CC BY
9
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 3, 2021
ние сроков мобилизации ГСК в периферическую кровь тимальным содержанием CD 34+ клеток, что может из-до 3 дней и проведения лейкоцитафереза на 4 день не менить взгляд на существующий режим мобилизации у влияет на возможность получения трансплантата с оп- аллогенных доноров ГСК.
Морозова Г.А., Лебедева Л.Л., Шубина Ю.Ф., Бронин Г.О.
ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ ТЕХНОЛОГИИ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В ИССЛЕДОВАНИИ ХИМЕРИЗМА ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ
ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы «Морозовская детская городская клиническая больница Департамента здравоохранения города Москвы»
Введение. Анализ химеризма - это рутинный тест, выполняемый для оценки результатов трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК). Результаты этого теста дают ценную информацию о приживлении донорских клеток и могут свидетельствовать о возможном рецидиве заболевания, поэтому представленные данные имеют большое значение при принятии решений о необходимых лечебных вмешательствах, таких как трансфузии донорских лимфоцитов и т.д. В настоящее время существуют разнообразные методы выявления химеризма гемопоэтических клеток, однако необходимость высокочувствительных технологий обнаружения небольших клеточных популяций является актуальной проблемой.
Целью данного исследования было изучение мониторинга гемопоэтического химеризма методом количественной полимеразной цепной реакции (кПЦР] с использованием реагентов GenDx (Нидерланды], ретроспективный анализ полученных результатов и сравнение их с клиническими данными пациентов.
Материалы и методы. Материалом для исследования служили образцы периферической крови и костного мозга пациентов до и после трансплантации и донорские образцы периферической крови. Геномную ДНК выделяли методом связывания и осаждения на мембране с силикагелем (QIAamp DNA MiniBlood Kits, Германия]. Клеточные линии CD3+, CD19+, CD34+ получали методом положительной магнитной сепарации с использованием парамагнитных сфер (Invitrogen, США]. Исследование химеризма проводилось с использованием 29 основных информативных маркеров и 10 дополнительных (в случае необходимости], стратегически размещенных на 16 хромосомах. Перед аллоТГСК ДНК реципиента и донора типировали с помощью набора маркеров KMRtype, мультиплексированных по три в каждой смеси. Поскольку как реципиент так и донор могли быть гомо- и гетерозиготными по маркерам, информативными они являлись, если были отрицательными у реципиента или донора в гомозиготном состоянии. Обнаруженные информативные маркеры служили для наблюдения за реципиентом после трансплантации, при этом уровень химеризма в исследуемых образцах реципиента сравнивался с уровнем химеризма перед трансплантацией (обра-
зец перед трансплантацией служил в качестве эталона]. Этот процесс выполнялся с использованием реагентов KMRtrack, где на реакцию наносился 1 маркер (одиночный комплекс]. Процентное соотношение химеризма рассчитывалось с помощью программного обеспечения производителя KMRengine.
Результаты. Исследовано 57 пациентов (2 получили вторую алло ТГСК] в возрасте от 0,17 до 18 (медиана 10] лет и 57 доноров костного мозга. Среди пациентов 36 страдали различными вариантами острых лейкозов, 9 - апластической анемией, 5 пациентов - талассемией, 5 пациентов с диагнозами: нейробластома, тяжелый комбинированный иммунодефицит, ювенильный миеломоноцитарный лейкоз, гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз, му-кополисахаридоз. Частота исследований проводилась в фиксированные временные точки (+30, +60, +100, +180, +3б5-й дни], при необходимости анализ выполнялся так часто, как того требовала клиническая ситуация. Всего за исследуемый период (20202021гг) было выполнено 450 тестов. У 40 пациентов была проведена родственная ТГСК, при этом для 33 пациентов - от гаплоидентичных родителей и для 7 от ^А идентичных сиблингов. 15 реципиентам была осуществлена неродственная ТГСК от доноров с совместимостью 10/10 (8 пациентов] и 9/10 (7 пациентов]. Для всех пар донор/реципиент были обнаружены не менее двух информативных маркеров, по которым в дальнейшем велся мониторинг химериз-ма гемопоэтических клеток. По уровню химеризма пациенты были разделены на четыре группы: с полным донорским химеризмом, у которых обнаружена 100% донорская ДНК - 44 случая (9,8%]; группа со смешанным химеризмом, у которых присутствует более 1% ДНК реципиента - 220 случаев (48,88%]; третья группа, пациенты с обнаруженной ДНК только реципиента - 6 случаев (1,32%]. Кроме того, нами была выявлена четвертая группа, с так называемым микрохимеризмом, когда в исследуемом образце была обнаружена ДНК реципиента в количестве 0,11% (всего 180 случаев, что составляет 40%].
Выводы. Таким образом, высокая чувствительность представленного метода позволяет выявить гемопоэтический микрохимеризм, что является значимым диагностическим признаком развития посттрансплантационных осложнений, и способствует своевременному проведению корректирующих мер.
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
На основании полученных данных количественного определения химеризма была выявлена корреляция с клиническим статусом пациентов. Количественная ПЦР является надежным, информативным и высоко
чувствительным методом для мониторирования химеризма у пациентов с уровнем реципиентских клеток менее 1% (чувствительность до 0,05%] и рекомендуется для внедрения в лабораторную практику.
Назаретян М., Джордан Ф., Авакян С., Усян А., Сирунян А., Азарян А., Оганесян З.
ВНЕШНЯЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА - ПРОВЕРКА КОМПЕТЕНТНОСТИ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ
^А-ЛАБОРАТОРИИ АРДКМ
Армянский Регистр Доноров Костного Мозга, Ереван, Армения
Проверка компетентности (ПК] - это стандартная процедура, предполагающая периодическую рассылку исследуемых проб лабораториям для анализа и/ или идентификации, а также сравнения полученных данных исследуемой лаборатории с результатами других лабораторий с заданными величинами и последующим информированием результатов лабораториям-участникам и другим соответствующим организациям.
Лаборатории, стремящиеся получить аккредитацию European Federation for Immunogenetics (EFI), должны принимать участие в стандартизованном типировании HLA-антигенов и проверке компетентности (ПК] в отношении всех используемых лабораторией исследований, представленных на получение аккредитации.
Целью процедуры ПК АРДКМ являлась оценка качества исследований (точность, специфичность и воспроизводимость] в полученных от референс-лабо-раторий образцах крови методом ПЦР-SSP.
Требования для проведения ПК предполагают проведение тестирования в повседневных (обычных] для лаборатории условиях, при участии всех ее работников, использование для контрольного тестирования рутинных образцов крови, представление результатов в установленные заданием сроки и сохранение конфиденциальности информации результатов тестирования.
С 2004 г. начато участие АРДКМ в программе ASHI Proficiency Testing (PT). Для этого исследовалось по 10 образцов ДНК в год (низкое и высокое разрешение] и
тестирование (только высокое разрешение) в формате ASHI Disease Association Proficiency Testing (PT).
С 2007 по 2010 г.г. оценка ПК проводилась в рамках участия лаборатории в программе EFI Регион 8 EPT, а начиная с 2018 г. по настоящее время, в связи с изменением приписанного Регистру региона, уже в рамках программы EFI Регион 5 EPT.
Результаты проведения ПК АРДКМ: В рамках программы ASHI Proficiency Testing (PT) было проведено тестирование 10 образцов в год (низкое и высокое разрешение) антигенов HLA класса I (DNA) и класса II (DNA). В формате ASHI Disease Association PT было проведено 10 исследований (B27 detection только низкое разрешение). В формате программы EFI Регион 8 EPT проведено 10 исследований (все - низкое разрешение), а после смены региона, в формате EFI Регион 5 EPT - еще 10 исследований (низкое и высокое разрешение).
Заключение. Начиная с 2004 г., по настоящее время, достигнута и сохраняется 100% показатель соответствия (конкордантности) результатов с тестовыми образцами референс- лабораторий. Деятельность HLA-лаборатории АРДКМ полностью отвечает требованиям тестирования ПК, обеспечивающим качество HLA-типирования в соответствии с стандартами EFI и ASHI. Это основной компонент качества деятельности Банга доноров АРДКМ, являющегося составной частью и активным резервом Всемирной Сети Доноров Костного Мозга (BMDW) в международном поиске и предоставлении стволовых клеток костного мозга от родственных и неродственных доноров.
Павлова И.Е., Глазанова Т.В., Шилова Е.Р., Чубукина Ж.В., Розанова О.Е., Бубнова Л.Н.
АССОЦИАЦИЯ ГЕНОВ HLA-DRB1 С РАЗВИТИЕМ ПАРОКСИЗМАЛЬНОЙ НОЧНОЙ
ГЕМОГЛОБИНУРИИ
ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА России», г. Санкт-Петербург
Введение. Роль иммунной системы в развитии пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ] подтверждается обнаружением ассоциации между ПНГ и определенными аллельными вариантами генов Главного комплекса гистосовместимости (HLA-генов). При этом механизмы таких ассоциаций остаются неясными. Возможно, это зависит от функциональных свойств определенных молекул HLA-генов.
Цель. Изучение особенностей распределения HLA-DRB1 аллелей у больных ПНГ, проживающих в европейской части России.
Материалы и методы. В исследование были включены 77 пациентов, образцы периферической крови которых направлялись в лабораторию им-муногематологии ФГБУ РосНИИГТ ФМБА России из различных регионов европейской части России для
