АССОЦИАЦИЯ ГЕНОВ HLA-DRB1 С РАЗВИТИЕМ ПАРОКСИЗМАЛЬНОЙ НОЧНОЙ ГЕМОГЛОБИНУРИИ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ

На основании полученных данных количественного определения химеризма была выявлена корреляция с клиническим статусом пациентов. Количественная ПЦР является надежным, информативным и высоко

чувствительным методом для мониторирования химеризма у пациентов с уровнем реципиентских клеток менее 1% (чувствительность до 0,05%] и рекомендуется для внедрения в лабораторную практику.

Назаретян М., Джордан Ф., Авакян С., Усян А., Сирунян А., Азарян А., Оганесян З.

ВНЕШНЯЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА - ПРОВЕРКА КОМПЕТЕНТНОСТИ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ

^А-ЛАБОРАТОРИИ АРДКМ

Армянский Регистр Доноров Костного Мозга, Ереван, Армения

Проверка компетентности (ПК] - это стандартная процедура, предполагающая периодическую рассылку исследуемых проб лабораториям для анализа и/ или идентификации, а также сравнения полученных данных исследуемой лаборатории с результатами других лабораторий с заданными величинами и последующим информированием результатов лабораториям-участникам и другим соответствующим организациям.

Лаборатории, стремящиеся получить аккредитацию European Federation for Immunogenetics (EFI), должны принимать участие в стандартизованном типировании HLA-антигенов и проверке компетентности (ПК] в отношении всех используемых лабораторией исследований, представленных на получение аккредитации.

Целью процедуры ПК АРДКМ являлась оценка качества исследований (точность, специфичность и воспроизводимость] в полученных от референс-лабо-раторий образцах крови методом ПЦР-SSP.

Требования для проведения ПК предполагают проведение тестирования в повседневных (обычных] для лаборатории условиях, при участии всех ее работников, использование для контрольного тестирования рутинных образцов крови, представление результатов в установленные заданием сроки и сохранение конфиденциальности информации результатов тестирования.

С 2004 г. начато участие АРДКМ в программе ASHI Proficiency Testing (PT). Для этого исследовалось по 10 образцов ДНК в год (низкое и высокое разрешение] и

тестирование (только высокое разрешение) в формате ASHI Disease Association Proficiency Testing (PT).

С 2007 по 2010 г.г. оценка ПК проводилась в рамках участия лаборатории в программе EFI Регион 8 EPT, а начиная с 2018 г. по настоящее время, в связи с изменением приписанного Регистру региона, уже в рамках программы EFI Регион 5 EPT.

Результаты проведения ПК АРДКМ: В рамках программы ASHI Proficiency Testing (PT) было проведено тестирование 10 образцов в год (низкое и высокое разрешение) антигенов HLA класса I (DNA) и класса II (DNA). В формате ASHI Disease Association PT было проведено 10 исследований (B27 detection только низкое разрешение). В формате программы EFI Регион 8 EPT проведено 10 исследований (все - низкое разрешение), а после смены региона, в формате EFI Регион 5 EPT - еще 10 исследований (низкое и высокое разрешение).

Заключение. Начиная с 2004 г., по настоящее время, достигнута и сохраняется 100% показатель соответствия (конкордантности) результатов с тестовыми образцами референс- лабораторий. Деятельность HLA-лаборатории АРДКМ полностью отвечает требованиям тестирования ПК, обеспечивающим качество HLA-типирования в соответствии с стандартами EFI и ASHI. Это основной компонент качества деятельности Банга доноров АРДКМ, являющегося составной частью и активным резервом Всемирной Сети Доноров Костного Мозга (BMDW) в международном поиске и предоставлении стволовых клеток костного мозга от родственных и неродственных доноров.

Павлова И.Е., Глазанова Т.В., Шилова Е.Р., Чубукина Ж.В., Розанова О.Е., Бубнова Л.Н.

АССОЦИАЦИЯ ГЕНОВ HLA-DRB1 С РАЗВИТИЕМ ПАРОКСИЗМАЛЬНОЙ НОЧНОЙ

ГЕМОГЛОБИНУРИИ

ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА России», г. Санкт-Петербург

Введение. Роль иммунной системы в развитии пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ] подтверждается обнаружением ассоциации между ПНГ и определенными аллельными вариантами генов Главного комплекса гистосовместимости (HLA-генов). При этом механизмы таких ассоциаций остаются неясными. Возможно, это зависит от функциональных свойств определенных молекул HLA-генов.

Цель. Изучение особенностей распределения HLA-DRB1 аллелей у больных ПНГ, проживающих в европейской части России.

Материалы и методы. В исследование были включены 77 пациентов, образцы периферической крови которых направлялись в лабораторию им-муногематологии ФГБУ РосНИИГТ ФМБА России из различных регионов европейской части России для

ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 3, 2021

выявления ПНГ-клона. Основными диагнозами направления были: апластическая анемия (АА], ПНГ, миелодисплатический синдром (МДС). У подавляющего большинства пациентов (71,4%) диагнозом направления на обследование являлся АА/ПНГ.

В качестве популяционного контроля использовалась группа доноров крови, жителей европейской части России, из 1456 человек в возрасте от 18 до 60 лет: мужчин - 871 (59,8%), женщин - 585 (40,2%), выразивших добровольное согласие на проведение иммуногенетического обследования для включения в регистр доноров костного мозга.

Диагностика наличия ПНГ-клона осуществлялась с помощью проточной цитометрии по общепринятой методике с использованием стандартного протокола, рекомендованного Международным Обществом Клинической Цитометрии (ICCS].

ПНГ-клон определяли среди эритроцитов, гра-нулоцитов и моноцитов методом, используя проточный цитофлуориметр Beckman Coulter (США]. Использовали следующий набор реагентов: для выявления ПНГ клеток на эритроцитах - CD235a -FITC/ CD59-PE; на гранулоцитах - CD45-PC7/CD15-PC5/ CD24-PE/ FLAER-Alexa 488; на моноцитах - CD45-PC7/ CD64-PC5/CD14-PE /FLAER-Alexa 488.

HLA-типирование гена DRB1 проводилось на уровне базового разрешения, т.е. выполнялось определение групп аллелей с помощью полимеразной цепной реакции с сиквенс-специфичными прайме-рами (PCR-SSP) производства "Protrans" (Германия]. В случае выявления группы аллелей HLA-DRB1*15 выполнялось высокоразрешающее типирование с помощью PCR-SSP с сиквенс-специфичными прайме-рами производства "Olerup" (Германия].

Статистическую обработку проводили при помощи пакета программ Arlequin software package, version 3.5. Достоверность различий определяли с помощью критерия х 2 с поправкой Йейтса.

Результаты. Патологический клон среди грануло-цитов и/или моноцитов был выявлен у 57 (74,03%] обследованных лиц; у 20 (25,97%] пациентов, на-

правленных на обследование, ПНГ-клон не был обнаружен. Величина ПНГ-клона варьировала от 0,1% до 99,9%, при этом клинически значимым считали клон более 10%, т.н. «большой клон», а содержание клеток с ПНГ-фенотипом от 0,1 до 10% расценивали как «малый клон». Большой клон был определен у 41 человека (73,2%], малый клон - у 16 человек (26,8%].

Анализ распределения групп аллелей показал, что среди пациентов с наличием ПНГ-клона значительно повышена частота группы аллелей ^А-DRB1*15 - 66,07% против 28,37% в группе контроля. При последующем высокоразрешающем типирова-нии группы аллелей HLA-DRB1*15 установлено, что в 100% случаев в этой группе аллелей определялся НЬА^В1*15:01.

На фоне столь значимого увеличения частоты HLA-DRB1*15:01 у пациентов с наличием ПНГ-клона установлено достоверное снижение частоты групп аллелей НЬА^В1*01 - 10,75% против 23,7% и НЬА-DRB1*16 - 1,75% против 8,65% по сравнению с группой здоровых лиц. Распределение групп аллелей гена HLA-DRB1 у пациентов с отсутствием ПНГ-клона незначительно отличалось от такового в группе по-пуляционного контроля. В этой группе пациентов высокоразрешающее типирование группы аллелей HLA-DRB1*15 также выявило НЬА^В1*15:01 в 100% случаев. Изучение частоты групп аллелей HLA-DRB1 среди пациентов в зависимости от величины патологического клона не показало каких-либо значимых различий. наибольшая частота HLA-DRB1*15:01 наблюдалась в группе больных с АА (73,53%), несколько реже этот аллель определялся у пациентов с МДС (62,5%) и ПНГ (53,33%), однако во всех группах больных частота аллеля HLA-DRB1*15:01 существенно превышала этот показатель в группе популяционно-го контроля

Вывод. Установлено, что частота иммуногенети-ческого маркера HLA-DRB1*15:01 значимо повышена как в группе больных пароксизмальной ночной гемо-глобинурией, так у больных АА/ПНГ и МДС/ПНГ.

Пирожков И.А., Малышев М.Е., Резник О.Н., Скворцов А.Е., Кузьмин Д.О., Хабирова Т.Г.

МИКРО-РНК - НОВЫЙ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ МАРКЕР В ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ПОСТТРАНСПЛАНТАЦИОННОГО ПЕРИОДА

ГБУ «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт скорой помощи имениИ.И Джанелидзе», Санкт-Петербург

Введение. Лабораторное обследование является важнейшим компонентом посттрансплантационного мониторинга, позволяющим существенно повысить продолжительность и качество жизни реципиентов трансплантата. Стандартно для мониторинга состояния пересаженного органа используется биопсия трансплантата, однако к недостаткам метода относят инвазивность и часто неинформативность биоптата для исследования. Перспективным направлением развития ранней неинвазивной диагностики пост-трансплантационых осложнений считается опреде-

ление профиля специфичных микроРНК. МикроРНК относятся к классу малых эндогенных некодирую-щих РНК длиной 19-25 нуклеотидов, участвующих в посттранскрипционной регуляции экспрессии генов эукариот. Возможность использования микроРНК для ранней диагностики и прогноза течения патологических процессов обусловлена особыми свойствами молекулы: микроРНК стабильна в биологических средах, может успешно выделяться из образцов различных тканей, уровни экспрессии микроРНК не различаются по полу и возрасту, количественный анализ