CC BY
224
рации», а также в соответствии с «Методическими подходами по отнесению соединений к «производным наркотических средств и психотропных веществ» в соответствии с постановлением Правительства Российской Федерации от 19 ноября 2012 г. № 1178» объекты позиции «a-PVP (a-пирролидинопентиофенон)» являются производными N-метилэфедрона, и оборот объектов позиции «a-PVP» в настоящее время находится в Российской Федерации под контролем государства (позиция «N-метилэфедрон и его производные, за исключением производных, включенных в качестве самостоятельных позиций в перечень»).
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В организме PVP быстро и практически полностью метаболизируется. Метаболизм Ä-PVP достаточно сложен и протекает сразу по нескольким направлениям. Основные метаболиты: 2-оксо- PVP, 4-гидрокси- PVP, гидр-оксифенил-N, N - 2-дезалкил - PVP.
1. В качестве объектов исследования для обнаружения PVP и его метаболитов использовали кровь и мочу живых лиц, биологические жидкости и внутренние органы (печень, почка) аутопсийного материала. Пробоподготовка проводилась методами, разработанными и принятыми в практике судебно-химического отдела для исследования биологических жидкостей и аутопсийного биологического материала на наличие лекарственных и наркотических веществ. При этом использовали 1 мл мочи, 1 мл крови и 5 г ткани (печень, почка). Исследования проводились методом ГХ/МС на хроматомасс-спектрометре Agilent Technologies с хроматографом AT 6890 и масс-селектив-ным детектором AT 5975N. Колонка хроматографа кварцевая, капиллярная HP-5MS (30м x 0.25 мм x 0.25 мкм). Начальная температура колонки-700С. Время выдержки при начальной температуре - 2 минуты. Подъем температуры в диапазоне 70-2800С-200С/мин. Время выдержки при 2800С - 9,5 мин. Подъем температуры в диапазоне 2800С-3000С-200С/мин. Время выдержки при 3000С - 4,0 мин. Скорость газа носителя (гелий) - 1 мл/мин. Температуры инжектора, источника и квадруполя - 280°C, 230°С и 150°С соответственно. Режим - без сброса (splitless). Напряжение на ЭУ: + 100 eV Объем вводимой пробы - 1 мкл. Диапазон масс - 40-550 а.е.м. Идентификация наблюдаемых на хроматограмме пиков проводилась в режиме сканирования (SCAN) по масс-спектрам электронного удара, ионным масс-хроматограммам и библиотеке масс-спектров: MPW2011.L. В исследуемых пробах биологических объектов идентифицированы: PVP и его метаболиты: 2-оксо-PVP, дигидрокси-PVP в виде 2ТМС производного, гидроксифенил-оксо-PVP в виде ТМС производного, гидроксиалкил-оксо-PVP в виде ТМС производного и N, N-бис-деалкил-PVP в виде ТМС производного.
ВЫВОДЫ
При проведении судебно-химических исследований PVP и его основные метаболиты идентифицированы в биологических жидкостях и тканях внутренних органов при использовании жидкость-жидкостной экстракции и метода ГХ/МС. Применяемые методики жидкость-жидкостной экстракции позволяют производить исследования проб малой размерности (1 мл биологических жидкостей и эквивалента 0.5 г гомогената 5 г тканей внутренних органов).
Оротаверпн в судебной токсикологии
• Т. Н. Орлова, Р. Н. Пашовкина, Р. Р. Краснова, Н. А. Крупина
ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» МЗ МО (нач.— д.м.н., проф. В. А. Клевно) Аннотация: Доклад посвящен случаям определения дротаверина, как отдельно, так и в комбинации с другими веществами. Исследование крови и сыворотки крови проводили методом газовой хроматографии с азотно-фос-форным детектором и газовой хроматографии с масс-селективным детектором. Высокая чувствительность методов позволяет идентифицировать и определять лекарственные вещества в пробах малой размерности (1 мл). Ключевые слова: дротаверин, газовая хроматография с азотно-фосфорным детектором, судебная токсикология
Drotaverine in forensic toxicology
• T. N. Orlova, R. N. Pashovkina, R. R. Krasnova, N. A. Krupina
Abstract: There are cases of intoxication drotaverine, both separately and in combination with other substances. Blood analysis were performed by GC/NPD and GC/MS. The high sensitivity of methods allows to detect and quantitate drugs in 1 mL blood. Keywords: drotaverine, GC/NPD, forensic toxicology
ВВЕДЕНИЕ
Газовая хроматография прочно заняла ведущее место среди наиболее эффективных методов анализа и широко применяется в судебно- химических и химико-токсилоги-ческих лабораториях. Высокочувствительный метод газовой хроматографии с азотно-фосфорным детектором внедрен в практическую работу СХО ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» в 2003 году и используется для идентификации и количественного определения лекарственных веществ в крови. В качестве скринингового метода для идентификации лекарственных веществ в крови также применяется метод газовой хроматографии с масс-селективным детектором
Дротаверин (1-(3,4-диэтоксибензилиден)-6,7-диэт-окси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин) гидрохлорид - лекарственное средство, обладающее спазмолитическим, миотропным, сосудорасширяющим, гипотензивным действием.
В соответствии с методическим пособием для врачей «Фармакология Но-Шпы (авторы: Белоусов Ю.Б, Леонова М. В.): «После однократного перорального приема 80 мг дротаверина гидрохлорида, максимальная концентрация в плазме исходного соединения (0,14-0,32 мг/л) достигается через 2 часа после приема. Биодоступность дротаверина при приеме внутрь составляет 60%. Дротаверин связывается с белками плазмы (95-98%), особенно с альбуминовой, в- и у-глобулиновой фракцией и а-липо-протеинами. Период полувыведения составляет 16 часов. Около 60% дротаверина при пероральном приеме выделяется через ЖКТ и до 25% с мочой. Главный путь метаболизма - окисление дротаверина. Дротаверин метаболизируется почти полностью до монофенольных соединений. Его метаболиты быстро конъюгируются с глюкуроновой кислотой».
При передозировке усиливаются побочные эффекты препарата, возможна AV-блокада, остановка сердца, паралич дыхательного центра.
Одновременный прием дротаверина гидрохлорида с морфином снижает спазмогенную активность последне-
го. Препарат усиливает эффект спазмолитиков (в том числе м-холиноблокаторов); усиливает гипотензию, вызванную трициклическими антидепрессантами, хинидином, новокаинамидом. Одновременный прием с фенобарбиталом усиливает спазмолитическое действие дротаверина.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Основным объектом исследования является цельная кровь. В постмортальных случаях, периферическая кровь, по сравнению с мочой и другими биологическими жидкостями, является предпочтительным объектом для скрининга на неизвестное вещество, т.к. обеспечивает непосредственное доказательство вещества, оказавшего фармакологическое действие на момент смерти.
При идентификации хроматографических пиков, полученных при анализе проб, параллельно с исследуемым образцом анализировали контроли: положительный (извлечение из плазмы, содержащей исследуемое вещество -дротаверин) и отрицательный (извлечение из бланковой плазмы). Количественный анализ проводили методом внутреннего стандарта. В качестве внутреннего стандарта использовали дифениламин. Для построения калибровочного графика использовали бланковую плазму. Калибровочные растворы готовили из стандартного вещества дротаверина гидрохлорида в концентрации 1 мг/мл в метаноле. Предел обнаружения дротаверина 0,15 мг/л, предел определения - 0,5 мг/л. Линейность: 0,5-20 мг/л.
Случаи из практики:
Анализ работы за 2006-2009 годы с указанием в направлениях обстоятельств дела: «смерть дома - 20 случаев, смерть на работе - один случай, смерть в больнице - 3 случая, отравление Но-Шпой - 2 случая):
• 20 случаях: концентрация дротаверина в крови была в диапазоне 2,4 мг/л - 28,6 мг/л (в среднем - 10,5 мг/л) и концентрация этилового спирта - 0,3%о - 4,5%о (в среднем - 2,1%);
• 4 случаях при отсутствии этилового спирта в крови: концентрация дротаверина была в диапазоне 3,7 мг/л -22,0 мг/л (в среднем - 12.3 мг/л).
В случаях исследования крови, поступившей из больниц, (подозрение на медикаментозное отравление): в семи случаях концентрация дротаверина в крови была в диапазоне 1,0 мг/л - 10,0 мг/л (в среднем - 4.4 мг/л), этиловый спирт в крови отсутствовал. В двух случаях при концентрации этилового спирта в крови 1,9% и 2,5%, концентрация дротаверина составляла 1,6 мг/л и 2,3 мг/л соответственно.
По данным судебно-химического отдела ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» за 2011-2014 г.г.: проведено более 180 исследований, где был идентифицирован и количественно определен дротаверин в крови в постмортальных случаях. Обстоятельства, указанные в направлениях на судеб-но-химическое исследование: умер дома - 95 случаев, падение с высоты - 3 случая, умер в больнице - 35 случаев, обнаружен в автомашине - 5 случаев, обнаружен в подъезде - 45 случаев, обнаружен на даче - 5 случаев, отравление Но-Шпой - 1 случай.
Подробно были изучены и проанализированы случаи за 2013-2014 годы из практики судебно-химического отдела по исследованию постмортального биоматериала: дротаверин, как правило, присутствовал в крови в комбинации с этанолом или другими лекарственными либо наркотическими средствами.
В 2013-2014 годах:
• 17 случаях с летальным исходом, при отсутствии этилового спирта, наркотических средств и лекарственных веществ, концентрация дротаверина в крови была определена в диапазоне от следовых количеств до 3,4 мг/л;
• 10 случаях с летальным исходом, при комбинированном приеме дротаверина и этилового алкоголя, концентрация дротаверина в крови была определена в диапазоне от следовых количеств до 133,7 мг/л, концентрация этилового спирта - 0,52-3,0%;
• 23 случаях с летальным исходом, при комбинированном приеме дротаверина, этилового спирта и других лекарственных веществ (клозапин, анаприлин, хлорпротик-сен, карбамазепин, диазепам, доксиламин), концентрация дротаверина в крови была определена в диапазоне от следовых количеств до 108,5 мг/л, концентрация этилового спирта -1,6-4,8%;
• 19 случаях с летальным исходом, при комбинированном приеме дротаверина, этилового спирта и ненаркотических анальгетиков, и нестероидных противовоспалительных препаратов (ННА и НПВС), такими как анальгин, парацетамол, ибупрофен, диклофенак, напро-ксен, концентрация дротаверина в крови была определена в диапазоне от следовых количеств до 15,0 мг/л, концентрация этилового спирта - 0,3-3,9%;
• 20 постмортальных случаях, при комбинированном приеме дротаверина с наркотическими веществами группы опия, этилового спирта и ННА и НПВС, концентрация дротаверина в крови была определена в диапазоне от следовых количеств до 1,8 мг/л, концентрация этилового спирта - 0,32-2,8%.
ВЫВОДЫ
1. Для обнаружения и определения дротаверина в биожидкостях использовали инструментальные методы анализа: газовую хроматографию с азотно-фосфорным и масс-селективным детекторами.
2. Проведен анализ постмортальных случаев, связанных с приемом дротаверина, как отдельно, так и в комбинациях с этиловым спиртом, лекарственными веществами, наркотическими средствами. При интерпретации результатов судебно-химического исследования необходимо учитывать взаимное влияние идентифицированных в крови веществ. Большое значение имеет проведение количественных определений в крови, результаты которых позволяют установить причину смерти.
Случай из практики: комбинированное отравление кветиапином и этиловым алкоголем
• Н. Е. Павлова, Р. Н. Пашовкина,
3. Г. Николаева, О. Г. Заторкина, Р. Р. Краснова, Н. А. Крупина
ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» МЗ МО (нач.— д.м.н., проф. В. А. Клевно) Аннотация: В постерном докладе представлен случай из практики судебно-химического отдела (СХО) ГБУЗ МО «Бюро СМЭ». В ходе проведения судебно-химического исследования (СХИ) применены внедрённые в практику отдела методы жидкость-жидкостной экстракции лекарственных веществ из биологических объектов; методы их обнаружения - тонкослойная хроматография (ТСХ), газовая хроматография с масс-селективным детектором (ГХ/МС); метод высоко-эффективной жидкостной хроматографии с диодно-матричным детектором для определения кветиапина в крови и метод газовой хроматографии (ГХ) с детектором по теплопроводности с целью определения этилового спирта в крови и моче.
