CC BY
6
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
79
неограниченное время жить в культуре и дифференцироваться в релевантные типы клеток.
Технологией репрограммирования мононуклеарных клеток двух пациентов с GBA-ассоциированной формой БП (мутация p.N370S) и двух потенциально здоровых доноров получены линии ИПСК, проведена их характеристика (кариотипирование, иммунофлуоресцентный анализ и кПЦР на экспрессию маркеров плюрипотентно-сти, тест на спонтанную дифференцировку) [1]. Путем направленной дифференцировки ИПСК получены культуры дофаминергических нейронов, экспрессирующих специфичные маркеры (TH, LMX1A).
Проведено тестирование полученной культуры: оценен уровень экспрессии гена GBA и удельной активности ЭСазе.Относительно здорового контроля оба показателя снижены, что соответствует литературным данным [2].
В полученных нейронах наблюдается повышение активности фермента GCase в ответ на действие амброк-сола, который, согласно литературе, специфически связывается с белком и стабилизирует его конформацию. Амброксол — известное муколитическое средство — сейчас находится на стадии клинических испытаний в качестве лекарственного препарата для БП [3]. Наблюдаемый ответ культуры на действие препарата говорит об адекватности полученной модели.
Таким образом, в ходе работы получена перспективная клеточная модель, которая воспроизводит молекулярный фенотип мутации, вызывающей развитие БП, а также показано, что культура пригодна для поиска способов фармакотерапии данной патологии. Работа поддержана грантом РНФ № 19-75-20063.
Литература:
1. Grigor'eva E. V., Drozdova E.S., Sorogina D.A. et al. Stem Cell Research. 2022. V. 59. P. 102651.
2. Sanchez-Martinez A., Beavan M., Gegg M.E. et al. Scientific Reports. 2016. V. 6. P. 31380.
3. Mullin S., Smith L., Lee K. et al. JAMA Neurology. 2020. V. 77. P. 427-434.
ПОЛУЧЕНИЕ МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ БИОИСКУССТВЕННЫХ КОНСТРУКЦИЙ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ
А.Д. Дубко, А.В. Свирская, М.Ю. Юркевич, Д.Б. Нижегородова, М.М. Зафранская
УО Международный государственный экологический институт им. АД. Сахарова Белорусского государственного университета, Минск, Республика Беларусь
e-mail: dubko.immun@gmail.com
Ключевые слова: скаффолд, рецеллюляризация, ко-культура, мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки, тканеинженерная конструкция.
Разработка функционально состоятельных тканеинже-нерных конструкций печени (ТИК) обладает высоким практическим потенциалом и является перспективной научной платформой для исследований фармакологического, биоинформационного, клинического профилей, расширяет возможности для изучения межклеточного взаимодействия в ткани печени, оценки механизмов деактивации ксенобиотиков и действие их на метаболические пути.
Для сборки ТИК использованы изолированные доли скаффолда печени крысы (n=4) объёмом от 0,66 до 4,38 см3, полученные путем перфузионной
децеллюляризации [1]. Рецеллюляризацию образцов скаффолда проводили инъекционным способом в два этапа: сначала формировали подложку из мультипотент-ных мезенхимальных стромальных клеток (2,5х105 кл/ см3), затем через 24 часа вводили ко-культуру гепато-цитов и перитонеальных макрофагов (соотношение 3:1) в концентрации 3,25х106 кл/см3. Клеточные потери после рецеллюляризации вследствие выхода через капсулу скаффолда составили 18,3 ± 0,9%. Собранные ТИК культивировали течение 9 суток при 37°С и 5% СО2. Для поддержания собранных тИк в жизнеспособном состоянии разработана перфузионная система, обеспечивающая равномерное распределения питательной среды.
Оценку функциональной состоятельности ТИК проводили по синтезу альбумина и мочевины на 1, 3, 6, 9 сутки. На 1 сутки культивирования ТИК обладали максимальной синтезирующей активностью: продукция альбумина составила 24,6 ± 0,14 мг/млн кл/сут, что в 15,4 раза больше, чем в монослойной ко-культуре (1,6 ± 0,3 мг/млн кл/сут), мочевины — 8,65 ± 0,11 мкг/млн кл/сут. Однако, во всех образцах в период с 1 по 9 сутки культивирования наблюдалось стойкое снижение синтезирующей активности. Так, на 9 сутки продукция альбумина составила 4,6 мг/млн кл/сут, мочевины — 1,38 ± 0,21 мкг/млн кл/сут.
Таким образом, собранные ТИК обладали способностью продуцировать альбумин и мочевину на протяжении 9 суток с тенденцией постепенного снижения синтетической активности. Дальнейшая работа сконцентрирована по трем направлениям: разработка цельноорганных функционально состоятельных конструкций, обладающих высоким самоподдерживающим и регенеративным потенциалом; изучение и модификация метаболического потенциала ТИК; модернизация перфузионной системы обеспечения и длительной поддержки ТИК с целью создания условий культивирования максимально приближенных к физиологическим. Работа выполнена при финансовой поддержке Белорусского республиканского фонда фундаментальных исследований, грант № М19АРМ-016 от 02.05.2019.
Литература:
1. Дубко А.Д., Юркевич М.Ю., Лобай М.В. и др. Докл. НАН РБ,
2021. Т.65. № 4. С. 461-468.
НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ФОРМИРОВАНИЮ НАНОСТРУКТУРИРОВАННОЙ ПОВЕРХНОСТИ ТИТАНОВЫХ ИМПЛАНТАТОВ
А.Б. Дымников1, Е.А. Гостева2
1 Российский университет дружбы народов, Москва, Россия
2 Кафедра материаловедения полупроводников
и диэлектриков, Национальный исследовательский технологический университет МИСиС, Москва, Россия
e-mail: dymnikov_ab@pfur.ru
Ключевые слова: дентальные имплантаты, остеоинтегра-ция, поверхность дентального имплантата, технологии обработки поверхности, стволовые клетки.
Основным материалом для изготовления дентальных имплантатов исторически является титан [3]. Всем известные качества титана, такие как биоинертность и высокая биосовместимость, коррозионная стойкость, низкая теплопроводность, немагнитность обусловливают его выбор в качестве материала для изготовления дентальных имплантатов.
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
