CC BY
5
неограниченное время жить в культуре и дифференцироваться в релевантные типы клеток.
Технологией репрограммирования мононуклеарных клеток двух пациентов с GBA-ассоциированной формой БП (мутация p.N370S) и двух потенциально здоровых доноров получены линии ИПСК, проведена их характеристика (кариотипирование, иммунофлуоресцентный анализ и кПЦР на экспрессию маркеров плюрипотентно-сти, тест на спонтанную дифференцировку) [1]. Путем направленной дифференцировки ИПСК получены культуры дофаминергических нейронов, экспрессирующих специфичные маркеры (TH, LMX1A).
Проведено тестирование полученной культуры: оценен уровень экспрессии гена GBA и удельной активности ЭСазе.Относительно здорового контроля оба показателя снижены, что соответствует литературным данным [2].
В полученных нейронах наблюдается повышение активности фермента GCase в ответ на действие амброк-сола, который, согласно литературе, специфически связывается с белком и стабилизирует его конформацию. Амброксол — известное муколитическое средство — сейчас находится на стадии клинических испытаний в качестве лекарственного препарата для БП [3]. Наблюдаемый ответ культуры на действие препарата говорит об адекватности полученной модели.
Таким образом, в ходе работы получена перспективная клеточная модель, которая воспроизводит молекулярный фенотип мутации, вызывающей развитие БП, а также показано, что культура пригодна для поиска способов фармакотерапии данной патологии. Работа поддержана грантом РНФ № 19-75-20063.
Литература:
1. Grigor'eva E. V., Drozdova E.S., Sorogina D.A. et al. Stem Cell Research. 2022. V. 59. P. 102651.
2. Sanchez-Martinez A., Beavan M., Gegg M.E. et al. Scientific Reports. 2016. V. 6. P. 31380.
3. Mullin S., Smith L., Lee K. et al. JAMA Neurology. 2020. V. 77. P. 427-434.
ПОЛУЧЕНИЕ МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ БИОИСКУССТВЕННЫХ КОНСТРУКЦИЙ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ
А.Д. Дубко, А.В. Свирская, М.Ю. Юркевич, Д.Б. Нижегородова, М.М. Зафранская
УО Международный государственный экологический институт им. АД. Сахарова Белорусского государственного университета, Минск, Республика Беларусь
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: скаффолд, рецеллюляризация, ко-культура, мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки, тканеинженерная конструкция.
Разработка функционально состоятельных тканеинже-нерных конструкций печени (ТИК) обладает высоким практическим потенциалом и является перспективной научной платформой для исследований фармакологического, биоинформационного, клинического профилей, расширяет возможности для изучения межклеточного взаимодействия в ткани печени, оценки механизмов деактивации ксенобиотиков и действие их на метаболические пути.
Для сборки ТИК использованы изолированные доли скаффолда печени крысы (n=4) объёмом от 0,66 до 4,38 см3, полученные путем перфузионной
децеллюляризации [1]. Рецеллюляризацию образцов скаффолда проводили инъекционным способом в два этапа: сначала формировали подложку из мультипотент-ных мезенхимальных стромальных клеток (2,5х105 кл/ см3), затем через 24 часа вводили ко-культуру гепато-цитов и перитонеальных макрофагов (соотношение 3:1) в концентрации 3,25х106 кл/см3. Клеточные потери после рецеллюляризации вследствие выхода через капсулу скаффолда составили 18,3 ± 0,9%. Собранные ТИК культивировали течение 9 суток при 37°С и 5% СО2. Для поддержания собранных тИк в жизнеспособном состоянии разработана перфузионная система, обеспечивающая равномерное распределения питательной среды.
Оценку функциональной состоятельности ТИК проводили по синтезу альбумина и мочевины на 1, 3, 6, 9 сутки. На 1 сутки культивирования ТИК обладали максимальной синтезирующей активностью: продукция альбумина составила 24,6 ± 0,14 мг/млн кл/сут, что в 15,4 раза больше, чем в монослойной ко-культуре (1,6 ± 0,3 мг/млн кл/сут), мочевины — 8,65 ± 0,11 мкг/млн кл/сут. Однако, во всех образцах в период с 1 по 9 сутки культивирования наблюдалось стойкое снижение синтезирующей активности. Так, на 9 сутки продукция альбумина составила 4,6 мг/млн кл/сут, мочевины — 1,38 ± 0,21 мкг/млн кл/сут.
Таким образом, собранные ТИК обладали способностью продуцировать альбумин и мочевину на протяжении 9 суток с тенденцией постепенного снижения синтетической активности. Дальнейшая работа сконцентрирована по трем направлениям: разработка цельноорганных функционально состоятельных конструкций, обладающих высоким самоподдерживающим и регенеративным потенциалом; изучение и модификация метаболического потенциала ТИК; модернизация перфузионной системы обеспечения и длительной поддержки ТИК с целью создания условий культивирования максимально приближенных к физиологическим. Работа выполнена при финансовой поддержке Белорусского республиканского фонда фундаментальных исследований, грант № М19АРМ-016 от 02.05.2019.
Литература:
1. Дубко А.Д., Юркевич М.Ю., Лобай М.В. и др. Докл. НАН РБ,
2021. Т.65. № 4. С. 461-468.
НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ФОРМИРОВАНИЮ НАНОСТРУКТУРИРОВАННОЙ ПОВЕРХНОСТИ ТИТАНОВЫХ ИМПЛАНТАТОВ
А.Б. Дымников1, Е.А. Гостева2
1 Российский университет дружбы народов, Москва, Россия
2 Кафедра материаловедения полупроводников
и диэлектриков, Национальный исследовательский технологический университет МИСиС, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: дентальные имплантаты, остеоинтегра-ция, поверхность дентального имплантата, технологии обработки поверхности, стволовые клетки.
Основным материалом для изготовления дентальных имплантатов исторически является титан [3]. Всем известные качества титана, такие как биоинертность и высокая биосовместимость, коррозионная стойкость, низкая теплопроводность, немагнитность обусловливают его выбор в качестве материала для изготовления дентальных имплантатов.
Современные принципы дентальной имплантации базируются на фундаментальных исследованиях 60-70-х годов американского дантиста Leonard I. Linkow [5] и профессора анатомии Гетеборгского университета Per-Ingvar Branemark [4, 2, 1], в ходе которых был описан процесс остеоинтеграции и сформулированы основные принципы взаимодействия титана с костью и факторы, влияющие на процесс остеоинтеграции.
В основе феномена остеоинтеграции лежат процессы, происходящие на клеточно-молекулярном уровне, поэтому большое внимание уделяется исследованиям химического состава и микроструктуры поверхности титана, а также методов и способов ее обработки и модификации с целью придания остеоинтегративного потенциала.
В данной работе мы при помощи электронной микроскопии оценили микроструктуру поверхности дентальных имплантатов различных систем, представленных на отечественном рынке, провели микрорентгеноспек-тральный анализ основного материала имплантатов и сравнили основные методики обработки поверхности современных имплантатов. На основе имеющихся экспериментальных данных по формированию нанорелье-фа поверхности предложена новая технология обработки дентальных имплантатов, готовая к промышленному применению. Проведена оценка адгезии стволовых клеток к наномодифицированным поверхностям.
Литература:
1. А.А. Куликова, А.Б. Дымников, С.Ю. Иванов [и др.] Клиническая стоматология. - 2021. - Т. 24. - № 3. - С. 52-58.
2. А.А. Куликова, А.Б. Дымников, С.Ю. Иванов [и др.] Клиническая стоматология. - 2021. - Т. 24. - № 2. - С. 72-76.
3. Л.Е. Разбицкая, Е.А. Гостева, А.Б. Дымников Международная научно-практическая конференции им. Д.И. Менделеева, посвященная 90-летию профессора Р.З. Магарила : Материалы конференции, Тюмень, 25-27 ноября 2021 года
4. Branemark PI. J Prosthet Dent. 1983 Sep;50(3): 399-410.
5. Linkow LI. Dent Surv. 1971 Sep; 47(9): 32-3.
ПЕРСПЕКТИВЫ СОЗДАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ АВРАНА ЛЕКАРСТВЕННОГО В РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
К.С. Дырина1, Р.А. Абрамович2, Р.Д. Вырщиков3, О.Г. Потанина2, Ю.А. Фомина3, Н.Б. Шестопалова3, Т.Ю. Калюта3, А.С. Федонников3
1 ООО «Биннофарм Гоупп», Москва, Россия
2 Научно-производственный участок Института регенеративной медицины МНОЦ МГУ
им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
3 ФГБОУ ВО Саратовский ГМУ
им. В.И. Разумовского, Саратов, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: Авран лекарственный, перспективное ЛРС, кукурбитацин, алкалоиды, флавоноиды, химический состав, противоопуховевая активность.
Несмотря на широкое развитие производства лекарственных препаратов, биологически активные соединения растительного происхождения продолжают занимать значительное место в современной медицине.
Одним из ценных видов перспективного лекарственного растительного сырья является Авран лекарственный (Gratiola officinalis L.) - травянистое растение,
относящееся к семейству Норичниковых, ранее использовался в научной медицине с 1968 года (ФС 42-235885) в составе сбора по прописи Здренко. Кроме того, авран лекарственный входит в Фармакопею Франции десятого издания. Авран лекарственный входит в группу малоизученных растений, так как недостаточно информации о его химическом составе, фармакологическом действии, отсутствуют методы стандартизации. Все это диктует необходимость фармакогностического исследования сырья Аврана лекарственного и разработки нормативной документации для него [1].
Авран лекарственный широко распространён в Евразии и Северной Америке и хорошо известен в народной медицине. В траве Аврана лекарственного найдены биологически активные вещества, имеющие широкий спектр лечебного действия на организм человека, включая противотуберкулезное и антиопухолевое, а также спазмолитический, антимикробный и антиоксидантный эффекты. Кроме того, из листьев Аврана Лекарственного получают средства с антикахексическими и имуномо-дулирующими свойствами. По данным изученных нами научных источников, большие перспективы разработки противоопухолевых препаратов нового поколения связаны с биофлавоноидами. Авторы полагают, что в связи с широким спектром действия биофлавоноидов, содержащимися в данном растении, потенциально возможно, на их основе разработать новые безопасные противоопухолевые средства. Наряду с флавоноидами авран лекарственный содержит не менее перспективные вещества в плане разработки лекарственных препаратов — тетра-циклические тритерпеноиды, включая кукурбитацин, которые обладают широким спектром фармакологических эффектов (противоопухолевое, противовоспалительное, антибактериальное, противовирусное действие против вируса гепатита В (ИВУ), ингибирование репликации вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и антидепрессивное действие). В настоящее время имеются многочисленные сведения по экспериментальным фармакологически исследованиям кукурбитацина, подтверждающие его ценность. Кроме того, состав аврана лекарственного привлекает внимание ученых содержащимися в нем алкалоидами, к сожалению, до сих пор еще не установленной структуры, но проявляющими значительную активность и, прежде всего, как противоопухолевые средства [2].
В народной медицине спиртовая настойка Аврана Лекарственного используется для лечения асцита, гене-зом которого является сердечная недостаточность, при этом действующими веществами, обуславливающими терапевтический эффект, по данным проведенных исследований считают кукурбитацин и элатеризид [4].
Имеются сведения по результатам проведенных доклинических исследований, где были использованы неопухолевые эпителиальные клетки клеточной культуры почки эмбриона свиньи БРБУ и опухолевые клетки рака шейки матки человека Ие1_а. При суточном воздействии экстракта аврана лекарственного на клетки БРБУ наблюдался цитостатический эффект при подавлении пролиферативной активности неопухолевых клеток, при этом не вызывая их гибель. Что касается опухолевых клеток Ие1_а, то экстракт в малых дозах снижал концентрацию СКК и замещал опухолевую ткань соединительной. Полученные данные свидетельствовали о том, что опухолевые клетки наиболее чувствительны к экстракту Аврана лекарственного [3].
Данные по химическому составу аврана лекарственного разрозненны, в некоторых случаях противоречивы, что требует дополнительных исследований и их систематизации.
