CC BY
16
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 3, 2021
нального регистра доноров костного мозга имени Васи Перевощикова. Тотальная ДНК выделялась из 200 мкл крови с использованием автоматизированной станции QIAcube HT System (Qiagen, Германия]. Концентрация и качество выделенной ДНК оценивалась с помощью спектрофотометра Implen NanoPhotometer NP 80 (Implen). Для дальнейшей подготовки библиотек были использованы наборы двух производителей: NGSgo (GenDX, Нидерланды] и Holotype (Omixon, Венгрия]. Секвенирование проводили с использованием MiSeq reagent kit v.2 и сек-венатора MiSeq (Illumina, США]. Анализ результатов проводили с использованием программного обеспечения, предоставляемого производителями наборов для подготовки библиотек: NGSengine и HLA Twin.
Результаты. Среди 7230 потенциальных доноров гемопоэтических стволовых клеток всего было обнаружено 18 редких и 15 очень редких аллелей HLA. Редкие аллели: A*11:72, A*02:01:71,A*02:188,
В*44:27:01, В*15:01:10, В*07:252, С*03:54, С*14:25, С*03:02:02, С*02:16:02, DQB1*02:17, DRB1*14:12:01, DRB1*13:26:01, DRB1*13:15, DRB1*14:54:01, DRB1*08:03:03, DRB1*14:89, DRB1*13:26:01. Очень редкие аллели: А*11:83,А*30:01:04, B*13:45, B*35:15:01, B*27:133, B*27:148, С*07:308, С*07:303, С*03:143, С*06:143, С*07:02:32, С*04:105Ц DQB1*06:02:04, DRB1*09:20, DRB1*11:04:07. Кроме того были выявлены новые аллели НЬА, которые получили официальные названия А*11:362 и B*44:493, согласно классификации Комитета ВОЗ по номенклатуре факторов НЬА системы.
Выводы. Выполненная работа позволила определить редкие аллели, представленные в Национальном регистре доноров костного мозга имени Васи Перевощикова. Такие исследования актуальны для дальнейшего изучения разнообразия НЬА-аллелей у представителей различных российских популяций, что позволит увеличить эффективность подбора доноров ГСК.
БеркосА.С., Терентьева М.А., Табак М.В., Беляева Е.В.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПОДБОРА ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ДОНОРОВ РЕГИСТРА, ТИПИРОВАННЫХ ПО ТРЕМ ЛОКУСАМ HLA
ФГБУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург
Введение. Одним из важных факторов, влияющих на успех трансплантации ГСК, является скорость подбора донора, поскольку клиническое состояние реципиента может достаточно быстро измениться. Известно, что наиболее благоприятным моментом для выполнения трансплантации является первая ремиссия, достигнутая в ходе терапии. В последние годы типирование потенциальных доноров ГСК в РФ, в том числе и в нашем институте, в основном выполняется методом молекулярного типирова-ния по пяти локусам НЬА: А, B,C, DRB1, DQB1, однако часть доноров типирована по трем (А, B, DRB1), или четырем (А, B, С, DRB1]. Такие не полностью типиро-ванные доноры обычно имеются в базах регистров с длительной историей существования. Максимально полное типирование доноров, выполненное по пяти локусам, включая типирование на высоком уровне разрешения, обеспечивает наибольшую эффективность и скорость подбора, однако, поскольку лишь малая часть доноров, входящих в регистр, окажется совместимой с пациентом и будет востребована для заготовки ГСК, «дотипирование» доноров в отсутствие заявки представляется недостаточно обоснованным.
Цель исследования. Анализ вероятности и скорости нахождения HLA-A,B,C,DRB1,DQB1 идентичного донора, первоначально типированного по антигенам трёх локусов - А, B, DRB1, и совпадающего с пациентом по этим специфичностям.
Материалы и методы. 171 донор из регистра ФГБУ РосНИИГТ ФМБА России, типированный по трехлокусному фенотипу, совпадающий с реципиен-
том из центра трансплантации ГСК в соответствии с полученной заявкой. Молекулярное типирование локусов A, B, C, DRB, DQB1 выполняли методами PCR-SSP и SSO (базовый уровень разрешения]. Высокоразрешающее типирование было проведено 31 донору.
Результаты. При «дотипировании» локусов С и DQB^ 171 донора нашего регистра, совпавшего с реципиентом по A, B, DRB1 фенотипу, было установлено, что 74 (43,3%) донора полностью совпали с пациентом по 5 локусам HLA. Остальные 97 (56,7%) доноров в подавляющем большинстве случаев 71 (41,5%) не совпали с пациентом по локусу С: 63 (36,8%) имели расхождение по одному С антигену, 8 (4,7%) - по двум. Расхождения по антигенам локуса DQB1 обнаружены только в 7,6% случаев. Необходимо подчеркнуть, что время, в течение которого проводилось «дотипирование» доноров, как правило, не превышало 3 дней. Типирование проводилось из образцов донорской крови, хранящихся в банке лаборатории. Следует отметить, что в большинстве случаев перед проведением С и DQB1 типирования проводилась «активация» доноров: выясняли состояние здоровья донора для выявления возможных противопоказаний к донорству ГСК и получали подтверждение согласия на возможную донацию. Только при готовности донора проводилось С и DQB1 «дотипирование». Результаты направлялись в трансплантационную клинику и вносились в базу данных регистра, соответственно увеличивая долю доноров, типированных по пяти локусам. Высокоразрешающее типирование проводилось из вновь
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
взятого образца крови донора, при этом было установлено 11(6,4%] полностью совместимых пар донор-реципиент.
Выводы. Полученные данные свидетельствуют о том, что наличие в регистре доноров, типирован-ных по трём локусам, не снижает эффективности
подбора, и способствует увеличению числа доноров, типированных по пяти локусам, в том числе на уровне высокого разрешения, в соответствии с заявками трансплантационных клиник, что позволяет более рационально использовать дорогостоящие реагенты.
Бубнова Л.Н.1, Павлова И.Е.1, Беркос А.С.1, Терентьева М.А.1, Глазанова Т.В.1, Ерохина Л.В.1, Беляева Е.В.1, Чечеткин А.В.1, Башкетова Н.С.2, Чхинджерия И.Г.2, Кожемякина М.А.3,
Азаров Д.В3., Кузнецова Р.Н.4, Тотолян А.А4.
ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ, ОПРЕДЕЛЯЮЩИЕ ВОСПРИИМЧИВОСТЬ ИЛИ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ К РАЗВИТИЮ ИНФЕКЦИИ, ВЫЗВАННОЙ ВИРУСОМ SARS-COV-2
1 ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА России»,
2 Управление Роспотребнадзора по городу Санкт-Петербург
3 ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Санкт-Петербург»
4 ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Введение. Главный комплекс гистосовместимо-сти человека является одним из важнейших генетических факторов в ответе на инфекцию. Ключевая роль, которую молекулы ША играют в иммунном ответе, осуществляя презентацию пептидов инфекционных патогенов, и огромная молекулярная вариабельность аллелей ША в человеческих популяциях, стали основанием для проведения многочисленных исследований, направленных на изучение роли ША-генотипов в индивидуальных особенностях ответа на новую инфекцию, вызванную вирусом SARS-CoV-2. При этом исследование связи индивидуального ША-генотипа и возникновения и/или характера течения SARS-CoV-2 инфекции должно выполняться в сравнении с распределением генов ША среди жителей соответствующего региона.
Целью настоящего исследования явилось определение предрасполагающих и протективных им-муногенетических факторов, определяющих восприимчивость и/или резистентность к инфекции, вызванной вирусом SARS-CoV-2, у жителей СевероЗападного региона России.
Материалы и методы. В исследование были включены жители Северо-западного региона РФ (г. Санкт-Петербург]. Из них - 138 человек, перенесших новую коронавирусную инфекцию - COVID-19, среди них 61 мужчина (44,2%) и 77 женщин (55,8%), в возрасте от 20 до 65 лет. Заболевание было подтверждено регистрацией в Системе автоматизированного учета инфекционных и паразитарных заболеваний в Санкт-Петербурге "САУ "Инфекция" (рег. № 2008615797 от 04.12.2008г.] с получением эпидномера. Группу популяционного контроля составили 1456 добровольцев в возрасте от 20 до 60 лет (871 мужчина (59,8%) и 585 женщин 40,2%].
ША-типирование проводили при помощи моле-кулярно-генетических методов на уровне базового разрешения, выполняя определение групп аллелей ША-генов локусов А, В, DRB1 с помощью полиме-разной цепной реакции с сиквенс-специфичными праймерами (PCR-SSP) производства "Ргойа^" (Германия] и с помощью полимеразной цепной реак-
ции с олигонуклеотидными сиквенс-специфичны-ми пробами (PCR-SSOP] производства BAG HEALTH CARE (Германия]. Оба использованных метода HLA-типирования позволяли выявить 21 группу аллелей локуса HLA-A (*01, *02, *03, *11, *23, *24, *25, *26, *29, *30, *31, *32, *33, *34, *36, *43, *66, *68, *69, *74, *80); 36 групп аллелей локуса HLA-В (*07, *08, *13, *14, *15, *18, *27, *35, *37, *38, *39, *40, *41, *42, *44, *45, *46, *47, *48, *49, *50, *51, *52, *53, *54, *55, *56, *57, *58, *59, *67, *73, *78, *81, *82, *83]; 13 групп аллелей локуса HLA-DRB1 (*01, *03, *04, *07, *08, *09, *10, *11, *12, *13, *14, *15, *16].
Статистическую обработку результатов выполняли с помощью методов популяционной генетики с использованием программ: Microsatellite Tools for Excel и Arlequin 3.5.1.3.
Результаты. Среди лиц, перенесших COVID-19, статистически значимо снижена частота HLA-A*02 - 39,86 % и HLA-A*26 - 4,35 % по сравнению с контрольной группой (51,72 %, х2=7,58, и 9,07 %, Х2=4,17, соответственно]. Одновременно более чем в 2 раза увеличена частота HLA-A*29 (5,80 % у перенесших COVID-19, и 2,47 % в контрольной группе, Х2=4,03). Это позволяет считать, что группы аллелей HLA-A*02 и HLA-A*26 ассоциированы со сниженным риском развития заболевания, в то время как HLA-A*29, ассоциирован с высоким риском заболевания.
В локусе HLA-В у лиц, перенесших COVID-19 (таблица 2], также как и в контроле, чаще всего определялись следующие группы HLA-аллелей: В*07 (21,01% и 25,9%], В*44 (13,77 % и 18,54 %), В*18 (9,42 % и 13,7 %). Наиболее редкие группы HLA-аллелей контрольной группы - В*53, В*59, В*67, В*73, В*81 - среди перенесших COVID-19 не выявлены. Группа HLA-аллелей В*35, вторая по частоте в группе популяционного контроля (20,88%), у перенесших COVID-19 встречается реже (16,67%), однако значимых различий в локусе HLA-В сравниваемых групп не установлено. В локусе HLA-DRB1 также не выявлено какие-либо значимых различий частот групп HLA аллелей у лиц, перенесших COVID-19, по
