CC BY
492
нил-1-пропиламина 20 мкг/мл (внутренний стандарт), встряхивают и добавляют по 0,3 мл трис-буфера (1М) до рН 11. Экстрагируют 2 мл хлористого метилена, интенсивно встряхивая 20 минут на встряхивателе горизонтального типа встряхивания (300 колеб./мин). Центрифугируют 5 минут при 4500 об/мин. Водные слои удаляют с помощью водоструйного насоса. Органические фазы фильтруют в виалу через фильтр для разделения фаз. Добавляют по 100 мкл раствора винной кислоты в этилацетате (1мг/ мл). Экстракты выпаривают при комнатной температуре на вакуумном концентраторе экстрактов досуха. К сухим остаткам в виале добавляют по 50 мкл этилацетата и по 50 мкл пентафторпропионового ангидрида (ПФПА), герметично закрывают, тщательно перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 20 минут. Открывают виалы, выпаривают при комнатной температуре на вакуумном концентраторе экстрактов досуха. Сухие остатки тщательно растворяют в 100 мкл этилацетата, интенсивно встряхивая на вортексе, переносят во вставки в виалки, которые герметично закрывают и по 1 мкл вводят в испаритель хроматографа.
Исследование проводят на газовом хроматографе Маэстро АТ 7820 А с масс-селективным детектором AT 5975 в режиме селективного мониторинга индивидуальных ионов (с 5.0 мин по 6,00 мин: 118, 190, 91; с 6,00 мин по 6,32 мин 204, 160, 118; с 6,32 мин по 6,50 мин: 117, 177, 281; с 6,50 мин по 7,40 мин: 135, 162, 190; с 7,40 мин по 7,71 мин: 204, 162,135; с 7,71 мин по 7,82 мин: 218,190,162; с 7,82 мин по 8,00 мин: 218, 176, 135). Колонка капиллярная Agilent 19091S-433 HP-5MS 0.25мм*30м*0,25мкм. Начальная температура колонки-700 С. Время выдержки при начальной температуре - 2 минуты. Подъем температуры в диапазоне 70-2900 С-200 С/мин. Время выдержки при 2900 С - 20 мин. Скорость газа носителя (гелий) - 1 мл/мин. Температуры инжектора, масс-селективного источника и квадру-поля -2900С, 2300 С и 1500С соответственно.
Время удерживания ПФПА производного амфетамина - 5,7 мин, ПФПА производного метамфетамина - 6,2 мин, ПФПА производного МДА - 7.2 мин, ПФПА производного МДМА - 7,64 мин, ПФПА производного МДЕА -7,78 мин, ПФПА производного МБДБ - 7,85 мин.
ВЫВОДЫ
• Использование винной кислоты и соблюдение температурного режима исключает потери соединений класса амфетаминов на стадии подготовки биожидкостей.
• Вследствие схожести в химических структурах, одинаковых условий экстракции и дериватизации, в качестве внутреннего стандарта был выбран 3-фенил-1- пропил-амин.
• Комбинация предложенного метода подготовки биожидкостей и условий проведения хромато-масс-спек-трометрического исследования на современном оборудовании, которое используется в практической работе судебно-химического отдела, позволяет использовать пробы малой размерности.
• В связи с ограниченностью возможностей лабораторий использовать аналитические стандарты широкого спектра наркотических веществ, их метаболитов, для внедрения в практику методик количественного определения в качестве калибраторов для оценки подтверждающего метода исследования выбраны доступные для закупки поверочные контроли мочи с целевыми значениями каждого из соединений (Drug U-Confirmation фирмы MEDICHEM) и стандартные растворы амфетамина и МДМА (ФГУП ГосНИИОХТ).
• Метод определения охарактеризован пределами обнаружения и определения наркотических средств и отра-
ботан в лаборатории на той же биологической матрице, что и исследуемые пробы.
• Внедренная технология позволяет надежно идентифицировать и определять в биологических жидкостях амфетамин, метамфетамин, МДА, МДМА, МДЕА, МБДБ -соединения одного из основных классов наркотических средств.
Обнаружение a-PVP и его метаболитов в биологических образцах методом газовой хроматографии / масс-спектрометрии
• к.ф.н. Э. Г. Николаева, М. В. Марченко, И. Б. Бантыш, Н. А. Крупина
ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» МЗ МО (нач.— д.м.н., проф. В. А. Клевно) Аннотация: Доклад посвящен вопросу обнаружения нового дизайнерского наркотика a-пирролидиновалерофенона (a-PVP, PVP) и его метаболитов в биологических жидкостях (крови и моче) и трупном материале (печень, почка) с использованием в качестве метода пробоподготовки - жидкость-жидкостной экстракции (ЖЖЭ). Обнаружение а-пирролидино-валерофенона (1-фенил-2-(пирролидин-1-ил) пентан-1-он) проводили методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором (ГХ/МС).
Ключевые слова: а-пирролидиновалерофе-нон, PVP, ГХ/MC
Detection of a-PVP and its metabolites in biological samples using gas chromatographic / mass spectrometric techniques
• E. G. Nikolaeva, M. V. Marchenko, I. B. Bantish, N. A. Krupina
Abstract: Report focuses on the issue of discovering a new "designer drug" - а-pirrolidinovalerophenone (а-PVP, PVP) and its metabolites in biological fluids (blood and urine) and biological tissues (liver, kidney) using as sample preparation technique - liquid-liquid extraction. Detection of а-pirrolidinovalerophenone and its main metabolites was performed by gas chromatography with a mass selective detector (GC/ MS).
Keywords: a-pirrolidinovalerophenone, PVP, GC/ MS
ВВЕДЕНИЕ
В последние годы стремительно растет популярность синтетических наркотических средств, так называемых «дизайнерских наркотиков». В связи с этим введение в скрининговые процедуры, используемые в практической работе методики ГХ/МС определения наркотических средств синтетического происхождения, является одной из актуальных задач судебно-химической практики. PVP - мощный стимулятор центральной нервной и сердечно-сосудистой систем класса фенилалкиламинов. Действует как ингибитор обратного захвата дофамина, нор-адреналина и серотонина. Используется в рекреационных целях в качестве стимулятора, эйфоритика и энтактогена (в повышенных дозах).
На этом основании и в соответствии с постановлением Правительства Российской Федерации от 19 ноября 2012 г. N 1178 г. Москва «О внесении изменения в перечень наркотических средств, психотропных веществ и их прекурсоров, подлежащих контролю в Российской Феде-
рации», а также в соответствии с «Методическими подходами по отнесению соединений к «производным наркотических средств и психотропных веществ» в соответствии с постановлением Правительства Российской Федерации от 19 ноября 2012 г. № 1178» объекты позиции «a-PVP (a-пирролидинопентиофенон)» являются производными N-метилэфедрона, и оборот объектов позиции «a-PVP» в настоящее время находится в Российской Федерации под контролем государства (позиция «N-метилэфедрон и его производные, за исключением производных, включенных в качестве самостоятельных позиций в перечень»).
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В организме PVP быстро и практически полностью метаболизируется. Метаболизм Ä-PVP достаточно сложен и протекает сразу по нескольким направлениям. Основные метаболиты: 2-оксо- PVP, 4-гидрокси- PVP, гидр-оксифенил-N, N - 2-дезалкил - PVP.
1. В качестве объектов исследования для обнаружения PVP и его метаболитов использовали кровь и мочу живых лиц, биологические жидкости и внутренние органы (печень, почка) аутопсийного материала. Пробоподготовка проводилась методами, разработанными и принятыми в практике судебно-химического отдела для исследования биологических жидкостей и аутопсийного биологического материала на наличие лекарственных и наркотических веществ. При этом использовали 1 мл мочи, 1 мл крови и 5 г ткани (печень, почка). Исследования проводились методом ГХ/МС на хроматомасс-спектрометре Agilent Technologies с хроматографом AT 6890 и масс-селектив-ным детектором AT 5975N. Колонка хроматографа кварцевая, капиллярная HP-5MS (30м x 0.25 мм x 0.25 мкм). Начальная температура колонки-700С. Время выдержки при начальной температуре - 2 минуты. Подъем температуры в диапазоне 70-2800С-200С/мин. Время выдержки при 2800С - 9,5 мин. Подъем температуры в диапазоне 2800С-3000С-200С/мин. Время выдержки при 3000С - 4,0 мин. Скорость газа носителя (гелий) - 1 мл/мин. Температуры инжектора, источника и квадруполя - 280°C, 230°С и 150°С соответственно. Режим - без сброса (splitless). Напряжение на ЭУ: + 100 eV Объем вводимой пробы - 1 мкл. Диапазон масс - 40-550 а.е.м. Идентификация наблюдаемых на хроматограмме пиков проводилась в режиме сканирования (SCAN) по масс-спектрам электронного удара, ионным масс-хроматограммам и библиотеке масс-спектров: MPW2011.L. В исследуемых пробах биологических объектов идентифицированы: PVP и его метаболиты: 2-оксо-PVP, дигидрокси-PVP в виде 2ТМС производного, гидроксифенил-оксо-PVP в виде ТМС производного, гидроксиалкил-оксо-PVP в виде ТМС производного и N, N-бис-деалкил-PVP в виде ТМС производного.
ВЫВОДЫ
При проведении судебно-химических исследований PVP и его основные метаболиты идентифицированы в биологических жидкостях и тканях внутренних органов при использовании жидкость-жидкостной экстракции и метода ГХ/МС. Применяемые методики жидкость-жидкостной экстракции позволяют производить исследования проб малой размерности (1 мл биологических жидкостей и эквивалента 0.5 г гомогената 5 г тканей внутренних органов).
Оротаверпн в судебной токсикологии
• Т. Н. Орлова, Р. Н. Пашовкина, Р. Р. Краснова, Н. А. Крупина
ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» МЗ МО (нач.— д.м.н., проф. В. А. Клевно) Аннотация: Доклад посвящен случаям определения дротаверина, как отдельно, так и в комбинации с другими веществами. Исследование крови и сыворотки крови проводили методом газовой хроматографии с азотно-фос-форным детектором и газовой хроматографии с масс-селективным детектором. Высокая чувствительность методов позволяет идентифицировать и определять лекарственные вещества в пробах малой размерности (1 мл). Ключевые слова: дротаверин, газовая хроматография с азотно-фосфорным детектором, судебная токсикология
Drotaverine in forensic toxicology
• T. N. Orlova, R. N. Pashovkina, R. R. Krasnova, N. A. Krupina
Abstract: There are cases of intoxication drotaverine, both separately and in combination with other substances. Blood analysis were performed by GC/NPD and GC/MS. The high sensitivity of methods allows to detect and quantitate drugs in 1 mL blood. Keywords: drotaverine, GC/NPD, forensic toxicology
ВВЕДЕНИЕ
Газовая хроматография прочно заняла ведущее место среди наиболее эффективных методов анализа и широко применяется в судебно- химических и химико-токсилоги-ческих лабораториях. Высокочувствительный метод газовой хроматографии с азотно-фосфорным детектором внедрен в практическую работу СХО ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» в 2003 году и используется для идентификации и количественного определения лекарственных веществ в крови. В качестве скринингового метода для идентификации лекарственных веществ в крови также применяется метод газовой хроматографии с масс-селективным детектором
Дротаверин (1-(3,4-диэтоксибензилиден)-6,7-диэт-окси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин) гидрохлорид - лекарственное средство, обладающее спазмолитическим, миотропным, сосудорасширяющим, гипотензивным действием.
В соответствии с методическим пособием для врачей «Фармакология Но-Шпы (авторы: Белоусов Ю.Б, Леонова М. В.): «После однократного перорального приема 80 мг дротаверина гидрохлорида, максимальная концентрация в плазме исходного соединения (0,14-0,32 мг/л) достигается через 2 часа после приема. Биодоступность дротаверина при приеме внутрь составляет 60%. Дротаверин связывается с белками плазмы (95-98%), особенно с альбуминовой, в- и у-глобулиновой фракцией и а-липо-протеинами. Период полувыведения составляет 16 часов. Около 60% дротаверина при пероральном приеме выделяется через ЖКТ и до 25% с мочой. Главный путь метаболизма - окисление дротаверина. Дротаверин метаболизируется почти полностью до монофенольных соединений. Его метаболиты быстро конъюгируются с глюкуроновой кислотой».
При передозировке усиливаются побочные эффекты препарата, возможна AV-блокада, остановка сердца, паралич дыхательного центра.
Одновременный прием дротаверина гидрохлорида с морфином снижает спазмогенную активность последне-
