CC BY
10
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 3, 2021
выявления ПНГ-клона. Основными диагнозами направления были: апластическая анемия (АА], ПНГ, миелодисплатический синдром (МДС). У подавляющего большинства пациентов (71,4%) диагнозом направления на обследование являлся АА/ПНГ.
В качестве популяционного контроля использовалась группа доноров крови, жителей европейской части России, из 1456 человек в возрасте от 18 до 60 лет: мужчин - 871 (59,8%), женщин - 585 (40,2%), выразивших добровольное согласие на проведение иммуногенетического обследования для включения в регистр доноров костного мозга.
Диагностика наличия ПНГ-клона осуществлялась с помощью проточной цитометрии по общепринятой методике с использованием стандартного протокола, рекомендованного Международным Обществом Клинической Цитометрии (ICCS].
ПНГ-клон определяли среди эритроцитов, гра-нулоцитов и моноцитов методом, используя проточный цитофлуориметр Beckman Coulter (США]. Использовали следующий набор реагентов: для выявления ПНГ клеток на эритроцитах - CD235a -FITC/ CD59-PE; на гранулоцитах - CD45-PC7/CD15-PC5/ CD24-PE/ FLAER-Alexa 488; на моноцитах - CD45-PC7/ CD64-PC5/CD14-PE /FLAER-Alexa 488.
HLA-типирование гена DRB1 проводилось на уровне базового разрешения, т.е. выполнялось определение групп аллелей с помощью полимеразной цепной реакции с сиквенс-специфичными прайме-рами (PCR-SSP) производства "Protrans" (Германия]. В случае выявления группы аллелей HLA-DRB1*15 выполнялось высокоразрешающее типирование с помощью PCR-SSP с сиквенс-специфичными прайме-рами производства "Olerup" (Германия].
Статистическую обработку проводили при помощи пакета программ Arlequin software package, version 3.5. Достоверность различий определяли с помощью критерия х 2 с поправкой Йейтса.
Результаты. Патологический клон среди грануло-цитов и/или моноцитов был выявлен у 57 (74,03%] обследованных лиц; у 20 (25,97%] пациентов, на-
правленных на обследование, ПНГ-клон не был обнаружен. Величина ПНГ-клона варьировала от 0,1% до 99,9%, при этом клинически значимым считали клон более 10%, т.н. «большой клон», а содержание клеток с ПНГ-фенотипом от 0,1 до 10% расценивали как «малый клон». Большой клон был определен у 41 человека (73,2%], малый клон - у 16 человек (26,8%].
Анализ распределения групп аллелей показал, что среди пациентов с наличием ПНГ-клона значительно повышена частота группы аллелей ^А-DRB1*15 - 66,07% против 28,37% в группе контроля. При последующем высокоразрешающем типирова-нии группы аллелей HLA-DRB1*15 установлено, что в 100% случаев в этой группе аллелей определялся НЬА^В1*15:01.
На фоне столь значимого увеличения частоты HLA-DRB1*15:01 у пациентов с наличием ПНГ-клона установлено достоверное снижение частоты групп аллелей НЬА^В1*01 - 10,75% против 23,7% и НЬА-DRB1*16 - 1,75% против 8,65% по сравнению с группой здоровых лиц. Распределение групп аллелей гена HLA-DRB1 у пациентов с отсутствием ПНГ-клона незначительно отличалось от такового в группе по-пуляционного контроля. В этой группе пациентов высокоразрешающее типирование группы аллелей HLA-DRB1*15 также выявило НЬА^В1*15:01 в 100% случаев. Изучение частоты групп аллелей HLA-DRB1 среди пациентов в зависимости от величины патологического клона не показало каких-либо значимых различий. наибольшая частота HLA-DRB1*15:01 наблюдалась в группе больных с АА (73,53%), несколько реже этот аллель определялся у пациентов с МДС (62,5%) и ПНГ (53,33%), однако во всех группах больных частота аллеля HLA-DRB1*15:01 существенно превышала этот показатель в группе популяционно-го контроля
Вывод. Установлено, что частота иммуногенети-ческого маркера HLA-DRB1*15:01 значимо повышена как в группе больных пароксизмальной ночной гемо-глобинурией, так у больных АА/ПНГ и МДС/ПНГ.
Пирожков И.А., Малышев М.Е., Резник О.Н., Скворцов А.Е., Кузьмин Д.О., Хабирова Т.Г.
МИКРО-РНК - НОВЫЙ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ МАРКЕР В ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ПОСТТРАНСПЛАНТАЦИОННОГО ПЕРИОДА
ГБУ «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт скорой помощи имениИ.И Джанелидзе», Санкт-Петербург
Введение. Лабораторное обследование является важнейшим компонентом посттрансплантационного мониторинга, позволяющим существенно повысить продолжительность и качество жизни реципиентов трансплантата. Стандартно для мониторинга состояния пересаженного органа используется биопсия трансплантата, однако к недостаткам метода относят инвазивность и часто неинформативность биоптата для исследования. Перспективным направлением развития ранней неинвазивной диагностики пост-трансплантационых осложнений считается опреде-
ление профиля специфичных микроРНК. МикроРНК относятся к классу малых эндогенных некодирую-щих РНК длиной 19-25 нуклеотидов, участвующих в посттранскрипционной регуляции экспрессии генов эукариот. Возможность использования микроРНК для ранней диагностики и прогноза течения патологических процессов обусловлена особыми свойствами молекулы: микроРНК стабильна в биологических средах, может успешно выделяться из образцов различных тканей, уровни экспрессии микроРНК не различаются по полу и возрасту, количественный анализ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
экспрессии микроРНК может быть проведен с помощью стандартных лабораторных методик.
Цель исследования: проанализировать особенности профилирования микроРНК и определить уровни экспрессии специфичных микроРНК в образцах сывороток и нефробиоптатах реципиентов почки, определить возможности использования микроРНК в качестве маркеров сохранности донорского органа, течения посттрансплантационного периода и адекватности проводимой иммуносупрессивной терапии.
Объект исследования: планируется проведение обследования реципиентов почки, прооперированных в ПСПбГМУ им. И.П.Павлова и ГБУ СПб НИИ СП им. И.И.Джанелидзе.
Методы исследования: биоинформационный анализ, ПЦР в реальном времени, ИФА.
Результаты. По результатам обзора научной литературы и баз данных MiRBase, TargetScan, MiRanda
определены наиболее перспективные микроРНК-кан-дидаты: микроРНК-10, микроРНК-15, микроРНК-20, микроРНК-21, микроРНК-142, микроРНК-146, микроРНК-155, микроРНК-223. На основании результатов комплексного исследования выбранных микроРНК-кандидатов планируется создать мультиплексную диагностическую панель специфических микроРНК для мониторинга состояния пациентов трансплантационных центров методом ПЦР в реальном времени.
Выводы. Таким образом, данные о ключевой роли микроРНК в физиологических и патофизиологических процессах, различие уровней экспрессии микроРНК, специфичное для определённых тканей и органов позволяют рассматривать возможность их применения в качестве неинвазивных молекулярно-генетических маркеров течения посттрансплантационного периода.
Реутова Н.В., Малышев М.М.
ОПЫТ РАБОТЫ ГОРОДСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ ИММУНОГЕНЕТИКИ И СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ЗА 10 ЛЕТ
Санкт-Петербургский Научно-Исследовательский институт скорой помощи имени И.И.Джанелидзе, г. Санкт-Петербург
Городская лаборатория иммуногенетики и серологической диагностики создана около 30 лет назад в соответствии с распоряжением Комитета по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга с целью обеспечения высококвалифицированного иммунологического обследования доноров и реципиентов органных трансплантатов и повышения эффективности трансплантаций. За эти годы поменялся режим и объем работы лаборатории, но цели и задачи остались прежними. Это формирование единого городского «Листа ожидания» (ЛО) потенциальных реципиентов органного трансплантата, обеспечение планового и экстренного подбора иммунологически совместимых пар «донор-реципиент» и посттрансплантационный мониторинг развития иммунологического отторжения трансплантата. Начиная с 2010 года, лаборатория работает в соответствие со стандартами Европейской Федерации Иммуногенетиков.
За последние 10 лет значительно расширился ЛО, так как в него добавились новые центры трансплантации. На сегодняшний день, ЛО составляют около 300 реципиентов, ожидающих трансплантации почки, сердца, печени, легкого и поджелудочной железы. Все пациенты имеют идентификационный номер, чтобы позволяет учитывать их время нахождения в ЛО. Повысилось точность типирования HLA-генов в связи с тем, что лаборатория полностью перешла на молекулярное типирование. Определение дотрансплантаци-онного уровня HLA-сенсибилизации у реципиентов осуществляется как с помощью лимфоцитотоксиче-ского теста, как базового метода, так и более чувствительного иммуноферментного анализа, что с учетом ежегодного трёхкратного обследования образцов лимфоцитов составляет 55 тысяч анализов в год.
Тщательный анализ спектра антител у сенсибилизированных пациентов и его учет при подборе донора позволяет минимизировать риск острого отторжения и дать шанс на успешную трансплантацию больным, которые обладают наибольшим риском развития острого отторжения трансплантата: это реципиенты для повторной трансплантации (составляют 14% ЛО] и пациенты с высоким уровнем сенсибилизации (составляют 20% ЛО]. Из них 15% имеют комплемен-тсвязывающие цитотоксические антитела.
Лаборатория обеспечивает плановый подбор ги-стосовместимых доноров для родственной трансплантации почки. По результатам исследований за 10 лет проведено более 200 подборов пар донор-реципиент и выполнено более 60 родственных трансплантаций. Лаборатория также работает в режиме круглосуточного дежурства, обеспечивая экстренный подбор доноров для неродственной органной трансплантации. Разработан алгоритм подбора кандидатов на трансплантацию в соответствии с критериями отбора доноров и ургентности состояния реципиентов. За последние 10 лет в г. Санкт-Петербург было обследовано около 800 потенциальных доноров органного трансплантата и были проведены трансплантации печени более 400 реципиентам, почки - 370 рец., сердца - 160 рец., легкое - 6 рец. и 1 трансплантация поджелудочной железы. Приблизительно 20% предполагаемых доноров «бракуются» по причине обнаружения маркеров гемотрансмиссивных инфекций (осуществляется автоматизированным методом с помощью прибора ARCHITECT I 2000].
Было проведено 17 повторных трансплантаций почки, из них у 1-го пациента это была третья трансплантация. Улучшился подбор донора, имеющего с
