CC BY
32
в питательном субстрате. В связи с применением препаратов в сельском хозяйстве, в быту, в учреждениях возможны случаи отравления.
Кровь является наилучшим объектом для обнаружения антикоагулянтов в связи с длительным периодом полувыведения и из-за интенсивной биотрансформации этой группы веществ в организме. Для проведения исследования крови методом жидкостной хроматографии с диодно-матричным детектором (ДМД) использовали стандартный, систематический ход исследования для веществ кислого и нейтрального характера: кровь (0,5 мл) экстрагировали этилацетатом с добавлением 250 мкл насыщенного раствора хлористого аммония (рН 4,6-4,8).
Экстракты после испарения растворяли в подвижной фазе (100 мкл) и анализировали на высокоэффективном жидкостном хроматографе Agilent Technologies 1200 с ДМД. Колонка ZORBAX Edipse XDB -C18 4,6x250 мм, 5 мкм. Предколонка Zorbax Edipse XDB - C18, 4,6x12,5 мм, 5 мкм. Температура термостата колонки 400С. Элюент «А»: кислота серная 2,5 моль/л в воде; элюент «В»: кислота серная 2,5 моль/л в ацетони-триле. Градиентный режим: до 3 минуты (98:2), с 3 минуты до 23 минуты (2:98), кондиционирование колонки после анализа пробы 8 мин (98 % элюента «А» - 2 % элю-ента «В»). Скорость потока: 1,0 мл/мин; Длина волны: 220 нм. Объем вводимой пробы 40 мкл.
Предел обнаружения варфарина в крови - 0,2 мг/л. Предел определения - 0,5 мг/л. Линейность - в диапазоне концентраций 0,5-2,0 мг/л крови.
При целенаправленном исследовании на антикоагулянты - производные 4-гидроксикумаринового ряда для получения более чистых экстрактов использовали также пробоподготовку с предварительным осаждением белков ацетонитрилом, перед экстракцией этилацетатом.
ВЫВОДЫ
В связи с широким применением антикоагулянтов в медицинской практике, в быту, в сельском хозяйстве (находятся в открытой доступности) и наличием случаев непреднамеренного отравления людей, чаще детей, а также животных (кошек и собак), возникла необходимость изучения возможностей метода жидкостной хроматографии с диодно-матричным детектированием не только для обнаружения варфарина и его аналогов, но и для их количественного определения в крови. Метод селективен для изученных веществ.
Для качественного и количественного определения варфарина и его аналогов в крови использовали стандартный систематический метод для скрининга веществ кислого и нейтрального характера методом жидкостной хроматографии, включающий при пробоподготовке прямую экстракцию этилацетатом с добавлением насыщенного раствора хлорида аммония (рН 4,6-4,8).
Для того, чтобы снизить влияние соэкстрактивных веществ крови при целенаправленном исследовании, мы применили модификацию - осаждение белков ацетони-трилом перед экстракцией.
Представленный метод позволяет в пробе малой размерности (0,5 мл крови) одновременно идентифицировать и количественно определять варфарин и его аналоги. Количественное определение дает возможность дифференцировать терапевтические, токсические и летальные концентрации, что имеет большое значение как для своевременной детоксикационной терапии, введение антидота - витамина К, так и для установления причины смерти, обусловленной кровотечением.
Особый интерес представляет методика для исследования крови и тканей животных на антикоагулянты -
действующие вещества средств от грызунов в ветеринарной практике при подозрении на отравление домашних животных.
Анализ результатов судебно-химических и химико-токсикологических исследований за последние 2 года (2017-2018 гг.) показал, что варфарин в терапевтической концентрации был обнаружен у живых лиц в 7 случаях, а в аутопсийном материале - в 15 случаях. Варфарин был обнаружен как отдельно, так и в комбинации с лекарственными веществами и наркотическими средствами.
МЕТОД ПОДГОТОВКИ ТРУПНЫХ ТКАНЕЙ ДЛЯ ГХ-МС И ВЭЖХ-МС/МС АНАЛИЗА. ПРИМЕР ИЗ ПРАКТИКИ: ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАРФЕНТАНИЛА В ТРУПНЫХ ТКАНЯХ, ИЗМЕНЕННЫХ ГНИЕНИЕМ В БИОЛОГИЧЕСКИХ
ЖИДКОСТЯХ - ПРОДУКТАХ ЛИЗИСА_
А. Л. Печников1, С. А. Савчук2,3 1Интернет-портал Sudmed_MS https://sudmed-ms.my1.ru 2ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), Москва 3ФГБУ «РЦСМЭ» Минздрава России, Москва В докладе представлен случай определения карфен-танила в трупных тканях, измененных гниением в биологических жидкостях. Ключевые слова: карфентанил, трупные ткани, лизис
Трупы троих мужчин (Ф., 26 лет, О., 28 лет, и П., 31 год) без видимых повреждений были найдены в квартире (Москва). Состояние трупов - выраженные гнилостные изменения. Рядом с трупами был найден пакет с белым порошком. По результатам экспертизы порошок содержал 0,04 г карфентанила.
От трупов были отобраны ткани печени (25 г) и почки (18 г) кровь (6 мл). Первое исследование показало отсутствие карфентанила во всех биологических объектах. Образцы были направлены на повторное исследование.
Методы: извлечение биологических жидкостей (продуктов лизиса) из образцов тканей. Образцы замораживали при -20°С в стеклянных чашках, закрытых крышками, выдерживали в течение ночи, после чего размораживали. Образующуюся в результате лизиса межклеточную и внутриклеточную жидкость со следами капиллярной крови (8-15 мл) собирали и анализировали.
Жидкость /жидкостная экстракция. К 5 мл биологических жидкостей (кровь, моча, продукты лизиса тканей) добавляли 10 мл дистиллированной воды, 0,5 мл насыщенного раствора NaOH, перемешивали, выдерживали 15 мин при комнатной температуре и экстрагировали 10 мл гексана. Полученный экстракт упаривали, добавляли 150 мкл ацетонитрила и анализировали методами ГХ-МС и ВЭЖХ-МС/МС. Карфенанил был обнаружен во всех исследуемых образцах.
SPE экстракция. Для сравнения биологические жидкости (кровь, моча, продукты лизиса тканей) готовили для анализа методом SPE на патронах Bond Elute Certify. Карфентанил был обнаружен во всех исследуемых образцах всеми методами диапазон содержаний 50-70 нг/мл. Для сравнения исследовали гомогенаты тканей. Навеску 5 г разбавляли водой, добавляли NaOH и экстрагировали гексаном, как описано для биологических жидкостей. При упаривании получали 300-400 мкл жира, который экстрагировали 3 мл 0.1Н HCL. В кислом извлечении устанавливали рН 8-9 и экстрагировали гексаном. Для сравнения гомогенаты готовили для анализа методом SPE
на патронах Bond Elute Certify. Предварительно белковые фрагменты гомогенатов осаждали ТХУ при ультразвуковой обработке. Карфентанил был найден во всех пробах всеми методами, диапазон содержаний 50-70 нг/мл.
ВЫВОДЫ
Наиболее высокие интенсивности пиков карфента-нила наблюдали в биологических жидкостях и в гомоге-натах тканей при использовании экстракции гексаном из щелочной среды. Использование SPE экстракции было эффективным при подготовке биологических жидкостей, были получены сравнимые интенсивности пиков карфен-танила. При анализе гомогенатов тканей эффективность SPE была хуже.
■ МОНИТОРИНГ СЛУЧАЕВ ОБНАРУЖЕНИЯ ТРИМЕПРАЗИНА ПРИ ПРОВЕДЕНИИ СУДЕБНО-ХИМИЧЕСКИХ И ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ В 2017-2018 ГОДАХ_
Т. Н. Орлова1, Ю. А. Шин3, Н. А. Крупина1 2 ТБУЗ МО «Бюро СМЭ», Москва 2Кафедра судебной медицины ФУВ ГБУЗ МО МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского, Москва 3Кафедра фармацевтической и токсикологической химии им. А. П. Арзамасцева ФГАОУ ВО Первый МГМУ им И. М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) Представлен обзор случаев, в которых при проведении судебно-химических (СХИ) и химико-токсикологических (ХТИ) исследований был определен тримепразин.
Ключевые слова: тримепразин, алимемазин, нейролептик, токсическая концентрация, газовая хроматография, азотно-фосфорный детектор Тримепразин (М М бета-Триметил-10Н-феноти-азин-10-пропанамин (и в виде тартрата)) является производным фенотиазина и обладает антипсихотическим (нейролептическим), седативным и антигистаминным действием. Блокирует дофаминовые 02-рецепторы мезо-лимбической и мезокортикальной системы.
Начало эффекта происходит через 15-20 мин, длительность действия около 6-8 ч. Связь с белками плазмы составляет 20-30 %. Тримепразин интенсивно проникает в ткани, так как легко проходит через гистогематиче-ские барьеры, в том числе, и через гематоэнцефалический барьер. Период полувыведения составляет 3,5-4 ч.
Выводится преимущественно почками (70-80 %) в виде метаболита (сульфоксида) в течение 48 ч, а остальная часть препарата и его метаболитов - с желчью и каловыми массами.
По результатам проведенных СХИ и ХТИ в ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» участились случаи обнаружения тримепра-зина, как отдельно, так и в комбинациях с другими лекарственными и наркотическими веществами.
Для обнаружения тримепразина были использованы методы жидкостной хроматографии ультравысокого давления с масс-спектрометрическим детектированием и газовой хроматографии с масс-селективным детектированием.
Для количественного определения в крови использовали метод газожидкостной хроматографии с азотно-фосфорным детектором. Ранее, в статье «Обнаружение и определение лекарственных веществ нейтрального и основного характера в крови (сыворотке) газохроматогра-фическим методом с использованием азотно-фосфорного
детектора» (М.: Издательский центр «Академия», 2005) была изложена методика подготовки биологических жидкостей.
Для обнаружения тримепразина анализировали биожидкости (сыворотка крови, моча) и промывные воды желудка от живых лиц и аутопсийный материал (кровь, моча, желчь, ткани внутренних органов).
В судебно-химическом отделе ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» в 2017-2018 годах в 9 случаях тримепразин идентифицирован в аутопсийном материале. Из них: 1 случай отдельного приема препарата, 8 - в сочетании с другими лекарственными веществами, 1 - в сочетании с наркотическими средствами, 2 - комбинированного приема с этиловым спиртом (диапазон концентраций этанола в крови от 1,0 мг/л до 1,7 мг/л, в среднем 1,3 мг/л, в моче -от 1,4 мг/л до 1,9 мг/л, в среднем 1,7 мг/л).
В 3 аутопсийных случаях: концентрация тримепразина была в диапазоне от следовых количеств (менее 0,05 мг/л) до 0,07 мг/л. Из 9 случаев 4 приходится на мужской пол в возрасте от 31 до 43 лет и 5 - на женский пол, из которых 1 случай - в возрасте 16 лет, 3 - от 27 до 59 лет, 1 - 85 лет. Средний возраст умерших составляет 42 года.
По данным статистических карт судебно-медицинского исследования трупа указаны следующие причины смерти: комбинированное отравление наркотическими средствами - 1, тупая сочетанная травма туловища - 4, отравление этиловым спиртом - 2, утопление - 1.
В 14 случаях исследования сыворотки крови живых лиц был обнаружен тримепразин, из них - 2 случая отдельного приема, 12 - в сочетании с другими лекарственными веществами, такими как амитриптилин, феназепам и др.
В 8 случаях концентрация тримепразина составила от следовых количеств до 0,06 мг/л (терапевтическая концентрация). Из 14 случаев 3 приходится на мужской пол в возрасте от 15 до 33 лет, из которых 2 случая в возрасте 15 и 17 лет, и 11 - на женский пол, из которых 6 случаев -в возрасте 15-19 лет, 1 - 28 лет. Средний возраст умерших составляет 24 года.
По данным Международной ассоциации судебных токсикологов (Том 26, № 1, Дополнение, 1996 год, под редакцией Donald R. A. Uges, University Hospital, Groningen, Нидерланды), терапевтическая концентрация тримепразина в сыворотке крови составляет 0,05-0,4 мг/л, токсическая концентрация - 0,5 мг/л.
В большинстве рассмотренных случаев употребление тримепразина обусловлено назначениями врачей для лечения хронических психотических расстройств, а также при нарушениях поведения (особенно у подростков).
ВЫВОДЫ
1. Проведен анализ результатов исследования биообъектов от живых лиц и аутопсийных случаев, связанных с приемом тримепразина, как отдельно, так и в комбинациях с этиловым спиртом, лекарственными и наркотическими веществами.
2. Анализ результатов исследования биообъектов от живых лиц показал, что участились случаи отравления тримепразином в комбинации с другими лекарственными препаратами (амитриптилин, феназепам) подростками и молодыми людьми в возрасте от 15 до 33 лет. Анализ аутопсийных случаев показал, что прием тримепразина в совокупности с этиловым спиртом, лекарственными веществами и наркотическими средствами может привести к потенцированию действия этих веществ, и, следовательно, к смерти.
3. Определение тримепразина методом газовой хроматографии с азотно-фосфорным детектором при прове-
