РЕДКИЕ HLA-АЛЛЕЛИ СРЕДИ КОГОРТЫ НАЦИОНАЛЬНОГО РЕГИСТРА ДОНОРОВ КОСТНОГО МОЗГА ИМЕНИ ВАСИ ПЕРЕВОЩИКОВА Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ

Ананьева А.В. 1, Лексина Я.А. 1, Андрюшкина А.В.2, Шагимарданова Е. И.1

АНАЛИЗ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ЧАСТОТ HLA-АЛЛЕЛЕЙ И ГАПЛОТИПОВ У ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ДОНОРОВ НАЦИОНАЛЬНОГО РЕГИСТРА ДОНОРОВ КОСТНОГО

МОЗГА ИМЕНИ ВАСИ ПЕРЕВОЩИКОВА

1Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Казанский (Приволжский) федеральный университет», Казань, Россия

2Национальный регистр доноров костного мозга имени Васи Перевощикова, Москва, Россия

Введение. Несмотря на то, что гены HLA являются самыми полиморфными в геноме человека, HLA-аллели являются стабильными для популяций и сохраняются в ряду поколений. Оценка частот встречаемости HLA гаплотипов в популяции необходима для оценки вероятности обнаружения походящего донора, может использоваться для различных популяционных исследований.

Цель. Цель настоящего исследования - определение встречаемости аллелей генов гистосовмести-мости у жителей РФ.

Материалы и методы. ДНК выделяли из 200 мкл крови набором QIAamp 96 DNA QIAcube HT с помощью QIAcube HT System (Qiagen, Германия], автоматической станции выделения нуклеиновых кислот. Подготовка библиотеки осуществлялась с помощью набора Holotype kit (Omixon, Венгрия]. Секвенирова-ние проводили с использованием набора реагентов MiSeq v.2 и прибора MiSeq (Illumina, США]. Файлы FASTQ были собраны с использованием программного обеспечения HLA Twin (версия 4.1.0, Omixon, Inc., Будапешт, Венгрия] с базой данных IPD - IMGT / HLA версии 3.37.0.

Результаты. Объектом данного исследования явились образцы венозной крови потенциальных доноров гемопоэтических стволовых клеток (n=10747) Национального регистра доноров костного мозга имени Васи Перевощикова. Среди выявленной когорты были определены 86 HLA-A, 135 HLA-B, 64 HLA-C, 35 HLA-DQB1, 88 HLA-DRB1 аллелей. Наиболее частыми среди HLA-A аллели

являются НЬА-А*02:01:0^ (26,9%], А*03:01:0^ (13,8%), А*24:02:0^ (11,2)%, А*01:01:01(10,9)%. Для локуса ША-В с распространёнными вариантами были В*07:02:0^ (11,5%), В*18:01:0^ (7,7%), В*13:02:01(6,2%], В*08:01:0^ (5,8%). Наиболее частыми аллелями локуса ША-С являются С*07:02:0^ (13,3%), С*04:01:0^ (13,1%), С*06:02:0^ и С*07:01:0^ по 11,6%, кроме того часто встречался вариант С*12:03:0^ (10,1%). Наиболее частыми аллелями HLA-DQB1 были определены, как DQB1*03:01:01G (20%) и DQB1*02:02:01G (18,8%), другие варианты встречались чуть реже DQB1*05:01:01G (13,6%), DQB1*06:02:01G (11,1%). В локусе HLA-DRB1 наиболее часто встречался DRB1*07:01:01G (14,4%), и чуть реже DRB1*15:01:01G (12%) и DRB1*01:01:01G (11,5%). Выявлена тенденция более высокой частоты га-плотипа ША-А*01:01:01 ~ В*08:01:01 ~ С*07:01:01 ~ DQB1*02:01:01 ~ DRB1*03:01:01, он определен для 10,5% исследованных объектов, также у 4,7% распространенным гаплотипом являлся А*01:01:01 ~ В*08:01:01 ~ С*06:02:01 ~ DQB1*02:01:01 ~ DRB1*03:01:01.

Выводы. Анализ полученных данных выявил сходство иммуногенетического профиля ША-аллелей и пятилокусных гаплотипов у жителей РФ с некоторыми европейскими популяциями. Данные о частоте встречаемости могут быть использованы в качестве основы для дальнейших генетических исследований и изучения предрасположенности к заболеваниям среди населения РФ.

Ананьева А.В.1, Сергеева Ю.П.1, Осипова Н.Р.1, Гайфуллина Р.Ф.t2,

Шагимарданова Е. И.1

РЕДКИЕ HLA-АЛЛЕЛИ СРЕДИ КОГОРТЫ НАЦИОНАЛЬНОГО РЕГИСТРА ДОНОРОВ КОСТНОГО МОЗГА ИМЕНИ ВАСИ ПЕРЕВОЩИКОВА

1Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Казанский (Приволжский) федеральный университет», Казань, Россия 2 Приволжский регистр доноров костного мозга, Казань, Россия

Введение. Гены HLA являются наиболее полиморфными в геноме человека. Благодаря внедрению метода секвенирования нового поколения (Next Generation Sequencing — NGS] в типирование HLA генов появилась возможность разрешать ал-лельные неоднозначности и обеспечивать наивысшую степень разрешения. Высокая пропускная способность и относительно низкая стоимость способствуют росту количества выявленных редких и

новых аллелей ША.

Цель. Цель настоящего исследования - выявление редких аллелей потенциальных доноров гемопоэтических стволовых клеток Национального регистра доноров костного мозга имени Васи Перевощикова в Московском регионе.

Материалы и методы. В работе использовано 7230 образцов венозной крови потенциальных доноров гемопоэтических стволовых клеток Нацио-

ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 3, 2021

нального регистра доноров костного мозга имени Васи Перевощикова. Тотальная ДНК выделялась из 200 мкл крови с использованием автоматизированной станции QIAcube HT System (Qiagen, Германия]. Концентрация и качество выделенной ДНК оценивалась с помощью спектрофотометра Implen NanoPhotometer NP 80 (Implen). Для дальнейшей подготовки библиотек были использованы наборы двух производителей: NGSgo (GenDX, Нидерланды] и Holotype (Omixon, Венгрия]. Секвенирование проводили с использованием MiSeq reagent kit v.2 и сек-венатора MiSeq (Illumina, США]. Анализ результатов проводили с использованием программного обеспечения, предоставляемого производителями наборов для подготовки библиотек: NGSengine и HLA Twin.

Результаты. Среди 7230 потенциальных доноров гемопоэтических стволовых клеток всего было обнаружено 18 редких и 15 очень редких аллелей HLA. Редкие аллели: A*11:72, A*02:01:71,A*02:188,

В*44:27:01, В*15:01:10, В*07:252, С*03:54, С*14:25, С*03:02:02, С*02:16:02, DQB1*02:17, DRB1*14:12:01, DRB1*13:26:01, DRB1*13:15, DRB1*14:54:01, DRB1*08:03:03, DRB1*14:89, DRB1*13:26:01. Очень редкие аллели: А*11:83,А*30:01:04, B*13:45, B*35:15:01, B*27:133, B*27:148, С*07:308, С*07:303, С*03:143, С*06:143, С*07:02:32, С*04:105Ц DQB1*06:02:04, DRB1*09:20, DRB1*11:04:07. Кроме того были выявлены новые аллели НЬА, которые получили официальные названия А*11:362 и B*44:493, согласно классификации Комитета ВОЗ по номенклатуре факторов НЬА системы.

Выводы. Выполненная работа позволила определить редкие аллели, представленные в Национальном регистре доноров костного мозга имени Васи Перевощикова. Такие исследования актуальны для дальнейшего изучения разнообразия НЬА-аллелей у представителей различных российских популяций, что позволит увеличить эффективность подбора доноров ГСК.

БеркосА.С., Терентьева М.А., Табак М.В., Беляева Е.В.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПОДБОРА ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ДОНОРОВ РЕГИСТРА, ТИПИРОВАННЫХ ПО ТРЕМ ЛОКУСАМ HLA

ФГБУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург

Введение. Одним из важных факторов, влияющих на успех трансплантации ГСК, является скорость подбора донора, поскольку клиническое состояние реципиента может достаточно быстро измениться. Известно, что наиболее благоприятным моментом для выполнения трансплантации является первая ремиссия, достигнутая в ходе терапии. В последние годы типирование потенциальных доноров ГСК в РФ, в том числе и в нашем институте, в основном выполняется методом молекулярного типирова-ния по пяти локусам НЬА: А, B,C, DRB1, DQB1, однако часть доноров типирована по трем (А, B, DRB1), или четырем (А, B, С, DRB1]. Такие не полностью типиро-ванные доноры обычно имеются в базах регистров с длительной историей существования. Максимально полное типирование доноров, выполненное по пяти локусам, включая типирование на высоком уровне разрешения, обеспечивает наибольшую эффективность и скорость подбора, однако, поскольку лишь малая часть доноров, входящих в регистр, окажется совместимой с пациентом и будет востребована для заготовки ГСК, «дотипирование» доноров в отсутствие заявки представляется недостаточно обоснованным.

Цель исследования. Анализ вероятности и скорости нахождения HLA-A,B,C,DRB1,DQB1 идентичного донора, первоначально типированного по антигенам трёх локусов - А, B, DRB1, и совпадающего с пациентом по этим специфичностям.

Материалы и методы. 171 донор из регистра ФГБУ РосНИИГТ ФМБА России, типированный по трехлокусному фенотипу, совпадающий с реципиен-

том из центра трансплантации ГСК в соответствии с полученной заявкой. Молекулярное типирование локусов A, B, C, DRB, DQB1 выполняли методами PCR-SSP и SSO (базовый уровень разрешения]. Высокоразрешающее типирование было проведено 31 донору.

Результаты. При «дотипировании» локусов С и DQB^ 171 донора нашего регистра, совпавшего с реципиентом по A, B, DRB1 фенотипу, было установлено, что 74 (43,3%) донора полностью совпали с пациентом по 5 локусам HLA. Остальные 97 (56,7%) доноров в подавляющем большинстве случаев 71 (41,5%) не совпали с пациентом по локусу С: 63 (36,8%) имели расхождение по одному С антигену, 8 (4,7%) - по двум. Расхождения по антигенам локуса DQB1 обнаружены только в 7,6% случаев. Необходимо подчеркнуть, что время, в течение которого проводилось «дотипирование» доноров, как правило, не превышало 3 дней. Типирование проводилось из образцов донорской крови, хранящихся в банке лаборатории. Следует отметить, что в большинстве случаев перед проведением С и DQB1 типирования проводилась «активация» доноров: выясняли состояние здоровья донора для выявления возможных противопоказаний к донорству ГСК и получали подтверждение согласия на возможную донацию. Только при готовности донора проводилось С и DQB1 «дотипирование». Результаты направлялись в трансплантационную клинику и вносились в базу данных регистра, соответственно увеличивая долю доноров, типированных по пяти локусам. Высокоразрешающее типирование проводилось из вновь