Применение Т-клеточного эпитопного алгоритма оценки иммуногенности hla-dpb1 аллелей в процессе селекции оптимального донора гемопоэтических стволовых клеток Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XI, № 2, 2015

Кузьмич Е. В., Алянский А. Л., Иванова Н. Е., Бондаренко С. Н.

ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии имени Р. М. Горбачевой

ПРИМЕНЕНИЕ Т-КЛЕТОЧНОГО ЭПИТОПНОГО АЛГОРИТМА ОЦЕНКИ ИММУНОГЕННОСТИ HLA-DPB1 АЛЛЕЛЕЙ В ПРОЦЕССЕ СЕЛЕКЦИИ ОПТИМАЛЬНОГО ДОНОРА ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

Цель работы. Проанализировать возможность использования Т-клеточного эпитопного алгоритма оценки иммуногенности HLA-DPB1 аллелей в процессе селекции оптимального неродственного донора гемопоэтических стволовых клеток.

Материалы и методы. Выполнен анализ результатов 54 аллогенных неродственных трансплантаций гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК), проведенных пациентам с онкогематологическими заболеваниями в период 2009-2012 гг. Подбор пар реципиент/донор осуществлен по 10 HLA аллелям (HLA-A,— B,— C,— DRB1,— DQB1) при использовании типирования высокого разрешения. Определение HLA-DPB1 аллелей выполнено с помощью методов полимеразной цепной реакции с использованием сиквенс-специфичных оли-гонуклеотидных проб (реагенты фирмы «One Lambda») и метода секвенирования (реагенты фирмы «Protrans»). Для классификации HLA-DPB1 аллелей донора и реципиента по степени иммуногенности применен Т-клеточный эпи-топный алгоритм (TCE-алгоритм) (Zino E. et al., 2007; Crocchiolo R. et al., 2009; Fleischhauer K. et al., 2012). Статистический анализ данных выполнен с помощью пакета SAS Enterprise Guide (версия 5.1). Для анализа риска развития острой реакции «трансплантат-против-хозяина» применены точный тест Фишера, метод логистической регрессии. Сравнительный анализ общей выживаемости больных осуществлен с помощью метода Каплан-Майер. Для оценки достоверности различий применен Log-rank тест. Многофакторный анализ общей выживаемости пациентов после алло-ТГСК выполнен с помощью метода регрессии Кокса.

Результаты. Из 54 пар донор/реципиент, подобранных по 10/10 HLA аллелям (HLA-A,— B,— С,— DRB1,— DQB1), только 16,7 % имели соответствие в HLA-DPB1 локусе. HLA-DPB1 аллели, определенные у пациентов и доноров, были классифицированы по степени иммуноген-ности в соответствии с Т-клеточным эпитопным алгоритмом (TCE-алгоритм). В зависимости от

принадлежности аллелей донора и реципиента к группам высокой, средней, низкой иммуногенности нами были выделены «допустимые» и «недопустимые» согласно ТСЕ-алгоритму комбинации HLA-DPB1 аллелей. Недопустимые согласно ТСЕ-алгоритму комбинации HLA-DPB1 аллелей были определены у 25 (46,3 %) пар донор/реципиент. Из них 29,6 % пар имели несоответствие аллелей в векторе «трансплантат-против-хозяина», 16,7 % — в векторе «хозяин-против-трансплантата». Сравнительный анализ частоты развития острой реакции «трансплантат-против-хозяина» 3-4 степени выявил статистически достоверное увеличение риска развития осложнения в группе пациентов старше 18 лет, перенесших алло-ТГСК с применением немие-лоаблативных режимов кондиционирования от доноров с недопустимым несоответствием HLA-DPB1 аллелей в векторе «хозяин-против-транс-плантата» — КЯ3.75 (С1 1.01-13.40, р = 0.04). Не было установлено статистически достоверной зависимости между наличием у пары донор/реципиент недопустимого несоответствия HLA-DPB1 аллелей в векторе «трансплантат-против-хозяина» и частотой развития острой РТПХ 3-4 степени. Сравнительный анализ 2-летней общей выживаемости был выполнен в группе пациентов с диагнозом «острый лейкоз» (ОЛЛ — 17 человек, ОМЛ — 27 человек). Установлено, что общая 2-летняя выживаемость больных после алло-ТГСК от доноров, подобранных по 12/12 аллелям, и пациентов, перенесших алло-ТГСК от доноров со степенью HLA подбора 11/12 аллелей с допустимым согласно ТСЕ-алгоритму несоответствием HLA-DPB1 аллелей, не имела значимых различий — 75 и 65 %. Общая 2-летняя выживаемость больных, получивших трансплантат от доноров с недопустимым согласно ТСЕ-алгоритму несоответствием HLA-DPB1 аллелей, составила 38 % (р = 0.047). Многофакторный анализ, выполненный с учетом иммуногене-тических и клинико-биологических параметров, выявил тенденцию снижения общей двухлетней выживаемости больных при наличии у пары донор/реципиент недопустимых согласно ТСЕ-

«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ИММУНОГЕНЕТИКИ И ТКАНЕВОГО ТИПИРОВАНИЯ»

алгоритму комбинаций HLA-DPB1 аллелей (НЮ.53, р = 0.078).

Заключение. Т-клеточный эпитопный алгоритм, разработанный для оценки иммуноген-ности HLA-DPB1 аллелей, позволяет выделить неблагоприятные (ассоциированные с повышением риска развития осложнений, снижением

Санкт-Петербург 24-25 июня 2015 г.

общей выживаемости больных) комбинации аллелей пациента и потенциального донора ГСК. Исключение вариантов подбора с недопустимыми комбинациями HLA-DPB1 аллелей будет способствовать оптимизации процесса селекции донора, повышению эффективности аллогенной неродственной ТГСК.

Кузьмич Е. В., Макаренко О. А., Алянский А. Л., Ермолина В. В., Мерзлякова С. В., Иванова Н. Е., Афанасьев Б. В.

ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии имени Р. М. Горбачевой

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА СЕКВЕНИРОВАНИЯ ДЛЯ HLA ТИПИРОВАНИЯ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ДОНОРОВ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК В РЕГИСТРЕ ПСПБГМУ им. И.П. ПАВЛОВА

Цель работы. Анализ распределения частот HLA аллелей, определенных с помощью метода секвенирования, в группе потенциальных доноров костного мозга Регистра ПСПбГМУ им. акад. И. П. Павлова.

Материалы и методы. Обследованы 200 потенциальных доноров гемопоэтических стволовых клеток Регистра ПСПбГМУ им. акад. И. П. Павлова. Высокоразрешающее типирова-ние ЫЬА-А, НЬА^, ЫЬА-С, НЬА^КВ1, ЫЬА-DQB1 аллелей осуществлено с помощью метода секвенирования по Сэнгеру. Использованы коммерческие наборы реагентов фирмы «Рго^аш» (Германия). Обработка результатов исследова-

ния осуществлена с помощью методов популя-ционной генетики с использованием программы Arlequin (версия 3.5.1.2).

Результаты. На основании результатов высокоразрешающего HLA типирования, выполненного с помощью метода секвенирования, исследовано распределение частот HLA аллелей в группе потенциальных доноров Регистра ПСПбГМУ им. акад. И. П. Павлова. Определены HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, HLA-DQB1 аллели, встречающиеся в обследованной группе с наибольшей частотой (таблица).

Распределение частот HLA аллелей.

Таблица.

HLA-A Частота, % HLA-B Частота, % HLA-C Частота, % HLA-DRB1 Частота, % HLA-DQB1 Частота, %

*02:01 25,3 *07:02 9,1 *07:02 12,3 *07:01 11,8 *03:01 17,1

*24:02 12,4 *13:02 7,1 *04:01 12,3 *15:01 8,2 *02:01 13,3

*03:01 12,1 *08:01 6,5 *06:02 12,3 *01:01 8,0 *05:01 10,2

*01:01 10,3 *15:01 5,2 *07:01 10,9 *03:01 6,2 *03:02 8,3

*11:01 5,7 *18:01 4,8 *12:03 9,1 *04:01 5,5 *06:02 7,5

*26:01 4,9 *51:01 4,5 *02:02 5,7 *16:01 5,4 *05:02 6,0

*32:01 4,3 *44:02 4,0 *03:04 4,0 *11:01 4,9 *06:03 4,9

*25:01 3,7 *35:01 3,4 *03:03 3,7 *13:01 3,8 *03:03 2,6

*33:01 1,7 *38:01 3,3 *17:01 3,7 *13:03 3,4 *04:02 2,0

*68:01 1,7 *41:02 3,2 *01:02 2,3 *11:04 3,4 *06:01 1,4

Выделены 5-локусные гаплотипы, представленные в группе обследованных потенциальных доноров с максимальной частотой: А*01:01 -B*08:01 - С*07:01 - DRB1*03:01 - DQB1*02:01 (2,9 %). А*03:01 - B*07:02 - С*07:02 -DRB1*15:01 - DQB1*06:02 (1,6 %).

Заключение. В настоящей работе обобщен первый опыт применения метода секвенирова-ния для типирования HLA аллелей потенциальных доноров костного мозга Регистра ПСПбГМУ им. акад. И. П. Павлова.