CC BY
16
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 3, 2021
ске. Анализ проводится по 5 локусам (ША-А, ША-В, ША-С, тД^В1, НЬА^В1] с разрешением 3 поля. Пробоподготовка 192 образцов одним лаборантом занимает один рабочий день. Анализ и контроль качества данных выполняется полностью автоматически и не требует ручного присвоения аллелей. Интерпретация результатов по 192 образцам занимает около 30 минут. Расчётная потоковая производительность составляет 25 000 образцов в год для одного секвенатора. Тест-система валидирована на выборке из 2 000 образцов (20 000 аллелей], доля совпадающих аллелей составила 100%.
Выводы. Разработка подобного решения потребовала существенной оптимизации протокола
пробоподготовки и алгоритма анализа данных для минимизации трудозатрат персонала лабораторий. При этом увеличение количества типируемых локу-сов и разрешения свыше необходимого (для эффективного подбора доноров], приводит к усложнению результирующего генотипа, а также роста его неоднозначности. Все указанные особенности выделяют разработанную тест-систему среди существующих на рынке решений для ША-типирования методом NGS, рассчитанных в основном на исследовательские, а не клинические задачи.
Разработанная тест-система для потокового ША-типирования успешно валидирована и внедрена в практическое здравоохранение.
Суслова Т.А.12, Крохин А.А.1, Вавилов М.Н. %2, Беляева С.В.Евдокимов А.В. 2, Родионова Е.С.1, Султанова А.А.2, Чуманова Е.А.2, Миронова Е.А.2, Кофиади И. А3
ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ, ПРЕДРАСПОЛАГАЮЩИЕ К РАЗВИТИЮ COVID-19
(HLA, AB0, RH-HR)
1ГБУЗ «Челябинская областная станция переливания крови», Челябинск 2ФГБОУ ВО «Челябинский государственный университет», Челябинск 3ФГБУ "ГНЦ Институт иммунологии" ФМБА России, Москва
Эпидемия новой коронавирусной инфекции затронула население Челябинской области. По данным Роспотребнадзора (20.05.2021] всего в области зарегистрировано 62069 случаев заболевания (показатель на 100 тыс. населения -1790,6].
Цель работы - выяснить наличие/отсутствие генов предрасположенности систем HLA, Rh-Hr, АВО к возникновению и развитию коронавирусной инфекции у населения Челябинской области, русских. Был проведен анализ распределения HLA, AB0, Rh-Hr среди доноров Челябинской областной станции переливания крови.
Материалы и методы. Статистическую обработку результатов исследований проводили с применением стандартных методов. Были рассчитаны частоты генов, антигенов. Достоверность различий оценивали с помощью критерия х2, различия считались значимы при р<0,05.
Для расчета частот генов HLA из Регистра потенциальных доноров стволовых клеток были сформированы когорты: 1] группа доноров, имевших в анамнезе факт заболевания коронавирусной инфекцией за период 2020 - апрель 2021 года - 90 человек 2] группой сравнения служили доноры Регистра, не отмечавшие факт заболевания в этот период и не включенные в Федеральный регистр лиц, больных COVID-19 (ФР) - 90 человек. HLA-типирование было выполнено донорам при их вступлении в Регистр методом SSP по локусам HLA -A,B,C,DRB1,DQB1.
Для анализа распределения групп крови АВО были сформированы следующие группы сравнения: 3] доноры, сдававшие кровь за период ноябрь 2020 - апрель 2021, не болевшие COVID-19 и не состоявшие в ФР - 476, 4] доноры, инфицированные SARS-Cov-2 и перенесшие заболевание в легкой или бессимптомной форме с наличием антител к воз-
будителю - 381 человек 5] доноры антиковидной плазмы, перенесшие двустороннюю пневмонию без сопутствующих хронических заболеваний - 133 человека 6] группа пациентов антиковидного госпиталя, перенесших двустороннюю пневмонию и с наличием различной сопутствующей патологии (сердечно-сосудистой, онкологической, др] - 107 человек.
Для сравнения распределения антигенов системы Rh-Hr были использованы следующие группы доноров: 3], 4], 5].
Результаты. Сравнение частот генов HLA: A, B, C, DRB1, DQB1 у доноров, перенесших COVID-19, показало, что у лиц, инфицированных SARS-Cov-2, в сравнении с донорами отрицающими факт заболевания за исследуемый период наблюдается некоторое повышение частоты С*03 (gf=0,063 и gf=0,041, соответственно] и снижение DRB1*14 (gf=0,004 и gf=0,024, соответственно] на уровне тенденции, что позволяет предположить возможную предрасполагающую роль HLA-C*03 для развития заболевания и протек-тивную роль HLA-DRB1*14 у русских Челябинской области. Обе обнаруженные ассоциации являются ассоциациями слабой силы.
Распределение антигенов системы AB0 в исследуемых группах выявило значительное достоверное повышение доли лиц со второй группой крови A среди реконвалесцентов двухсторонней пневмонии как с наличием сопутствующих хронических заболеваний (48,60%], так и без них (41,18%]. В группе доноров, инфицированных за исследуемый период времени (имеющих антитела к возбудителю], но отрицающих факт заболевания, он составил 32,02%. В контрольной группе доноров, не инфицированных коронавирусом и не имеющих антител к возбудителю за период ноябрь 2020 - апрель 2021, этот пока-
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
затель составил 25,4%.
Антиген 0, наоборот, встречался значительно чаще среди доноров, не имеющих антитела к коро-навирусу (45,17%], в то время как среди доноров, перенесших двустороннюю пневмонию, он составил 25,21%, а у больных, перенесших двустороннюю пневмонию с сопутствующими хроническими заболеваниями - 26,17%, что достоверно ниже (р<0,05).
В распределении генов и фенотипов системы Rh-Нг отмечено достоверное повышение частоты гена Е (и фенотипа, включающего его гомозиготный вариант - DccEE) у больных, перенёсших двухсторон-
нюю ковидную пневмонию 32,33% (4,51%], а также в группе доноров, имеющих антитела к SARS-Cov-2 31,5% (3,41%), в сравнении с донорами, не имеющими антител 23,95% (1,68%). Ген E системы Rh-Hr, таким образом, можно считать фактором, предрасполагающим к развитию инфекции.
Выводы. Таким образом, потенциальными факторами риска развития COVID-19 у русских Челябинской области могут быть гены HLA-C*03, антиген А системы ABO и E системы Rh-Hr. В качестве протективных факторов можно отметить ген HLA DRB1*14 и группу крови 0(1] системы ABO.
Ясинская А.П., Сокольникова П.С., Белянская Ю.В., Волкова О.Я.
ПРИМЕНЕНИЕ ЛИНЕЙНО-СПЕЦИФИЧЕСКОГО ГЕМОПОЭТИЧЕСКОГО ХИМЕРИЗМА В КАЧЕСТВЕ МАРКЕРА СОСТОЯНИЯ ТРАНСПЛАНТАТА ПОСЛЕ АЛЛОГЕННОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр имени В.А. Алмазова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Санкт-Петербург
Введение. Аллогенная трансплантация гемопо-этических стволовых клеток (алло-ТГСК] является одним из важнейших, а иногда и единственным эффективным стандартизированным методом лечения пациентов с гемобластозами. Ее выполнение сопряжено с высокими рисками осложнений для пациентов, что требует разработки чувствительных методов мониторинга состояния пациента после трансплантации. Исследование гемопоэтического химеризма (ГХ] в отдельных субпопуляциях лейкоцитов (линейно-спецический ГХ - ЛСГХ] является высокочувствительным тестом, который позволяет своевременно выявить изменения в трансплантате и адекватно оценить состояние пациента после алло-ТГСК.
Целью настоящего проспективного исследования было изучение диагностических возможностей мониторинга ЛСГХ для оценки состояния трансплантата после алло-ТГСК.
Материалы и методы. В исследование было включено 22 пациента с гемобластозами (12 мужчин и 10 женщин] в возрасте от 18 до 61 года (медиана возраста - 35 лет] перенесших алло-ТГСК от HLA-совместимого (4 человека], либо гаплоидентичного родственного донора (18 человек]. Исследование общего ГХ и ЛСГХ осуществлялось методом фрагмент-ного анализа коротких тандемных повторов (short tandem repeats = STR] с использованием коммерческих наборов реагентов COrDIS Plus (ООО «ГОРДИЗ», Россия]. Клеточные популяции (ГСК - CD34+ и субпопуляции Т-лимфоцитов - CD3+] были получены путем сортинга клеток из образцов костного мозга методом проточной цитометрии (BD FACSAria III (BD Biosciences, США]. Оценка и анализ результатов фрагментного анализа проводились на генетическом анализаторе «НАНОФОР-05» (ИАП РАН, Россия] с использованием программы «ДНК Фрагментный Анализ», версия 5.0.1.6 (ИАП РАН, Россия].
Результаты. В результате проведенного исследования общего ГХ на 30 день после алло-ТГСК у 12 (55%) пациентов выявлен полный донорский химеризм (ПДХ) и зафиксировано приживление трансплантата, у 10 человек (45%) определен смешанный ГХ (СГХ). При исследовании ЛСГХ в CD34+ и CD3+ клетках в эти же сроки у большинства пациентов наблюдалась сходная картина, однако у 4 человек было выявлено несоответствие показателей общего и линейно-специфического ГХ. Так у 2-х пациентов на фоне ПДХ в общем пуле лейкоцитов и в CD34+ клетках наблюдалось снижение ГХ в популяции Т-лимфоцитов, что может быть связано с отсрочкой восстановления Т-лимфоцитарного ростка кроветворения, либо с индивидуальными особенностями клинической картины, которые требуют дальнейшего изучения. Еще у одного человека СГХ был выявлен только в общем пуле лейкоцитов, тогда как в отдельных популяциях определялся ПДХ. Данное несоответствие может быть объяснено тем, что снижение общего ГХ произошло за счет других клеточных линий, не вошедших в настоящее исследование. У четвертого пациента на фоне СГХ в общей популяции лейкоцитов и ПДХ в Т-лимфоцитах в CD34+ клетках определялось отсутствие донорского химеризма (ОДХ), что было связано с развитием изолированного нейрорецидива с сохранением костно-мозговой ремиссии. Последующий мониторинг общего химеризма и ЛСГХ показал раннее снижение показателей ГХ в CD34+ клетках по сравнению с CD3+ и общим пулом лейкоцитов у пациентов с эпизодами отторжения трансплантата и/или рецидива основного заболевания.
На основании полученных результатов были сделаны следующие выводы:
1. показатель ЛСГХ в CD34+ клеточной популяции характеризует более раннее изменение состояния трансплантата, в сравнении с показателями ГХ
