CC BY
22
«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ИММУНОГЕНЕТИКИ И ТКАНЕВОГО ТИПИРОВАНИЯ»
Санкт-Петербург 24-25 июня 2015 г.
оценивалась у детей (с cPRA = 0 %; с cPRA<50 %; с cPRA > 50 %) в 1, 2, 6, 12, 18, 24 месяцы после трансплантации почки. Определяли анти-HLA антитела I и II класса мультиплексным анализом (Luminex 200-технология, MFI) с рассчитанным процентом панель-реактивных антител ^PRA). 22 пациента с предсуществующими анти-HLA антителами ^PRA > 0 %) были включены в исследование. Все пациенты имели стандартный протокол иммуносупрессии. Индукционная фаза: поликлональные антитела + метилпреднизолон. Основная: ингибиторы кальциневрина (такроли-мус или циклоспорин А) + микофенолат мофетил (MMF) + преднизолон. Протокол отмены антитело- опосредованного отторжения (ABMR): ме-тилпреднизолон + внутривенный иммуноглобулин (ВВИГ) + ритуксимаб ± плазмаферез.
Результаты. СКФ у детей с предсуществующими анти-HLA антителами (cPRA<50 %) не отличалась от СКФ пациентов, без предсуще-ствующих анти-HLA антител в течение 2 лет после трансплантации аллогенной почки (p>0,05; Kruskal-Wallis ANOVA). СКФ детей с предсуществующими анти-HLA антителами ^PRA > 50 %) была хуже, чем у пациентов без предсу-ществовующих анти-HLA антител, начиная с 1 месяца после трансплантации аллогенной почки (р< 0,05; Kruskal-Wallis ANOVA).
Скорость клубочковой фильтрации у детей, которых лечили для отмены антитело-опосредованного отторжения: метилпреднизолон пульс-терапия, ритуксимаб и внутривенный иммуноглобулин (ВВИГ) была стабильной до 6 месяцев после лечения (73,45 мл/мин), но затем начи-
1 Anthony
2 WMDA
Всемирная Ассоциация Доноров Костного Мозга (WMDA) — это добровольная организация, представляющая регистры доноров стволовых клеток, банки пуповинной крови и другие организации, занимающиеся вопросами трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. Она обеспечивает возможность обсуждения проблем, касающихся клинического применения стволовых клеток, на международном уровне и вырабатывания единых рекомендаций по транспортировке, контролю качества, решению этических проблем,
нала снижаться (55,4 мл/мин, 45,1 мл/мин, 43,9 мл/мин, 41, 9 мл/мин в 6, 12, 18 и 24 мес., соответственно). У 4-х детей развилось острое антитело-опосредованное отторжение (ABMR), СКФ у них уменьшалась в течение 6 месяцев после трансплантации. Терапия ритуксимабом, добавленным в качестве дополнительного компонента в фазу индукции иммуносупрессии у детей с предсуществующими анти-HLA антителами ^PRA > 50 %), не улучшала функцию аллогенно-го трансплантата почек (р > 0,05; Kruskal-Wallis, ANOVA), но уменьшала частоту Т-клеточно-опосредованного отторжения (TCMR) почек и отменяла острое антитело-опосредованное отторжение (ABMR) почек.
Выводы. Предсуществующие анти-HLA антитела (сРКЛ<50 %) не уменьшают функцию аллогенного почечного трансплантата в течение 2 лет после трансплантации (р > 0,05; Kruskal-Wallis, ANOVA). Предсуществующие анти-HLA антитела ^PRA > 50 %) снижают функцию ал-логенного почечного трансплантата, начиная с 1-го месяца после трансплантации (р < 0,05; Kruskal-Wallis, ANOVA). Ритуксимаб, добавленный в качестве дополнительного компонента в фазу индукции иммуносупрессии в группе детей с предсуществующими анти-HLA антителами ^PRA > 50 %), не улучшал функцию алло-генного почечного трансплантата (Р > 0,05; Krus-kal-Wallis, ANOVA), но снижал частоту TCMR и отменял ABMR. Это одноцентровое исследование, для более подробной информации необходимо рандомизированное многоцентровое исследование.
взаимных расчетов, информационного обеспечения и аккредитации регистров.
Более 25 миллионов неродственных доноров и более полмиллиона единиц пуповинной крови в настоящее время зарегистрировано в мире. Благодаря международному сотрудничеству, трансплантация неродственных гемопоэтиче-ских стволовых клеток проведена более чем миллиону пациентов. Число и эффективность проведенных трансплантаций увеличивается с каждым годом.
Евсеева И.
Nolan (Великобритания),
МЕЖДУНАРОДНОЕ СОТРУДНИЧЕСТВО РЕГИСТРОВ ДОНОРОВ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК И БАНКОВ ПУПОВИННОЙ КРОВИ
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XI, № 2, 2015
В докладе будут освещены вопросы истории и структурной организации WMDA, проекты и инициативы, осуществляемые для гармонизации и развития международного сотрудниче-
ства, а также роль мирового регистра (BMDW) и международной коммуникационной системы EMDIS.
Ершов Д. Е., Полякова А. П.' Силютина А. А., Бутылин П. А.
ФГБУ «Северо-Западный Федеральный медицинский исследовательский центр» Минздрава России, Санкт-Петербург.
РАЗРАБОТКА И ОПТИМИЗАЦИЯ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКОГО ХИМЕРИЗМА МЕТОДОМ ФРАГМЕНТНОГО АНАЛИЗА
Введение. Расширение применения неми-елоаблативных режимов кондиционирования обуславливает растущую потребность в трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК). В связи с этим острую актуальность приобретает проблема разработки высокочувствительного и специфичного теста для оценки гемопоэтического химеризма.
Цель: разработка, оптимизация и внедрение в лабораторную практику Cеверо-Западного Федерального медицинского исследовательского центра методики количественной оценки гемо-поэтического химеризма путем фрагментного анализа у больных, перенесших ТГСК; сравнительная оценка чувствительности и точности разработанной диагностической панели для капиллярного электрофореза и методики количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Результаты. На основании литературных данных разработана диагностическая панель, включающая 12 локусов коротких тандемных повторов (STR): D2S1360, D7S1517, D8S1132, D9S1118, D10S2325, D11S554, D12S1064, D12S391, MYCL1, P450cyp19, Se-33, Amelo-genin. Подобраны праймеры для STR и их рабочие концентрации. Установлены оптимальные условия амплификации, а также условия разделения продуктов в агарозном геле. В рамках предварительного экспериментального исследования произведена полуколичественная оценка химеризма у пациента на 30-й, 71-й, 85-й день после ТГСК. Локус считается информативным
при наличии хотя бы одного отличающегося аллеля в образцах ДНК донора и реципиента. В данном случае при определении STR-профиля образцов такими маркерами стали D11S554, SE-33. Оценку результатов производили при помощи программного обеспечения Quantity One (Bio-Rad Laboratories). Для локуса D11S554 интенсивность сигнала информативного донорского аллеля составила: на 30-й день — 34,7 %; на 71-й день — 9,7 %, а на 85-й день — 11,4 % по отношению к суммарной интенсивности сигнала донорских аллелей. Для локуса SE-33 эти значения составили на 30-й день — 64,2 %, на 71-й день — 9,5 % и на 85-й день — 28,9 %. Состоятельность полученных результатов подтверждена тестом на основе панели Allele SEQR Chime-rism для qPCR (Abbot, США), по итогам которого донорский химеризм пациента на 71-й и 85-й день после ТГСК составлял 10,0 % и 30,5 % соответственно; на 30-й день тест проведен не был.
Выводы. Проведены предварительные экспериментальные испытания диагностической панели для полуколичественной оценки гемопо-этического химеризма. Результаты тестов проанализированы и подтверждаются верифицированным методом. В дальнейшем планируется оптимизировать условия для амплификации нескольких продуктов в одной пробирке (multiplex ПЦР) с последующей количественной оценкой химеризма посредством капиллярного электрофореза.
