CC BY
9
• Ключевые слова: рокуроний, подготовка проб, ЖХ-МС, ионная ловУшка, кровь, моча, печень, почка
ВВЕДЕНИЕ
Рокуроний - недеполяризующий периферический миорелаксант со средней продолжительностью действия. Блокирует н-холинорецепторы скелетных мышц и препятствует деполяризующему действию ацетилхолина. Препарат применяется в качестве дополнительного средства при общей анестезии - для обеспечения релаксации скелетной мускулатуры во время хирургических вмешательств, для облегчения интубации трахеи. Связывается с белками плазмы на 30 %. Элиминируется в основном с желчью (70 %), в меньшей степени почками (30 %). Степень выведения с мочой достигает 40 % в течение 12-24 ч, 47 % выводится с калом. Примерно 50 % дозы выводится в виде рокурония.
Рокуроний (рис. 1) является четвертичным аммониевым основанием, однако он легко экстрагируется из водных растворов, благодаря значительному гидрофобному вкладу стероидной структуры. Значительный молекулярный вес рокурония, а также наличие четвертичного атома азота, не позволяет определять его методом газовой хромато-масс-спектрометрии (ГХ-МС). В данной работе описывается идентификация рокурония в биологических объектах методом жидкостной хромато-масс-спектрометрии.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Анализ проводили на жидкостном хроматографе Ultimate 3000 (Thermo Scientific) с масс-спектрометром AmaZon speed (ионная ловушка, Bruker Daltonics) в градиентном режиме (фаза А: 0,1% муравьиной кислоты, 2мМ формиата аммония, 1% ацетонитрила в воде; фаза В: 0,1% муравьиной кислоты, 2мМ формиата аммония, 1% воды в ацетонитриле). Колонка - Acclaim RSLC 120 C18 120А (2,1x100 мм, 2,2 мкм, Dionex), предколонка VanGuard ACQUITY UPLC BEH C18, (2,1x5 мм, 1,7 мкм). Масс-спектрометр настраивали для работы в условиях электрораспыления при быстрой смене полярности и сбором данных в информационно-зависимом режиме. Идентификацию выполняли на основе сравнения получаемых спектров MS2 и MS3 с содержимым масс-спектрометрических библиотек Toxtyper 1_1 Library Custom и MWW 2014.
Для анализа мочи использовали пробоподготовку, заключающуюся в извлечении с помощью холодного аце-тонитрила и последующего охлаждения (-18 °C и ниже) в течение 10 минут. Пробоподготовка крови и тканей предусматривала последовательную жидкостно-жидкост-ную экстракцию образцов смесью хлорбутан - изоамило-вый спирт (99:1) и этилацетатом. Ткани предварительно подвергались ферментативному гидролизу трипсином. В качестве внутреннего стандарта использовали раствор 5-(4-метилфенил)-5-фенилгидантоин с концентрацией 10 мг/л. Рокуроний обнаружили в моче, крови, печени
Рис. 1. Структурная формула рокурония
Первичной стадией фрагментации рокурония является дезацетилирова-ние, в результате чего формируется интенсивный ион, m/z 487, хорошо заметный в MS2 спектре. Поскольку данное направление фрагментации является малохарактеристичным, а остальные ионы
в спектре Ы82 малоинтенсивны, окончательное заключение о наличие в образцах рокурония принимали на основании спектров М83. Ввиду наличия большого числа алифатических групп спектр М83 сложен для расшифровки, тем не менее содержит достаточное число интенсивных ионов для уверенного опознания рокурония.
ВЫВОДЫ
Внедрение в практическую работу судебно-химиче-ского отдела метода жидкостной хромато-масс-спектро-метрии с использованием масс-спектрометра типа ионная ловушка с базой данных более 900 токсикологически значимых веществ позволило при рутинном скрининге обнаруживать в объектах биологического происхождения рокуроний - лекарственное вещество, ранее не встречающееся в экспертных случаях отдела, идентификация которого методом газожидкостной хроматографии затруднена.
МОНИТОРИНГ СЛУЧАЕВ ОБНАРУЖЕНИЯ СТИМУЛЯТОРОВ АМФЕТАМИНОВОГО РЯДА В ТРУПНОМ МАТЕРИАЛЕ В 2015 ГОДУ (ПОСТЕР)
• М.В. Марченко1, Н.А. Крупина1,2, С.А. Кучук12
• 1Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области (нач. - д.м.н., проф. В. А. Клевно);
• 2Кафедра судебной медицины (зав. -д.м.н., проф. В. А. Клевно) ФУВ ГБУЗ МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского
• Аннотация: Доклад посвящен обзору случаев с летальным исходом, произошедших на территории Московской области в 2015 году, в которых при проведении судебно-химических исследований (СХИ) были определены стимуляторы амфетаминового ряда (САР).
• Ключевые слова: стимуляторы амфетаминового ряда, САР, причина смерти
ВВЕДЕНИЕ
В 2015 году число исследований аутопсийных объектов на наличие наркотических средств, в т.ч. САР, проведенных в судебно-химическом отделе (СХО) ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» остается стабильно высоким. Так, с целью обнаружения САР было проведено исследование объектов биологического происхождения от 4865 трупов.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Количественное определение САР проводилось методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором. В 100 случаях были проведены количественные определения САР в крови: из них в 93 случаях определен амфетамин, в четырех - метамфетамин, в двух - медилен-диоксиметамфетамин (МДМА) и в одном - метилендиок-сиамфетамин (МДА).
По статистическим данным ГБУЗ МО «Бюро СМЭ», в восьми случаях обнаружены только САР, из них в семи -амфетамин (диапазон концентраций (ДК) от 0,1 мг/л до 5,4 мг/л, среднее значение (СЗ) - 1,1 мг/л), в одном -МДМА (концентрация 1,2 мг/л). В этих случаях в статистических картах судебно-медицинского исследования трупа (СК) указаны следующие причины смерти: механическая травма - 2 случая и отравление производными амфетамина - 6 случаев.
В 6 случаях, где в результате СХИ наряду с амфетамином (ДК в крови от 0,1 мг/л до 2,2 мг/л, СЗ - 0,7 мг/л) был обнаружен этиловый спирт (ДК в крови от 1,1 %о до 3,5 %о, СЗ - 2,1 %о), в статистических картах (СК) указаны следу-
ющие причины смерти: механическая травма - 5 случаев, отравление производными амфетамина - 1 случай.
В остальных 86 случаях, где в результате СХИ наряду с САР были обнаружены другие наркотические средства и лекарственные вещества, в СК среди причин смерти указаны следующие: механическая травма - 10 случаев (ДК амфетамина в крови от 0,1 мг/л до 6,7 мг/л, СЗ - 2,1 мг/л); отравление героином - 22 случая (ДК амфетамина в крови в 21 случае - от 0,1 мг/л до 1,2 мг/л, СЗ - 0,33 мг/л, концентрация МДМА в крови в 1 случае - 0,03 мг/л); отравление морфином - 13 случаев (ДК амфетамина в крови от 0,1 мг/л до 8 мг/л, СЗ - 1,7 мг/л), отравление производными амфетамина -9 случаев (ДК амфетамина в крови от 0,1 мг/л до 9,5 мг/л, СЗ - 3 мг/л); комбинированное отравление наркотическими средствами - 14 случаев (ДК амфетамина в крови от 0,1 мг/л до 6,1 мг/л, СЗ - 1,4 мг/л); отравление мета-доном - 6 случаев (ДК амфетамина в крови от 0,1 мг/л до 1,2 мг/л, СЗ - 0,5 мг/л); отравление угарным газом - 2 случая (ДК амфетамина в крови от 1,3 мг/л до 4 мг/л, СЗ - 2,7 мг/л); и по 1 случаю - отравление лекарственными средствами (концентрация амфетамина в крови 6,6 мг/л), отравление этиловым спиртом (концентрация в крови амфетамина 0,3 мг/л, этилового спирта 2,0 %%), отравление каннабиноидами (концентрация амфетамина в крови 0,1 мг/л), отравление прочими наркотиками (концентрация амфетамина в крови 0,1 мг/л), острая коронарная недостаточность (концентрация амфетамина в крови 0,1 мг/л), постинфарктный кардиосклероз (концентрация амфетамина в крови 3,2 мг/л), внутримозговое кровоизлияние (концентрация амфетамина в крови 0,2 мг/л), инфаркт миокарда (концентрация амфетамина в крови 2,4 мг/л), неустановленная и алкогольная кардиомиопатия (концентрация амфетамина в крови 0,1 мг/л и 0,05 мг/л соответственно).
Из 100 случаев с количественным определением САР в крови 91 % приходится на мужчин в возрасте от 18 до 47 лет (средняя концентрация 2,1 мг/л), и 9 % - на женщин в возрасте от 24 по 39 лет (средняя концентрация 1,4 мг/л); на возрастной диапазон (от 29 до 34 лет) по обоим полам приходится 40 % всех случаев.
ВЫВОДЫ
1. В 86 % случаев САР были определены в крови в комбинации с другими наркотическими средствами и лекарственными веществами.
2. В 6 % случаев САР были определены в крови в комбинации с этиловым спиртом.
3. В большинстве рассмотренных случаев передозировка САР не является причиной смерти, а употребление САР является сопутствующим состоянием в случаях с обстоятельствами: падение с высоты, ДТП, железнодорожная травма, утопление, колото-резаное ранение, огнестрельное ранение, где причинами смерти установлены механическая травма, асфиксия.
■ СЛУЧАЙ ИЗ ПРАКТИКИ. ОТРАВЛЕНИЕ-АЛКАЛОИДАМИ ЧЕМЕРИЦЫ (ПОСТЕР)
Т.Н. Орлова1, А.М. Григорьев1, Н.А. Крупина12
• 1Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области (нач. - д.м.н., проф. В. А. Клевно)
• 2Кафедра судебной медицины (зав. -д.м.н., проф. В. А. Клевно) ФУВ ГБУЗ МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского
• Аннотация: Отравления алкалоидами, содержащимися в чемерице Лобеля, встречаются
в практике судебно-химического отдела и вызывают трудности в проведении исследований методами газожидкостной хроматографии из-за значительного молекулярного веса и малой термической стабильности. Использование жидкостной хромато-масс-спектрометрии с регистрацией точных масс и токсикологического анализатора на базе жидкостного хроматографа с масс-спектрометром типа ионная ловушка, позволяет ввести эти алкалоиды в перечень веществ, которые идентифицируют при скрининге биологических жидкостей в случаях отравлений неустановленным веществом. • Ключевые слова: токсикология, алкалоиды, чемерица, жидкостная хроматография, масс-спектрометрия высокого разрешения
ВВЕДЕНИЕ
Метод жидкостной хромато-масс-спектрометрии при ионизации в режиме электрораспыления внедрен в практическую работу судебно-химического отдела ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» в 2015 году и используется для идентификации различных токсикологически важных веществ в крови и моче.
Чемерица Лобеля - многолетнее травянистое растение, произрастающее, в частности, в европейской части России. Все части растения содержат алкалоиды, преимущественно стероидной структуры: корни - до 2,4 %, корневища - до 1,3 %, трава - 0,55 %. Из корневища и корней выделены: иервин, рубииервин, термин, гермидин, вератрамин, вератридин, протоверин, протовератрин, псевдоиервин, изорубиервин, вератрозин и ряд других соединений. Многие из них очень ядовиты. При сильных отравлениях смерть может наступить через 3 часа после попадания ядов чемерицы в организм.
В фармацевтической практике в России разрешено использовать только корни и корневища чемерицы Лобеля. Препараты черемицы применяются как наружное средство против вшей, блох, личинок подкожного овода, а также в виде болеутоляющих мазей для растираний. Основные лекарственные формы: настой, отвар, настойка, мазь.
СЛУЧАЙ ИЗ ПРАКТИКИ
Службой неотложной медицинской помощи в приемное отделение больницы МО был доставлен пациент со следующими симптомами: сильное головокружение и рвота, пониженное артериальное давление. При малейшем изменении положения головы и тела симптомы обострялись.
С учетом информации, полученной со слов пациента, и симптоматики врач ставит диагноз: отравление алкалоидами чемерицы. Кровь была направлена для проведения химико-токсикологического исследования в судебно-хи-мический отдел ГБУЗ МО «Бюро СМЭ».
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование проводили на двух жидкостных хро-мато-масс-спектрометрических системах при ионизации в режиме электрораспыления.
Первая состояла из хроматографа 1260 Infinity с колонкой Zorbax Eclipse Plus C18 (2,1x100 мм, 3,5 мкм) и масс-спектрометра 6520 QTOF (Agilent Technologies). Разделение выполняли в условиях градиентного элюирования, регистрация спектров МС и МС2 в положительном режиме (TargetMSMS). Данную систему использовали для идентификации алкалоидов.
Вторая состояла из хроматографа UltiMate 3000 с колонкой Acclaim RSLC 120 C18 (2,1x100 мм, 2,2 мкм) (Thermo
