработали следующий ход определения. Бензольную вытяжку упаривали на водяной бане при 60—70° досуха. Сухой остаток растворяли в спирте и переносили в пробирку с навеской КЫОэ. После удаления спирта и следов влаги прибавляли концентрированную серную кислоту и производили нитрование. Далее извлекали нитропроизводное ДДТ эфиром, нейтрализовали вытяжку 5% раствором ЫаОН, обезвоживали ее встряхиванием с сульфатом натрия, удаляли растворитель, сухой остаток растворяли в бензоле и сочетали со спиртовым раствором едкого кали.
После прибавления реактивов возникала всегда синяя окраска, оптическую плотность которой измеряли на фотоэлектроколориметре. Количественное определение производили по калибровочной кривой.
Для построения калибровочной кривой в ряд пробирок вносили 50, 100, 200, 300, 400 и 500 мкг ДДТ (из спиртового раствора) и 0,2 г КЫ03. Упаривали досуха содержимое пробирок на кипящей водяной бане, а потом производили нитрование и все последующие опе-
1 Экстракция спиртом из сухого остатка приводила к разрушению данного соединения.
рации. Оптическую плотность окрашенного в синий цвет раствора снимали на фотоэлектроколориметре в кювете рабочей длиной 10 мм с красным светофильтром через 15 мин. после прибавления реактивов, ибо за это время достигался максимум светопоглощения.
Калибровочная кривая (рис. 1) представляет собой параболу, проходящую через начало координат. Чувствительность определения 20 мкг в пробе. Воспроизводимость метода очень хорошая. Учитывая возможность попадания ДДТ в водоем со сточными водами в эмульгированном виде, мы попытались разработать его определение при внесении с ОП. С этой целью сняли калибровочную кривую 2 следующим образом: 10 мг химически чистого ДДТ растирали с одной каплей ОП-7. Затем по каплям прибавляли дистиллированную воду и растирали снова до получения однородной эмульсии, объем которой доводили до 10 мл дистиллированной водой. В ряд пробирок вносили 0,05, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 мл эмульсии, что соответствовало 50, 100, 200, 300, 400 и 500 мкг ДДТ и 0,2 г КШз. Все остальные операции выполняли так, как описано выше.
Калибровочная кривая также представляет собой параболу, лежащую ниже кривой 1. Поэтому количественное определение ДДТ в природных водах должно быть произведено по калибровочной кривой 2.
Мы разработали также метод выявления ДДТ при помощи бумажной хроматографии, который менее трудоемок, чем колориметрический, и позволяет изучать одновременно несколько инсектицидов. ДДТ выделяли из воды экстракцией бензолом. Затем бензольную вытяжку упаривали до объема 2—3 мл и наносили с помощью шприца на стартовую линию хроматографической бумаги. После протягивания бумаги через раствор касторового масла в эфире ее помещали в хроматографическую камеру (рис. 2). Подвижным растворителем служила смесь ацетон — вода (7:3).
Через 16—18 часов бумагу вынимали из камеры, высушивали на воздухе и опрыскивали последовательно растворами AgNOз, формалина, КОН и смесью Н202: НЫОэ (1:1).
При наличии в пробе ДДТ на высоте 7—8 см от стартовой линии всегда появлялось фиолетовое пятно, интенсивность окраски которого сравнивали с окраской пятна, полученного при нанесении известного количества ДДТ. Чувствительность определения составляла 50 мкг в пробе.
Нами были поставлены опыты по определению ДДТ, полихлорпи-нена, гексахлорана и гептахлора при их совместном присутствии. Для каждого инсектицида снимали хроматограмму в чистом виде, а затем вносили смесь инсектицидов и снимали хроматограмму вновь. Оказалось, что ДДТ, полихлорпинен и гептахлор поднимаются почти на одинаковую высоту (6—8 см) и определить их раздельно невозможно,
юо
200 ЗОО
400
500лпсг
Рис. 1. Калибровочная кривая для ДДТ. Метод Шехтера. Светофильтр красный, кювета 10 мм. Обозначения в тексте
©
Рис. 2. Камера для бумажной хроматографии.
5 Гигиена и санитария, Л"» 5
65
а гексахлоран поднимается на высоту 12—14 см и может быть определен совместно с ДДТ.
Для полуколичественного определения ДДТ был разработан вариант тонкослойной хроматографии. ДДТ выделяли из воды путем 3-кратной экстракции бензолом. Полученную вытяжку упаривали при низкой температуре до объема 2—3 мл и наносили на стекло с адсорбентом. Адсорбентом служила безводная окись алюминия, закрепленная гипсом. Применяли стекла размером 9Х 12 см.
Подвижным растворителем служил н-гексан, а проявителем — водно-ацетоновый раствор AgN03 с прибавлением NH4OH. Время хрома-тографирования составляло 15 мин. После проявления пластинку выдерживали 10 мин. под флюоресцентной лампой. На высоте 4—5 см от старта появлялось темно-фиолетовое пятно ДДТ. Количественное определение производили путем сравнения данного пятна с пятном, полученным при нанесении известного количества ДДТ. Воспроизводимость метода была хорошая. Чувствительность определения составляла 25 мкг.
Для определения гептахлора в водоеме мы попытались использовать реакцию его с диэтаноламином в щелочной среде, предложенную Давыдовым и Радомским и являющуюся для гептахлора специфической. Извлекали последний из воды путем экстракции эфиром. Наилучшего выделения достигали, если 250 мл воды, насыщенной поваренной солью, экстрагировали 30 мл эфира. Эфирную вытяжку выпаривали при низкой температуре на водяной бане досуха, а сухой остаток растворяли в ацетоне и наносили на стартовую линию хроматографиче-ской бумаги. Бумагу затем протягивали через 5% раствор касторового масла в эфире и хроматографировали 16—18 часов в системе ацетон — вода (7:3). По истечении этого времени бумагу извлекали из камеры, высушивали в течение часа и опрыскивали смесью диэтаноламина и 2 н. раствора КОН в метаноле (1:2). После опрыскивания выдерживали 10 мин. в сушильном шкафу при 100°. При наличии гептахлора на высоте 7—8 см от стартовой линии появлялось пятно светло-сиреневого цвета. Чувствительность определения 50 мкг в пробе. Количественное определение производили путем сравнения с пятном, полученным при известной концентрации гептахлора.
ЛИТЕРАТУРА
Кульберг JI. М., Ш и м а Е. И. Гиг. и сан., 1949, № 6, с. 45. — Radomsk i J. Z„ D a v i d o w В., J. Pharmac. Exp. Ther., 1953, v. 107, p. 266. —Mitchell L„ J. Ass. off. agrie. Chem., 1963, v. 46, p. 988. — S с h e с h t e г M. S., H aller H. L„ J. Am. chem. Soc., 1944, v. 66, p. 2129.
Поступила I5/I 1966 r.
УДК 613.63-07-093.35
К ВОПРОСУ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕТОДА ТКАНЕВЫХ КУЛЬТУР В САНИТАРНО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
Г. Н. Красовский, А. П. Ильницкий
Кафедра коммунальной гигиены I Московского медицинского института им. И. М. Сеченова
Метод тканевых культур находит все большее распространение во многих областях экспериментальной медицины. С различным успехом он применялся для первичного отбора противоопухолевых препаратов (В. А. Чернов и В. Б. Лыткина; Е1сЬогп с соавторами, и др.),
