CC BY
62
УДК 636.2:591.1:636.087.7
О ВОЗМОЖНОСТИ КОРРЕКТИРОВКИ НЕКОТОРЫХ ПАРАМЕТРОВ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ОРГАНИЗМА ДОЙНЫХ КОРОВ
Р.В. РУСАКОВ, кандидат биологических наук, зав. лабораторией
Н.А. ГАРИФУЛЛИНА, аспирант НИИСХ Северо-Востока E-mail: romanrusakov@mail.ru
Резюме. В статье показана возможность корректировки некоторых параметров антиоксидантной системы организма дойных коров путем скармливания комплекса биологически активных веществ, обладающих антиокислительной активностью, определено влияние таких соединений на продуктивность животных.
Ключевые слова: антиоксидантная система, коррекция, коровы, кормление, биологически активные вещества, малоновый диальдегид, церулоплазмин, ти-оловые группы белков.
Исследования последних лет свидетельствуют [1...3], что нарушения технологии содержания, неблагоприятные условия внешней среды и неполноценное кормление приводят к нарушению метаболического и гормонального статуса животных. Уменьшение запасов биоантиокислителей в организме и недостаток их в рационе при таких условиях вызывают снижение активности системы антиоксидантной защиты организма и сопровождаются усилением процессов свободнорадикального окисления в тканях. В результате образуются чрезвычайно активные в химическом отношении интермедиаты кислорода (супероксидный и гидроксильный радикалы, синглетный кислород) и перекисные радикалы, которые повреждают биомембраны, нарушают обменные процессы в клетках и тканях, вызывают возникновение различных патологий. Именно хронически текущие свободнорадикальные патологии
- одна из причин снижения неспецифической резистентности организма и продуктивности животных.
Наибольшего успеха при решении указанных проблем можно добиться корректировкой физиолого-био-химического статуса животных при помощи биологически активных веществ (БАВ), обладающих антиок-сидантным действием. Среди них важная роль принадлежит витаминам и микроэлементам. При этом максимальную эффективность обеспечивает только совместное использование нескольких антиоксидантов, так как более слабые соединения зачастую резко усиливают действие более сильных, восстанавливая их окисленные формы [4].
Цель наших исследований - изучить возможность корректировки некоторых параметров системы антиоксидантной защиты организма дойных коров путем скармливания специально подобранного комплекса биологически активных веществ, обладающих антиокислительной активностью и определить его влияние на продуктивность.
Условия, материалы и методы. Для достижения указанной цели в летне-пастбищный период 2009 г. в ЗАО «Агрофирма «Подгорцы» Юрьянского
района Кировской области был проведен научнохозяйственный опыт на коровах черно-пестрой породы.
Для экспиремента по принципу пар-аналогов были сформированы 2 группы животных (контрольная и опытная) по 9 голов в каждой со средней живой массой 500...550 кг и среднесуточным удоем 22,2 л. Условия кормления и содержания в обеих группах аналогичны. Животные находились на одинаковом общехозяйственном рационе, включающем 25 кг пастбищной травы, 15 кг зеленой массы проса кормового, 6,5 кг зерносмеси (30 % овес, 35 % пшеница, 35 % ячмень), 0,7 кг жмыха подсолнечного и соль поваренную.
Для восполнения дефицита макро- и микроэлементов, а также витаминов коровы контрольной группы дополнительно к основному рациону получали премикс «Кауфит антисоматик» импортного производства, в состав которого входили известняк, мо-нокальцийфосфат, соль поваренная, окись магния, витамины, микроэлементы и пшеничный наполнитель с содержанием в 1 дозе: обменной энергии -1,9 МДж; сырого протеина - 2,24 г; крахмала - 4,7 г; натрия 21,0 г; кальция - 23,2 г; фосфора 6,0 г; магния - 20,0 г; серы - 0,38 г; железа - 445,2 мг; меди -175 мг; цинка - 700 мг; марганца - 500 мг; селена -10 мг; витамина А - 100 тыс. МЕ; витамина Е - 0,3 мг; витамина Н - 10 мг.
Животным опытной группы скармливали экспериментальный комплекс БАВ с антиоксидантным действием, разработанный с учетом потребностей животных и дефицита элементов в рационе. В его состав входили витамин А - 300 тыс. МЕ; витамин Е - 30 мг; витамин Н - 20 мг; сера кормовая - 15,0 г; медь - 60 мг; марганец - 140 мг; магний - 5,9 г; цинк - 930 мг; селен
- 14,2 мг. Таким образом, разработанный комплекс БАВ содержал меньшее количество ингредиентов, но имел более высокую концентрацию основных элементов (витамины А, Е, Н, микроэлементы селен и цинк), обладающих антиокислительной активностью и необходимых для нормализации обменных процессов в организме животных.
Премикс и комплекс БАВ скармливали животным индивидуально в смеси с концентрированными кормами в дозах соответственно 200 г и 38,6 г на 1 голову в сутки. В течение первых трех дней эксперимента опытную добавку вводили в состав рациона в половинной дозе (19,3 г).
Общая питательность рациона коров контрольной группы составляла 185,05 МДж обменной энергии и 2860 г сырого протеина, опытной - 183,15 МДж и 2858 г соответственно. Меньшее содержание обменной энергии в рационе опытной группы связано с тем, что разработанный комплекс БАВ давали без зернового наполнителя.
Продолжительность опыта 68 дней.
Молочную продуктивность коров учитывали по результатам контрольных доек.
Для выявления специфического антиоксидантного действия изучаемой добавки на организм дойных коров от пяти животных каждой группы перед началом и в конце опыта брали кровь для определе-__ Достижения науки и техники АПК, №05-2010
Таблица 1. Молочная продуктивность коров
Показатель Контроль Опыт Разница с контролем, %
Суточный удой натурального мо-
лока на начало опыта, кг/гол. 22,2±0,59 22,2±0,80 100,0
Массовая доля, %:
жира 4,12±0,17 4,0±0,14 97,1
белка 3,13±0,04 3,18±0,05 101,6
Суточный удой молока базисной
жирности за период опыта, кг/гол. 23,68 22,99 97,1
Валовой надой за опыт, кг:
натурального молока 1330,41 1327,89 99,8
молока базисной жирности 1610,24 1563,32 97,1
ния биохимических показателей. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и состояние системы антиоксидантной защиты организма (АОЗ) оценивали по содержанию в сыворотке крови малонового диальдегида (МДА) - в тесте с ти-обарбитуровой кислотой [5]; тиоловых групп белков (БН-групп) - фотоколориметрическим ультрамикрометодом Фоломеева В.Ф. [6] и церулоплазмина (ЦП)
- методом Равина [7].
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с использованием критерия Стьюдента.
Результаты и обсуждение. Мы не установили достоверного влияния экспериментального комплекса биологически активных веществ на молочную продуктивность животных (табл. 1). У коров опытной группы среднесуточный удой, содержание жира в молоке и валовой надой были несколько ниже, чем в контрольной, по концентрации белка, напротив, наблюдалась тенденция к увеличению в опытной группе на
1,6 % (р>0,05). Вероятно, это обусловлено более низкой питательностью рациона коров опытной группы.
Анализ результатов биохимических исследований сыворотки крови показал, что содержание МДА у коров опытной группы за период эксперимента практически не изменилось, в то время как в контроле оно достоверно увеличилось на 17,3 %, что свидетельствует об усилении окислительного стресса в организме. Исходя из этого, можно предположить, что экспериментальный комплекс БАВ, проявляя свое антиокси-дантное действие, сдерживал чрезмерное ускорение перекисного окисления липидов и препятствовал накоплению продуктов этого процесса в тканях.
За время исследований в обеих группах концентрация ЦП уменьшилась. В контроле снижение составило 44 % (р<0,05), а в опытной группе 35,1 % (р<0,01). При этом разница между группами была равна 19,7 % (р>0,05). Более высокое содержание церулоплазмина в сыворотке крови коров опытной группы предполагает усиление защитных реакций организма на действие раздражителей различной
природы, что, в свою очередь, препятствует возникновению окислительного стресса.
Количество теоловых групп белков (ЭН-групп) в сыворотке крови опытных животных в начале эксперимента было на 18 % меньше, чем в контроле (р<0,05). После скармливания комплекса БАВ у животных опытной группы оно достоверно увеличилось на 26,8 % (р<0,05), тогда как в контроле - всего на 9 % (р<0,05). Следовательно, можно предположить, что разработанный в НИИСХ Северо-Вос-тока комплекс БАВ способствовал усилению реакций, ведущих к образованию восстановленных форм глу-таниона, тем самым повышая неспецифическую резистентность организма к воздействию окислительного стресса.
Таблица 2. Показатели состояния антиоксидантной системы организма коров
Показатель Кон- троль Опыт Разница с к он тролем, %
Малоновы й диал ь-
дегид, мкмоль/л
до опыта 3,58±0,13 3,86±0,17 107,8
после опыта 4,20±0,13** 3,90±0,12 92,9
Церулоплазмин, мг%
до опыта 7,78±0,62 8,04±0,84 103,3
после опыта 4,36±0,67* 5,22±0,62** 119,7
БН-группы, моль/л
до опыта 2,0±0,15 1,64±0,12* 82,0
после опыта 2,18±0,12* 2,08±0,08* 95,4
* р<0,05; ** р<0,01
Выводы. Результаты наших исследований свидетельствуют о том, что скармливание дойным коровам специально подобранного комплекса макро- и микроэлементов, а также витаминов, обладающих анти-окислительной активностью, позволяет сдерживать чрезмерное ускорение перекисного окисления липидов благодаря поддержанию в крови более высоких концентраций церулоплазмина и сульфгидрильных групп и препятствовует накоплению малонового диальдегида в тканях.
Это подтверждает возможность коррекции некоторых параметров антиоксидантной системы организма дойных коров комплексом биологически активных веществ, позволяющим направленно влиять на интенсивность процессов СРО и состояние системы антиоксидантной защиты организма и, тем самым, улучшать состояние здоровья и продуктивность животных в условиях окислительного стресса.
Литература.
1. Состояние пероксидного окисления и системы антиоксидантной защиты у коров при патологическом течении послеродового периода и бесплодии / Близнецова Г.Н., Рецкий М.И., Нежданов А.Г. и др. // Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики инфекционных болезней животных и птиц: Сб. науч. тр. / Екатеринбург: Уральское издательство, 2008. - С. 38-48.
2. Майстров В.И., Галочкина В.П., Шевелев Н.С. Антиоксидантно-антирадикальная и тиол-дисульфидная системы племенных бычков под влиянием комплекса биологически активных веществ // Сельскохозяйственная биология. - 2006.
- №2 -С. 64-68.
3. Guemouri L., Artur Y., Herbeth В., et al. Biological variability of superoxide dismutase, glutathione peroxidase and catalase in blood//Clin Chem. - 1991. - №37. - P. 1932-1937.
4. Журавлев А. И. Развитие идеи Б.Н. Тарусова о роли цепных процессов в биологии / Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. - М.: Наука, 1982. - С. 3-37.
Достижения науки и техники АПК, №05-2010 _______________________________________________________ 03
5. Гаврилов, В.Б., Гаврилова, А.Р., Мажуль Л.М. // Вопр. мед. химии. - 1987. - №1. - С. 118-122.
6. Фоломеев, В.Ф. Фотоколориметрический ультрамикрометод количественного определения сульфгидрильных групп белка и небелковых соединений крови // Лаб. дело. - 1981 - №1. - С. 33-35.
9. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: В 2 т. Т.2. - Минск: Беларусь, 2000. С. 74-75.
ABOUT THE OPPORTUNITY OF CORRECTION OF SOME PARAMETERS OF ANTIOXIDATIVE SYSTEM OF THE ORGANISM OF MILCH COWS BY THE FEEDING OF THE COMPLEX BIOLOGICALLY ACTIVE
MATERIALS
R.V. Rusakov, N.A. Garifullina
Summary. In article the opportunity of updating of some parameters of antioxidative system of an organism of milch cows is shown by a feeding of a complex biologically the active materials having antioxidative activity, influence on milk efficiency is determined.
Key words: antioxidative system, correction, cows, feeding, biologically active materials, malonic dial, a hepatocuprein, a sulfhydryl groups of proteins.
УДК 619:317 - 619:616.982.2
КУЛЬТУРАЛЬНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
В.Г. ОЩЕПКОВ, доктор ветеринарных наук, директор
ЛЛ. ТAЛЛЕР, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник
Е.Ю. СЕКИН, кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник
T.A. BAССИMИРСКAЯ, аспирант AM. СЛЕПЧЕНКО, аспирант ВНИИ бруцеллеза и туберкулеза животных E-mail: vniibtg@rambler.ru
Резюме. Приведены результаты исследований, подтверждающие возможность эффективного использования ПЦР-анализа в ветеринарных лабораториях в качестве дополнительного метода, позволяющего выявлять труднорастущие и некультивируемые формы микобактерий. При этом повышается надежность исследования (до 100 %) и значительно сокращаются сроки постановки диагноза (в 6-20 раз).
Ключевые слова: диагностика, ускоренная идентификация, трудно культивируемые микобактерии туберкулеза, крупный рогатый скот, ПЦР.
Один из главных методов бактериологической диагностики туберкулеза, в основе которого лежит способность микобактерий размножаться на соответствующих питательных средах и образовывать микро- и макроколонии, - культуральный.
Наиболее часто для культивирования микобактерий используют плотные яичные питательные среды - Ле-венштейна-Йенсена, Гельберга, Финн-2. Однако на сегодняшний день они не всегда отвечают требованиям практической лабораторной диагностики [1, 4].
Наряду с усовершенствованием микробиологических методов обнаружения возбудителя ведется поиск новых способов индикации и идентификации микобактерий. В лабораториях все чаще, наряду с микробиологическими методами применяют молекулярно-генетические, в частности полимеразную цепную реакцию, в основе которой лежит ферментативная амплификация
выбранных специфических участков генома M. tuberculosis, M. bovis, их детекция и идентификация [2].
Достоверность результатов во многом зависит от выбора объекта исследований. Например, большинство авторов отмечают, что при использовании метода ПЦР при анализе непосредственно биоматериала от больного туберкулезом крупного рогатого скота положительный результат наблюдается в 45,5 % случаев, в то время, как при исследовании выделенных культур он достигается в 95,4...100 % случаев [3].
Цель наших исследований разработать оптимальный комбинированный метод лабораторной диагностики туберкулеза с применением модифицированных питательных сред в сочетании с полимеразной цепной реакцией (ПЦР).
Условия, материалы и методы. Работа проведена на базе лаборатории клеточной биотехнологии и лаборатории диагностических исследований ВНИИБТЖ.
При производственной апробации разработанного метода для изучения отбирали биоматериал (легкие, печень, лимфоузлы) от крупного рогатого скота положительно реагировавшего на ППД-туберкулин для млекопитающих из хозяйств Омской области с различной эпидемиологической ситуацией по туберкулезу.
После предварительной пробоподготовки суспензии биоматериала высевали на 3 варианта питательных сред: Левенштейна-Йенсена (контроль) ФБС-1 и ФБС-2 (плотные питательные среды в нашей модификации), культивировали при 37 °С в течении 1.2 месяцев. Кроме того, для подтверждения наличия микробного агента в исследуемом биоматериале суспензиями заражали морских свинок.
Наряду с общепринятыми методами для индикации и идентификации возбудителя в ранние сроки его культивирования использовали полимеразную цепную реакцию (тест-система «МТБ-КОМ» для выявления возбудителя туберкулеза M.bovis и M.tuberculosis, производства ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии»). Всего было исследовано 20 проб биоматериала от крупного рогатого скота, в том числе 12 - от животных с туберкулезными поражениями и 8 - без визуально определяе-__ Достижения науки и техники АПК, №05-2010
