CC BY
13
на патронах Bond Elute Certify. Предварительно белковые фрагменты гомогенатов осаждали ТХУ при ультразвуковой обработке. Карфентанил был найден во всех пробах всеми методами, диапазон содержаний 50-70 нг/мл.
ВЫВОДЫ
Наиболее высокие интенсивности пиков карфента-нила наблюдали в биологических жидкостях и в гомоге-натах тканей при использовании экстракции гексаном из щелочной среды. Использование SPE экстракции было эффективным при подготовке биологических жидкостей, были получены сравнимые интенсивности пиков карфен-танила. При анализе гомогенатов тканей эффективность SPE была хуже.
■ МОНИТОРИНГ СЛУЧАЕВ ОБНАРУЖЕНИЯ ТРИМЕПРАЗИНА ПРИ ПРОВЕДЕНИИ СУДЕБНО-ХИМИЧЕСКИХ И ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ В 2017-2018 ГОДАХ_
Т. Н. Орлова1, Ю. А. Шин3, Н. А. Крупина1 2 ТБУЗ МО «Бюро СМЭ», Москва 2Кафедра судебной медицины ФУВ ГБУЗ МО МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского, Москва 3Кафедра фармацевтической и токсикологической химии им. А. П. Арзамасцева ФГАОУ ВО Первый МГМУ им И. М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) Представлен обзор случаев, в которых при проведении судебно-химических (СХИ) и химико-токсикологических (ХТИ) исследований был определен тримепразин.
Ключевые слова: тримепразин, алимемазин, нейролептик, токсическая концентрация, газовая хроматография, азотно-фосфорный детектор Тримепразин (М М бета-Триметил-10Н-феноти-азин-10-пропанамин (и в виде тартрата)) является производным фенотиазина и обладает антипсихотическим (нейролептическим), седативным и антигистаминным действием. Блокирует дофаминовые 02-рецепторы мезо-лимбической и мезокортикальной системы.
Начало эффекта происходит через 15-20 мин, длительность действия около 6-8 ч. Связь с белками плазмы составляет 20-30 %. Тримепразин интенсивно проникает в ткани, так как легко проходит через гистогематиче-ские барьеры, в том числе, и через гематоэнцефалический барьер. Период полувыведения составляет 3,5-4 ч.
Выводится преимущественно почками (70-80 %) в виде метаболита (сульфоксида) в течение 48 ч, а остальная часть препарата и его метаболитов - с желчью и каловыми массами.
По результатам проведенных СХИ и ХТИ в ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» участились случаи обнаружения тримепра-зина, как отдельно, так и в комбинациях с другими лекарственными и наркотическими веществами.
Для обнаружения тримепразина были использованы методы жидкостной хроматографии ультравысокого давления с масс-спектрометрическим детектированием и газовой хроматографии с масс-селективным детектированием.
Для количественного определения в крови использовали метод газожидкостной хроматографии с азотно-фосфорным детектором. Ранее, в статье «Обнаружение и определение лекарственных веществ нейтрального и основного характера в крови (сыворотке) газохроматогра-фическим методом с использованием азотно-фосфорного
детектора» (М.: Издательский центр «Академия», 2005) была изложена методика подготовки биологических жидкостей.
Для обнаружения тримепразина анализировали биожидкости (сыворотка крови, моча) и промывные воды желудка от живых лиц и аутопсийный материал (кровь, моча, желчь, ткани внутренних органов).
В судебно-химическом отделе ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» в 2017-2018 годах в 9 случаях тримепразин идентифицирован в аутопсийном материале. Из них: 1 случай отдельного приема препарата, 8 - в сочетании с другими лекарственными веществами, 1 - в сочетании с наркотическими средствами, 2 - комбинированного приема с этиловым спиртом (диапазон концентраций этанола в крови от 1,0 мг/л до 1,7 мг/л, в среднем 1,3 мг/л, в моче -от 1,4 мг/л до 1,9 мг/л, в среднем 1,7 мг/л).
В 3 аутопсийных случаях: концентрация тримепразина была в диапазоне от следовых количеств (менее 0,05 мг/л) до 0,07 мг/л. Из 9 случаев 4 приходится на мужской пол в возрасте от 31 до 43 лет и 5 - на женский пол, из которых 1 случай - в возрасте 16 лет, 3 - от 27 до 59 лет, 1 - 85 лет. Средний возраст умерших составляет 42 года.
По данным статистических карт судебно-медицинского исследования трупа указаны следующие причины смерти: комбинированное отравление наркотическими средствами - 1, тупая сочетанная травма туловища - 4, отравление этиловым спиртом - 2, утопление - 1.
В 14 случаях исследования сыворотки крови живых лиц был обнаружен тримепразин, из них - 2 случая отдельного приема, 12 - в сочетании с другими лекарственными веществами, такими как амитриптилин, феназепам и др.
В 8 случаях концентрация тримепразина составила от следовых количеств до 0,06 мг/л (терапевтическая концентрация). Из 14 случаев 3 приходится на мужской пол в возрасте от 15 до 33 лет, из которых 2 случая в возрасте 15 и 17 лет, и 11 - на женский пол, из которых 6 случаев -в возрасте 15-19 лет, 1 - 28 лет. Средний возраст умерших составляет 24 года.
По данным Международной ассоциации судебных токсикологов (Том 26, № 1, Дополнение, 1996 год, под редакцией Donald R. A. Uges, University Hospital, Groningen, Нидерланды), терапевтическая концентрация тримепразина в сыворотке крови составляет 0,05-0,4 мг/л, токсическая концентрация - 0,5 мг/л.
В большинстве рассмотренных случаев употребление тримепразина обусловлено назначениями врачей для лечения хронических психотических расстройств, а также при нарушениях поведения (особенно у подростков).
ВЫВОДЫ
1. Проведен анализ результатов исследования биообъектов от живых лиц и аутопсийных случаев, связанных с приемом тримепразина, как отдельно, так и в комбинациях с этиловым спиртом, лекарственными и наркотическими веществами.
2. Анализ результатов исследования биообъектов от живых лиц показал, что участились случаи отравления тримепразином в комбинации с другими лекарственными препаратами (амитриптилин, феназепам) подростками и молодыми людьми в возрасте от 15 до 33 лет. Анализ аутопсийных случаев показал, что прием тримепразина в совокупности с этиловым спиртом, лекарственными веществами и наркотическими средствами может привести к потенцированию действия этих веществ, и, следовательно, к смерти.
3. Определение тримепразина методом газовой хроматографии с азотно-фосфорным детектором при прове-
дении судебно-химических и химико-токсикологических исследований биологических объектов играет важную роль в установлении возможной причины отравления или смерти, связанной с суицидом на фоне приема три-мепразина.
■ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭТИЛГЛЮКУРОНИДА В КРОВИ И МОЧЕ МЕТОДОМ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ - МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ С ОБЪЕМНОЙ ИОННОЙ ЛОВУШКОЙ_
В. В. Войтов1, А. М. Григорьев1, Н. А. Крупина1,2 1ГБУЗ МО «Бюро СМЭ», Москва 2Кафедра судебной медицины ФУВ ГБУЗ МО МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского, Москва Для определения этилглюкуронида в биообъектах используется иммунные и хромато-масс-спектро-метрические методы. Иммуннохимические методы, несмотря на их экспрессность, из-за известных конструкционных и методологических ограничений применяются исключительно в скрининговых целях и результаты, полученные с помощью иммунохими-ческих анализаторов, могут рассматриваться как предварительные для последующих исследований подтверждающими методами. Жидкостная хрома-то-масс-спектрометрия (ЖХ-МС/МС) позволяет проводить количественные измерения содержания аналитов на уровне нанограмм, но требует пробо-подготовки, расхода реактивов и затрат времени. Ключевые слова: этилглюкуронид, хромато-масс-спектрометрический метод
Конъюгация этанола с остатком глюкуроновой кислоты в присутствии фермента УДФ-глюкуронозилтрасн-феразы предстваляет собой минорный путь выделения алкоголя из организма, в результате которого этанол ме-таболизируется и выводится в виде в-Б-этилглюкуронида (Б1С) около 0,02-0,06 % от принятой дозы.
Этилглюкуронид - нелетучий, растворимый в воде, стабильный метаболит этанола, который присутствует в различных биологических объектах и образуется почти сразу после принятия небольшого количества этанола. Окно обнаружения этилглюкуронида в крови в среднем на 8 ч, а в моче в среднем на 30 часов больше по сравнению этанолом, что делает возможным его использование в качестве маркера употребления алкоголя (в том числе хронического). Определение биомаркеров, в т.ч. этилглюкуронида используется в постмортальной токсикологии для интерпретации результатов при этом следует учитывать все обстоятельства смерти, данные судебно-медицинского исследования трупа, соблюдение рекомендаций по отбору, хранению и транспортировке биологических жидкостей для исследования на этиловый спирт.
Широко известна методика определения этилглюкуронида методом ЖХ-МС/МС (Шетшапп, 2004), подробно описывающая все стадии проведения анализа и валиди-рованная согласно химико-токсикологическим стандартам. Целью настоящей работы являлась адаптация данной методики определения этилглюкуронида в крови и моче методом ЖХ-МС/МС с объемной ловушкой к условиям скринингового определения веществ в Бюро СМЭ Московской области и ее валидация.
Пробоподготовку объектов для ЖХ-МС/МС проводили методом прямого извлечения частично смешивающимися жидкостями: к 100 мкл мочи и крови добавляли 500 мкл холодного ацетонитрила (-18 °С), тщательно перемешивали на шейкере и охлаждали (-18 °С, 15 мин). Центрифугировали 5 мин при 10000 об/мин, 400 мкл ото-
бранного супернатанта упаривали досуха. Сухой остаток растворяли в 100 мкл растворителя. Объем вводимых в хроматографическую систему проб - 5 мкл.
Анализ проводили с помощью жидкостной хромато-масс-спектрометрической системы, состоящей из: высокоэффективного жидкостного хроматографа ультавы-сокого давления UltiMate 3000 (Thermo Fisher Scientific) и масс-спектрометра AmaZon Speed (объемная ионная ловушка, Bruker Daltonics).
Для определения концентрационной чувствительности системы измерены аналитические сигналы водных и матричных (моча) растворов этилглюкуронида в диапазоне концентраций от 0,1 до 1 мкг/мл. В моче минимально детектируемая концентрация составила около 0,5 мкг/мл. Также показана возможность измерения концентрации этилглюкуронида минимум до 50 мкг/мл.
Охарактеризовано хроматографическое поведение этилглюкуронида при вводе пробы в водном и 1-10 % водных растворах ацетонитрила, полученных после пробо-подготовки затравленных бланковых проб (концентрация этилглюкуронида составляла 0,1-50 мкг/мл). При концентрации ацетонитрила более 1 % наблюдалось искажение формы хроматографических пиков, что приводит к увеличению погрешности при количественном определении.
Для изменения удерживания этилглюкуронида и согласования условий его нахождения в растворе и подвижной фазе рассмотрено увеличение стартовой концентрации ацетонитрила при градиентном элюировании в хроматографической системе. При ее увеличении наблюдалось уменьшение времени удерживания и снижение интенсивности аналитического сигнала.
Для количественного определения использован внутренний стандарт - дейтерированное производное этил-глюкуронида (D5-EtG) концентрацией 10 мкг/мл. Рассмотрена схема фрагментации внутреннего стандарта, определены переходы для количественного расчета результатов анализов: m/z 221^203 для EtG и m/z 226^208 для D5-EtG. Определен линейный диапазон градуиро-вочной зависимости - 5-100 мкг/мл для мочи и 0,5-10 мкг/мл - для крови. Рассчитаны пределы обнаружения (0,5 мкг/мл в моче и 0,04 мкг/мл в крови) и количественного определения (2,5 мкг/мл в моче и 0,12 мкг/мл в крови).
Проведены измерения содержания этилглюкуронида в аутопсийном материале для иллюстрации возможностей методики.
АЛЬТЕРНАТИВНЫЕ ОБЪЕКТЫ
СУДЕБНО-ХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ_
Т. В. Горбачева, В. А. Бычков
Санкт-Петербургское ГБУЗ «Бюро СМЭ», Санкт-Петербург В докладе рассматриваются вопросы судебно-хи-мического исследования волос и ногтей и возможности оценки их результатов для ретроспективного анализа фактов приема ксенобиотиков. Ключевые слова: волосы, ногти, судебно-химиче-ское исследование
Традиционными объектами судебно-химических исследований являются биологические жидкости и биологические ткани человека. Для данных объектов разрабатываются методики анализа, по результатам количественного определения токсикантов в крови делается вывод о степени их влияния на состояние человека или наступления смертельного исхода. Но в последние годы у судебно-след-ственных органов все чаще появляется необходимость в установления факта приема или воздействия токсиканта
