CC BY
7
приятия по профессиональной ориентации молодежи.
Литература
X Анохин П. К. Биохимия и нейрофизиология условного 0Р рефлекса. М., 1968.
2. Антонова Л. Т., Карцев И. Д., Левин В. М. — В кн.: Всесоюзный съезд гигиенистов и санитарных врачей. 16-й. Тезисы докладов. М., 1972, с. 417—419.
3. Антонова Л. Т., Малахова А. Я. — В кн.: Клиника заболеваний, физиология и гигиена в подростковом возрасте. М„ 1979, с. 211—219.
4. Горигков С. И. — В кн.: Руководство по физиологии труда. М., 1983, с. 418—444.
5. Каган М. С. Человеческая деятельность. (Опыт системного анализа). М., 1974.
6. Карцев И. Д., Халдеева Л. Ф.. Павлович К■ Э. Физио-
логические критерии профессиональной пригодности подростков к различным профессиям. М., 1977.
7. Косилов С. А., Леонова Л. А. Работоспособность человека и пути ее повышения. М., 1974.
8. Левин В. М„ Михельсон А. В.— В кн.: Левин В. М, Рутенбург Э. С. Профессиональная ориентация и врачебная профессиональная консультация подростков. Л., 1977, с. 82—91.
9. Левин В. М„ Рутенбург Э. С. Профессиональная ориентация и врачебная профессиональная консультация подростков. Л., 1977.
10. Сухарева Л. М., Павлович К. Э. — В кн.: Профессиональная ориентация молодежи и профотбор работников промышленных предприятий. Новосибирск, 1980, с. 35— 36.
11. Сухарев А. Г. Медицинские аспекты профессиональной ориентации школьников. М., 1982.
Поступила 31.01.85
УДК 679.842.11.083.12
Т. В. Бей, Е. М. Юровская
О НЕКОТОРЫХ МЕТОДИЧЕСКИХ ПРИЕМАХ ВЫДЕЛЕНИЯ ПАТОГЕННЫХ ЭШЕРИХИЙ ИЗ ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
Киевский НИИ общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Марзеева
Основной задачей санитарной микробиологии в настоящее время является изучение влияния различных видов биологического загрязнения на состояние едоровья человека [4]. Патогенные эшерихии, играющие значительную роль в инфекционной патологии человека, требуют постоянного контроля за их циркуляцией в объектах окружающей среды. Санитарно-микробиологиче-4|кий контроль окружающей среды на энтеропа-тогенные кишечные палочки (ЭПКП) довольно трудоемок н нуждается в совершенствовании некоторых методических приемов выделения микроорганизмов.
В связи с этим нами изучена сравнительная эффективность некоторых сред накопления для роста патогенных эшерихий, выделения их из почвы и морской воды, а также ряд других ме-
^дических приемов индикации. Испытаны наи-лее широко используемые жидкие накопительные среды — глюкозопептонная (ГПС), лакто-зопептонная (ЛПС), лактозожелчный бульон (ЛЖБ), Кода, Кесслера — Свенартона и плотная среда Эндо [3]. В качестве тест-бактерий
использованы патогенные эшерихии серотипов 033 из внешней среды (выделена из почвы) и музейные штаммы 026, 0124, 0151.
Микроорганизмы вносили в среды накопления из расчета 100 клеток на 1 мл, в почву—1000 клеток на 1 г, в морскую воду—10 000 клеток на 1 мл. Суспензию клеток в физиологическом растворе готовили из суточных культур на мясо-пептонном агаре (МПА) по оптическому стандарту мутности. Среды накопления после внесения культур выращивали при 37 °С в течение 24 и 48 ч — среду Кесслера — Свенартона. Морскую воду и почву (нативные и автоклавированные) после обсеменения выдерживали при комнатной температуре и естественном освещении, поддерживая 60 % влажность почвы. Число клеток в средах накопления определяли тотчас после внесения и по окончании роста глубинным посевом в 1,5% МПА, в почве — 3-этапным методом титрования с накоплением в ГПС, в морской воде — посевом на среды Эндо, ГПС и ЛЖБ.
Как видно из табл. 1, патогенные эшерихии интенсивно росли во всех испытанных накопи-
те б л и ц а I
Развитие патогенных зшерихий в средах накопления (М±т)
Концентрация клеток после внесения Численность тест-бактсриЛ в средах накопления в конце опыта, млн/мл
^Ррсрогруппа ГПС ЛПС среда Кода нормальной концентрации среда Кода концентрированная среда Кесслера— Свенартона
033 0124 026 0151 20,78±1,56 34±5,59 29,2±3,307 9±1,38 394,33± 19,23 178±21 366,66± 18,56 116± 13,04 439± 115,99 249,33±41,34 380±43,59 65±3,22 166,33±8,99 47±4,72 58±7,5 29±2,73 263±61,72 51,23±2,54 63.66±8,511 47±7,62 40±5,107 20,9±!,45 170,66± 12.24 14±0,88
тельных средах, в которых при исходной численности клеток 9—34 в 1 мл количество их к концу наблюдения возрастало до десятков и сотен миллионов в 1 мл. Тест-бактерии всех серотнпов достигали максимальной численности в ГПС, лактозоположительные серотипы (033, 026, 0124) вырастали практически в таком же количестве и в ЛПС, но лактозоотрицательный серотип 0151 достоверно снижал в ней свою численность. Среда Кода нормальной и двойной концентрации иигибировала рост всех испытанных сероти-пов, снижая их численность до 29—166 млн/мл. Исключением являлся лишь серотип 033, недостоверно снижавший численность до 263 млн/мл в концентрированной среде Кода. Еще более выраженным ингибирующим эффектом обладала среда Кесслера — Свенартона, наиболее широко используемая при санитарно-бактериологическом исследовании почвы. Численность в ней патогенных эшерихий всех серотипов по сравнению с ГПС достоверно снижалась. Таким образом, существующие среды накопления для выделения из почвы бактерий группы кишечной палочки (БГКП) ингибируют рост патогенных эшерихий. Наибольшее ингибирующее действие оказывают среды Кода и Кесслера — Свенартона, а для лак-тозоотрнцательных серотипов — также ЛПС. Более благоприятной для роста и развития патогенных эшерихий оказалась ГПС, обычно не используемая при санитарно-бактериологиче-ском исследовании почвы. Ее применение при изучении выживаемости патогенных эшерихий позволяло выделять их из почвы после длительного вегетировання — от нескольких суток до 3,5 мес и при значительном снижении численности—до титра от 0,01 до 100 г (табл. 2).
Результаты выделения патогенных эшерихий из морской воды на средах накопления представлены в табл. 3.
Малую эффективность ЛЖБ для ЭПКП серо-группы 0151 можно объяснить тем, что представители этой группы являются лактозоотрица-тельными бактериями и не утилизуют лактозу в среде. Выделение патогенных эшерихий изучаемых серологических групп из морской натив-ной воды при высеве на среду Эндо наблюдали
Таблица 2
Выделение патогенных эшерихий из натурных почв на ГПС
Тип помпы Серо-(руппа Гитр патогенных эшерихий. г Сроки выделения
Песок Песок (стерильно) Песок Супесчаная 11есок 0151 015! 0124 0124 026 0,01-1 100 0,1—10 0.01 1 — 10 1—7 сут 3,5 мес 7—2,5 мес 10 сут 2 мес
Супесчаная 026 50 3 мес 20 сут
Таблица 3
Сравнительная оценка питательных сред при выделении ЭПКП из морской воды
Исследуемая вода Серо-группа Длительность выделения ЭПКП
среда Эндо ГПС 41 ЛЖБ
Морская автокла- 033 3 мес 5 мес 5 мес
вированная 0151 2 мес 1 мес 10 сут
Морская нативная 033 7 сут 20 сут 7 сут
0151 5 сут 20 сут 10 сут
в течение 5—7 сут, на ГПС и ЛЖБ — от 10 до 20 сут. Можно предположить, что быстрое отмирание тест-бактерий, наблюдающееся в натив-ной морской воде, приводит к значительному снижению концентрации искомых микрорганиз-мов в изучаемых образцах и более эффективному выделению патогенных эшерихий при использовании жидких сред накопления.
Полученные результаты нашли свое подтвер^ ждение при проведении плановых исследований по выделению ЭПКП из различных объектов окружающей среды. Из 54 штаммов патогенных эшерихий 28 культур выделено при посеве исследуемого материала в ГПС и 10 % желчный бульон и только 11 — при прямом посеве на среду Эндо.
В проведении исследований объектов окружающей среды на патогенные эшерихии немаловажное значение имеют также рациональное использование дорогостоящих сывороток, реактивов, посуды и сокращение затрат времени дл^ выполнения анализа. В ряде публикаций [1, 2* идентификацию патогенных эшерихий со среды Эндо предлагается проводить путем отбора не менее 100 подозрительных на кишечные палочки колоний при помощи агглютинации на стекле с поливалентными эшерихиозными сыворотками. При положительной реакции агглютинации с поливалентной смесью культуру отсевают на скошенный МПА для дальнейшего типирова-ния ее с моновалентными сыворотками и изуч|^ ния биохимических свойств выделенных культур. Однако, исследуя материал на ЭПКП из объектов окружающей среды, мы сталкиваемся с большим разнообразием вырастающих на средах колоний, отличающихся как по цвету, так и, что особенно важно, по величине от колоний, наблюдаемых при работе с диагностическим материалом. После первичной агглютинации, а иногда и до нее количество материала недостаточно для посева и дальнейшего исслсдовг^ ния. Кроме того, агглютинация с эшерихиознь™ ми сыворотками колоний, относящихся к роду эшерихий лишь по культуральным свойствам, приводит к большому расходу диагностических сывороток и непроизводительной потере времени персоналом.
В связи с этим нами было предложено идентификацию выросших колоний начинать с определения родовой принадлежности выделенных культур путем посева их на среду Симмонса, среду Олькеницкого, пептонную воду с триптофаном (на индол), среду с мочевиной и МПА для серологического типирования. Эти основные родовые признаки позволяют намного сократить число изучаемых в дальнейшем колоний.
Исследования, проведенные нами по отработке некоторых методических приемов выделения ЭПКП из воды поверхностных водоемов, сточных вод городской канализации и почвы земледельческих полей орошения, показали, что из 309 колоний, выросших на среде Эндо и сходных по культуральным свойствам с кишечными палочками, к роду эшерихин относилось только 21,7%. Применяемая первичная идентификация выросших колоний путем изучения некоторых родовых признаков почти в 4 раза сокращает время, затрачиваемое на агглютинацию культур, а также позволяет экономить дорогостоящие аг-Цглютинирующне эшерихиозные сыворотки.
Для сокращения времени исследования, упрощения анализа и экономии питательных сред нами также предлагается ускоренный метод выявления индолообразования микроорганизмами. Принцип метода заключается в нанесении бактериологической петлей на полоску индикаторной бумаги стандартной прописи микробной взвеси с МПА или суспензии клеток с мясопептонным бульоном либо 2 % пептонной воды. Наиболее рационально использовать культуру на скошенном МПА, подготовленную к высеву на пестрый ^ряд. При способности культуры образовывать Щиндол микробная взвесь на индикаторной полоске тотчас или в первые минуты окрашивается в розово-сиреневый цвет; также изменяется цвет индикаторной бумаги при нанесении жидких культур. При отсутствии способности к индоло-образованию цвет микробной массы не изменя-
УДК 614.71:546.491-073.75 *
Ртуть является одним из наиболее опасных загрязнителей окружающей среды, однако методы ее определения разработаны недостаточно.
^Фотометрические методы определения ртути неспецифичны [7, 8]. Так, при определении ртути в воздухе при взаимодействии с йодом в поглотительном растворе йодида калия определению мешают многие распространенные металлы, в первую очередь железо. При этом органические
ется, а после подсыхания она приобретает желтую окраску. Реакцию следует учитывать в первые минуты постановки пробы до подсыхания культуры. Предлагаемый метод испытан нами на 86 культурах микроорганизмов, изолированных из сточных вод, и 8 музейных штаммах патогенных эшерихий. Одновременно образование индола проверялось известным способом посева в 2 % пептонную воду с закрепленными в пробирках индикаторными полосками, выращиванием при 37 °С и учетом результатов через 24 ч. При сравнении предлагаемого и известного методов получены однозначные результаты выявления индолообразования как у культур из внешней среды, так и у музейных штаммов, что позволяет рекомендовать разработанный нами метод для практического использования.
Выводы. 1. Для выделения энтеропатоген-ных кишечных палочек из различных объектов окружающей среды целесообразно в качестве сред накопления использовать глюкозопептон-ную среду и 10 % желчный бульон.
2. С целью экономии агглютинирующих сывороток и времени персонала первичную идентификацию культур следует начинать с определения родовой принадлежности выросших колоний.
3. Предложенный ускоренный метод выявления индолообразования у микроорганизмов позволяет сократить время исследования и экономить питательные среды.
Литература
1. Информ. бюл. Всесоюз. центра по эшерихиям. 1972, выл. I.
2. Методические указания по обнаружению возбудителей кишечных инфекций бактериальной и вирусной природы в воде. М., 1980.
3. Методические указания по санитарно-микрпбролщ-мческо-му исследованию почвы. М, 1977.
4. Сидоренко Г. И., Багдасарьян Г. А.. Дмитриева Р. А. — Гиг. и сан., 1981, № 11, с. 4—7.
Поступила 26.11.84
соединения ртути, имеющие важную гигиеническую значимость, не определяются.
Чувствительность электрохимических методов определения ртути не превышает 10—20 мкг [11], гравиметрических — 30—50 мкг [10]. Надежное определение ртути может быть проведено атомно-абсорбционным методом, однако необходимые для этого модели атомно-абсорбцион-ных спектрофотометров весьма сложны, дорого-
М. Т. Дмитриев, Б. И. Фрадкин
ФЛЮОРЕСЦЕНТНОЕ РЕНТГЕНОРАДИОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РТУТИ В ВОЗДУХЕ И ДРУГИХ ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
НИИ общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
