CC BY
197
го. Препарат усиливает эффект спазмолитиков (в том числе м-холиноблокаторов); усиливает гипотензию, вызванную трициклическими антидепрессантами, хинидином, новокаинамидом. Одновременный прием с фенобарбиталом усиливает спазмолитическое действие дротаверина.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Основным объектом исследования является цельная кровь. В постмортальных случаях, периферическая кровь, по сравнению с мочой и другими биологическими жидкостями, является предпочтительным объектом для скрининга на неизвестное вещество, т.к. обеспечивает непосредственное доказательство вещества, оказавшего фармакологическое действие на момент смерти.
При идентификации хроматографических пиков, полученных при анализе проб, параллельно с исследуемым образцом анализировали контроли: положительный (извлечение из плазмы, содержащей исследуемое вещество -дротаверин) и отрицательный (извлечение из бланковой плазмы). Количественный анализ проводили методом внутреннего стандарта. В качестве внутреннего стандарта использовали дифениламин. Для построения калибровочного графика использовали бланковую плазму. Калибровочные растворы готовили из стандартного вещества дротаверина гидрохлорида в концентрации 1 мг/мл в метаноле. Предел обнаружения дротаверина 0,15 мг/л, предел определения - 0,5 мг/л. Линейность: 0,5-20 мг/л.
Случаи из практики:
Анализ работы за 2006-2009 годы с указанием в направлениях обстоятельств дела: «смерть дома - 20 случаев, смерть на работе - один случай, смерть в больнице - 3 случая, отравление Но-Шпой - 2 случая):
• 20 случаях: концентрация дротаверина в крови была в диапазоне 2,4 мг/л - 28,6 мг/л (в среднем - 10,5 мг/л) и концентрация этилового спирта - 0,3%о - 4,5%о (в среднем - 2,1%);
• 4 случаях при отсутствии этилового спирта в крови: концентрация дротаверина была в диапазоне 3,7 мг/л -22,0 мг/л (в среднем - 12.3 мг/л).
В случаях исследования крови, поступившей из больниц, (подозрение на медикаментозное отравление): в семи случаях концентрация дротаверина в крови была в диапазоне 1,0 мг/л - 10,0 мг/л (в среднем - 4.4 мг/л), этиловый спирт в крови отсутствовал. В двух случаях при концентрации этилового спирта в крови 1,9% и 2,5%, концентрация дротаверина составляла 1,6 мг/л и 2,3 мг/л соответственно.
По данным судебно-химического отдела ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» за 2011-2014 г.г.: проведено более 180 исследований, где был идентифицирован и количественно определен дротаверин в крови в постмортальных случаях. Обстоятельства, указанные в направлениях на судеб-но-химическое исследование: умер дома - 95 случаев, падение с высоты - 3 случая, умер в больнице - 35 случаев, обнаружен в автомашине - 5 случаев, обнаружен в подъезде - 45 случаев, обнаружен на даче - 5 случаев, отравление Но-Шпой - 1 случай.
Подробно были изучены и проанализированы случаи за 2013-2014 годы из практики судебно-химического отдела по исследованию постмортального биоматериала: дротаверин, как правило, присутствовал в крови в комбинации с этанолом или другими лекарственными либо наркотическими средствами.
В 2013-2014 годах:
• 17 случаях с летальным исходом, при отсутствии этилового спирта, наркотических средств и лекарственных веществ, концентрация дротаверина в крови была определена в диапазоне от следовых количеств до 3,4 мг/л;
• 10 случаях с летальным исходом, при комбинированном приеме дротаверина и этилового алкоголя, концентрация дротаверина в крови была определена в диапазоне от следовых количеств до 133,7 мг/л, концентрация этилового спирта - 0,52-3,0%;
• 23 случаях с летальным исходом, при комбинированном приеме дротаверина, этилового спирта и других лекарственных веществ (клозапин, анаприлин, хлорпротик-сен, карбамазепин, диазепам, доксиламин), концентрация дротаверина в крови была определена в диапазоне от следовых количеств до 108,5 мг/л, концентрация этилового спирта -1,6-4,8%;
• 19 случаях с летальным исходом, при комбинированном приеме дротаверина, этилового спирта и ненаркотических анальгетиков, и нестероидных противовоспалительных препаратов (ННА и НПВС), такими как анальгин, парацетамол, ибупрофен, диклофенак, напро-ксен, концентрация дротаверина в крови была определена в диапазоне от следовых количеств до 15,0 мг/л, концентрация этилового спирта - 0,3-3,9%;
• 20 постмортальных случаях, при комбинированном приеме дротаверина с наркотическими веществами группы опия, этилового спирта и ННА и НПВС, концентрация дротаверина в крови была определена в диапазоне от следовых количеств до 1,8 мг/л, концентрация этилового спирта - 0,32-2,8%.
ВЫВОДЫ
1. Для обнаружения и определения дротаверина в биожидкостях использовали инструментальные методы анализа: газовую хроматографию с азотно-фосфорным и масс-селективным детекторами.
2. Проведен анализ постмортальных случаев, связанных с приемом дротаверина, как отдельно, так и в комбинациях с этиловым спиртом, лекарственными веществами, наркотическими средствами. При интерпретации результатов судебно-химического исследования необходимо учитывать взаимное влияние идентифицированных в крови веществ. Большое значение имеет проведение количественных определений в крови, результаты которых позволяют установить причину смерти.
Случай из практики: комбинированное отравление кветиапином и этиловым алкоголем
• Н. Е. Павлова, Р. Н. Пашовкина,
3. Г. Николаева, О. Г. Заторкина, Р. Р. Краснова, Н. А. Крупина
ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» МЗ МО (нач.— д.м.н., проф. В. А. Клевно) Аннотация: В постерном докладе представлен случай из практики судебно-химического отдела (СХО) ГБУЗ МО «Бюро СМЭ». В ходе проведения судебно-химического исследования (СХИ) применены внедрённые в практику отдела методы жидкость-жидкостной экстракции лекарственных веществ из биологических объектов; методы их обнаружения - тонкослойная хроматография (ТСХ), газовая хроматография с масс-селективным детектором (ГХ/МС); метод высоко-эффективной жидкостной хроматографии с диодно-матричным детектором для определения кветиапина в крови и метод газовой хроматографии (ГХ) с детектором по теплопроводности с целью определения этилового спирта в крови и моче.
Ключевые слова: кветиапин, жидкость-жидкостная экстракция, ГХ/МС, ТСХ, ВЭЖХ
A case from practice: combined quetiapine and ethanol poisoning
• N. E. Pavlova; R. N. Pashovkina; E. G. Nikolaeva, O. G. Zatorkina, R. R. Krasnova, N. A. Krupina Abstract: The report is focused on a case from practice in forensic chemistry department of Bureau of Forensic Medicine of Moscow region. Methods of liquid-liquid extraction of drugs from biological tissues and fluids; methods of detection -TLC, GC / MS; HPLC for quantifying the quetiapine in the blood and GC to determine the ethyl alcohol in the blood and urine were applied.
Keywords: quetiapine, liquid-liquid extraction, GC/MS, TLC, HPLC
ВВЕДЕНИЕ
Кветиапин (сероквель) - антипсихотическое средство (нейролептик) применяется при лечении острых и хронических психозов, в т.ч. при шизофрении. При пер-оральном применении кветиапин хорошо всасывается из ЖКТ. Активно метаболизируется в печени. При приеме терапевтических доз 1% выводится в неизменном виде с мочой. Приблизительно на 83% связывается с белками крови. Период полувыведения около 7 часов. При передозировке отмечены симптомы: сонливость, тахикардия, снижение артериального давления.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
В СХО на исследование поступило направление с обстоятельствами дела: женщина 41 год с суицидной целью приняла таблетки «Сероквель», запила водкой.
Для проведения СХИ были доставлены: кровь из бедренной вены, моча, фрагмент печени, фрагмент почки.
В результате исследования крови и мочи на этиловый спирт методом газовой хроматографии с детектором по теплопроводности было установлено наличие этилового спирта в крови - 2,6%о, в моче - 4,1%о.
Для проведения процедуры жидкость-жидкостной экстракции кветиапина из фрагментов печени и почки, ферментативное разрушение 5 г тканей внутренних органов (средняя проба) проводилось с использованием трипсина. 1 из 10 мл гомогената (эквивалент 0,5 г ткани) использовали для пробоподготвки и дальнейшего исследования методом ГХ/МС. Оставшейся гомогенат (эквивалент 4,5 г ткани) экстрагировали эфиром при pH 2,5 (5M HCl), органический слой выпарили до остатка @0,5 мл, который растворили в смеси (200 мкл) Н20-карбинол (7:3), встряхнули на вортексе 2 мин и центрифугировали при 3000 об/ми в течение 5 минут. Органическую фазу нанесли на хроматографическую пластинку. Свидетели - стандартные растворы веществ кислого характера. К оставшейся водной фазе добавили 5M NaOH до pH10 (350 мкл) и экстрагировали 10 мл дихлорметана в течение 30 мин на горизонтальном шейкере (250 колеб/мин), центрифугировали 10 мин при 4000 об/мин, отделили органическую фазу, испарили до сухого остатка. Остаток растворили в смеси: карбинол-ацетонитрил-1М соляная кислота (35:35:30). Встряхивали в течение 5 мин и центрифугировали 3 мин при 9000 об/мин. Верхний слой (органическую фазу) исследовали в тонком слое сорбента. Для ТСХ использовали хроматографические пластинки размерами 10х15 см марки «Сорбфил» (ПТСХ-П-А-УФ) сорбент СТК-1А, зернение 5-17 мкм, толщина слоя 110 мкм. Параллельно с исследуемыми остатками нанесли стандартный раствор кветиапина с концентрацией 1 мг/мл. Хроматографировали в системах растворителей:
• ацетон-толуол-этанол-25% раствора гидроксида аммония (45:45:4:3). Фронт растворителей - 8 см. Детектировали реактивом Драгендорфа, модифицированным по Мунье и 20% раствором серной кислоты. В зоне исследуемых экстрактов из печени и почки наблюдали пятна, сходные по окрашиванию и величине Rf (0,5) с пятнами свидетеля кветиапина.
• карбинол -25% раствора гидроксида аммония (100:1,5). Фронт пробега растворителей - 8 см. Детектировали реактивом Драгендорфа, модифицированным по Мунье и 20% раствором серной кислоты. В зоне исследуемых экстрактов из печени и почки наблюдали пятна, сходные по окрашиванию и величине Rf (0,32) с пятнами свидетеля кветиапина.
Идентификацию кветиапина в крови, моче, печени и почке проводили методом ГХ/МС. Гомогенаты печени, почки (эквивалент 0,5 г каждого биообъекта), кровь (1 мл) и мочу (1 мл) экстрагировали бутилацетатом (0,3 мл) в присутствии трис-буфера (1M) (0,3 мл) (pH 11). В качестве внутреннего стандарта использовали раствор дефи-ниламина. Исследование проводилось на хромато-масс-спектрометре Agilent Technologies с хроматографом АТ 6890 (Serits II) и масс-селективным детектором АТ 5975N в режиме полного сканирования. Колонка хроматографа кварцевая капиллярная OT-5MS (30м х 0,25 мм х 0,25 мкм). Идентификация наблюдаемых на хроматограмме пиков проводилась по масс-спектрам электронного удара, ионным масс-хроматограммам и библиотекам масс спектров: MPW2011.L, NIST11.L, Lab.L. В исследуемых пробах крови, мочи, печени и почки наблюдали хроматографиче-ский пик, совпадающий по времени удерживания и масс спектру с кветиапином.
Количественное определение кветиапина в крови проводилось методом высоэффективной жидкостной хроматографии на жидкостном хроматографе Agilent 1100 с диодно-матричным детектором. Колонка ZORBAX Edipse XDB - C8 4,6 х 150 мм, 5 мкм. Предколонка Zorbax Edipse XDB - C8, 4,6 x 12,5 мм, 5 мкм. Температура термостата колонки 300С. Режим градиентный. Объем вводимой пробы 40 мкл. Подготовку 0,5 мл крови проводили с применением жидкость - жидкостной экстракции смесью н-гексана - дихлорметана - изопропанола (60:40:2) при рН 9,5. В исследуемой пробе наблюдали пик, совпадающий по времени удерживания и УФ спектру с пиком стандартного раствора (10мкг/мл) кветиапина. В качестве внутреннего стандарта использовали раствор 5-(4-Ме-тилфенил)-5-фенилгидантоина (МРРН) с концентрацией 10мкг/мл. Калибровочные растворы кветиапина с концентрацией 0,5мг/л; 1,0мг/л; 2,0мг/л; 5,0мг/л готовили на бланковой плазме. В результате количественного определения концентрация кветиапина в крови (с учётом разбавления 1:1) составила 8,1 мг/л.
ВЫВОДЫ
1. Показаны возможности различных методов судеб-но-химического исследования - ТСХ, ГХ/МС и ВЭЖХ.
2. Полученные данные количественного определения кветиапина в крови трупа (обстоятельства дела: подозрение на отравление кветиапином и этиловым алкоголем; вскрытие трупа через сутки после смерти) помогли установить причину смерти: комбинированное отравление кветиапином и этиловым спиртом.
