CC BY
10
УДК 613.63:547.391.1]-07:616-008.83:547.291]-074
Л. В. Кузнецова, Ю. П. Тихомиров
МОДИФИКАЦИЯ МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ МУРАВЬИНОЙ
КИСЛОТЫ В БИОСРЕДАХ
Горьковский НИИ гигиены труда и профзаболеваний
•4
Изучение процессов метаболизма акриловых соединений в организме основано на анализе биологических сред, в первую очередь чфев-и—и^ мочи^на^^одержание исходных продуктов и их первичных, вторичных и т. д. метаболитов. Сведения по изучению поведения акрилатов в организме весьма ограниченны в связи с отсутствием эффективных методов определения их в различных средах. При поступлении эфиров ме-такриловой кислоты в организм первыми продуктами метаболизма являются метакриловая кислота и метиловый спирт. Метаболизм метилового спирта протекает с образованием более токсичных соединений (муравьиный альдегид, метаналь), которые через стадию образования муравьиной кислоты расщепляются до углекислого газа [2]. Поэтому при изучении метаболизма акрилатов возникает необходимость определения в крови и моче конечного продукта биотрансформации — муравьиной кислоты.
В настоящее время известен способ определения муравьиной кислоты, основанный на извлечении ее из анализируемой среды, восстановлении до формальдегида и определении последнего по реакции с хромотроповой кислотой [1]. Извлечение муравьиной кислоты из анализируемой жидкости проводится вакуумной дистилляцией при пониженной температуре в среде сухого льда. Такие условия проведения дистилляции не всегда можно создать в лабораториях. Кроме того, отгонка кислоты при этом протекает чрезвычайно медленно, со скоростью 0,5— 1 мл/ч. Если в пробе крови имеются растворенные газы, которые мешают определению, то требуются повторное замораживание и отгонка образцов, что еще больше увеличивает время анализа.
Нами разработан способ извлечения муравьиной кислоты путем дистилляции подкисленного безбелкового фильтрата при атмосферном давлении; муравьиная кислота отгоняется при этом полностью. Отгонка проводится с помощью цельнопаяного перегонного аппарата, имеющего сообщение с атмосферой; вместимость куба холодильника 20—30 см3, длина водяного холодильника 10 см. Отгонка образца протекает в течение 15—20 мин.
В известном способе восстановление муравьиной кислоты до формальдегида проводится при взаимодействии ее с магниевой лентой. За неимением последней мы применили для этой цели более доступную стружку металлического маг-
ния. Превращение муравьиной кислоты при этом не снижается и составляет 30—35 % • - С учетом изложенного выше анализ крови проводится в следующей последовательности. В центрифужную пробирку вносят 4 мл 20 % трихлоруксусной кислоты, затем 0,5—1 мл анализируемой крови и 2 мл дистиллированной воды, центрифугируют в течение 5 мин, центрифу-гат сливают в аппарат для перегонки, отгоняют около 5 мл жидкости, затем в куб добавляют 1 мл дистиллированной воды и еще отгоняют до б мл дистиллята. 3,5 мл дистиллята переносят в пробирку с 100 мг магниевой стружки, пробирку помещают в сосуд с тающим льдом, добавляют 0,5 мл соляной кислоты в 10 приемов порциями по 0,05 мл в течение 10 мин. Затем приливают 3,5 мл хромотропной кислоты, кипятят на водяной бане 30 мин, добавляют дистиллированную воду до 9 мл и фотоколориметри-руют в кювете с толщиной слоя 20 мм при длине волны 570 мкм.
При анализе мочи 2 мл пробы вносят в перегонный аппарат, добавляют 2 мл 20 % трихлоруксусной кислоты и 3 мл дистиллированной воды; дальнейший анализ аналогичен анализу крови.
Для построения градуировочного графика готовят серию стандартных растворов муравьиной кислоты в 0,01 н. соляной кислоте в интервале концентраций 1—10 мкг/мл. Каждый раствор подвергают анализу, включая все стадии обработки пробы. Математическая обработка результатов, полученных при построении градуировочного графика, показала, что надежные результаты анализа (относительное стандартное отклонение не превышает 0,3) наблюдаются, начиная с концентрации 2 мкг муравьиной кислоты в пробе.
Определение содержания муравьиной кислоты в крови и моче по указанному методу было проведено при изучении метаболизма метилмета-крилата в организме лабораторных животных. Через 1 ч после ингаляционной затравки метил-метакрилатом в крови крыс муравьиная кислота определялась в пределах от 18 до 29 мкг/мл.
Литература
• 1. Гадаскина И. Д., Филов В. А. Превращения и определение промышленных органических ядов в организме.— Л., 1971. —С. 154—156. 2. Румянцев А. П., Тиунов Л. ВОстроумова Н. А. // Токсикология. — М., 1981. —Т. 12.— С. 65—117.
Поступила 20.04.87
