CC BY
20
«(ИНФЕКЦИИ И ИНФЕКЦИОННАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ В ГЕМАТОЛОГИИ И СЛУЖБЕ КРОВИ»
Санкт-Петербург 13-14 ноября 2014 г.
ко рутинной гистологической окраски (окраска гематоксилином и эозином) не позволяет достоверно верифицировать патологический процесс. Морфологические изменения, обусловленные цитомегаловирусом, наряду с гигантоклеточной трансформацией эпителиальных и неэпителиальных клеток, могут сопровождаться выраженным альтеративно-экссудативным компонентом воспаления и формированием полей некроза. Поражения, обусловленные прогрессированием токсоплазмоза, у этого контингента пациентов представлены формированием полей некроза
с минимальной перифокальной клеточной реакцией, но с формированием «классических» псевдоцист, содержащих в себе скопления возбудителя, хорошо выявляющегося при окраске реактивом Шиффа и при иммуногистохимиче-ском окрашивании.
Выводы. Полноценная морфологическая диагностика инфекционных поражений в условиях иммунодефицита и патоморфоза инфекционных заболеваний может быть осуществлена при использовании широкого комплекса гистохимических и иммуногистохимических методов
Кирьянова Г. Ю., Волкова С. Д., Кайтанджан Е. И., Бурылев В. В.
ФГБУ«Научно-исследователъский институт детских инфекций Федерального .медико-биологического агентства», Санкт-Петербург
ЛЕЙКОРЕДУКЦИЯ ГЕМОКОМПОНЕНТОВ КАК МЕТОД ПРОФИЛАКТИКИ ТРАНСМИССИИ ЛЕЙКОЦИТАССОЦИИРОВАННЫХ ИНФЕКЦИЙ
Введение. Важным звеном в повышении иммунологической и инфекционной безопасности гемотрансфузионной терапии является лейкофильтрация компонентов крови. Этот метод позволяет значительно снизить вероятность трансмиссии ряда широко распространенных вирусов (цитомегаловируса, вируса Эпштейна-Барр, Т-лимфотропного вируса человека I и II типа, парвовирусов и др.) и риккетсий (Orientia tsutsugamushi), являющихся лейкоцитассоци-ированными инфекционными агентами, также он эффективен и в отношении таких паразитических простейших как Trypanosoma cruzi и Leishmania, не связанных или связанных лишь частью жизненного цикла с клетками крови (моноцитами и макрофагами для Leishmania). В этом случае задержка инфекционных агентов фильтрующим материалом осуществляется не только за счет элиминации лейкоцитов, но и путем прямой адгезии экстрацеллюлярных организмов к волокнам фильтра. В исследованиях in vitro показано, что удаление примесей лейкоцитов предупреждает рост Yersinia enterocolitica в процессе хранения препаратов эритроцитов при 4°С (более 40 % случаев клинического сепсиса от трансфузий эритроцитных сред приходится на инфицирование данным патогеном за счет асим-птоматической или слабо выраженной бактериемии у донора). В большинстве развитых стран (Канада, Франция, Швейцария, Великобритания, Португалия, Новая Зеландия и др.) уже более 10 лет осуществляется обязательная универсальная
лейкодеплеция гемокомпонентов. В России разработка отечественных устройств для удаления лейкоцитов из крови и компонентов проводится по инициативе ФГБУ РосНИИГТ совместно с рядом научно-производственных объединений (НТЦ «Мепотекс», НПП «Экофильтр», ЗАО «НПП «Интероко») с 1990-х годов, что позволило создать качественные образцы лейкофиль-трующих устройств («Лейкосеп»®, «Лейкосеп»®-Пл», «Лейкосеп»®-Пк» и др.), обеспечивающих снижение остаточных лейкоцитов в среднем до 0,75±0,113х106 в дозе эритроцитной массы и 3,8±0,07х104 в дозе плазмы.
Цель. Оценить эффективность разрабатываемых новых устройств для лейкоредукции гемокомпонентов с использованием двух методов подсчета остаточных лейкоцитов. Показать возможность снижения степени вирусной нагрузки при лейкофильтрации инфицированной крови через серийное устройство «Лейкосеп»®.
Материалы и методы. Материалом исследования служила кровь доноров, а также больных с активной ЦМВ и ВЭБ инфекцией. Использовались модифицированные и вновь разрабатываемые образцы лейкофильтров, а также малые макетные образцы серийного устройства «Лейкосеп»®. Для оценки степени лейкодеплеции использован подсчет остаточных лейкоцитов в камере Nageotte и на аппарате ADAM-rWBC. Величину вирусной нагрузки в крови больных до и после лейкофильтрации оценивали методом ПЦР («real time»).
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИтом X, № 4, 2014
Результаты. В настоящее время в РосНИИГТ совместно с НТЦ «Мепотекс» и ЗАО «НПП «Ин-тероко» проводится работа по созданию новых образцов устройств для лейкоредукции цельной крови, в том числе с фильтрующими материалами на основе нановолокон. При апробации 6 опытных образцов количество остаточных лейкоцитов в эритроцитной массе составило в среднем 2,65±0,58хЮ6/л (0,66хЮ6 в условной дозе 250 мл) при подсчете в камере Nageotte и 2,93±0,59хЮ6/л(0,73хЮ6в усл. дозе) - при подсчете с помощью аппарата АОАМ-^ВС. Важный результат получен при оценке эффективности устройства «Лейкосеп»® (в виде малого макетного образца фильтра) при проведении пилотного исследования (п=3) с кровью больных с активной ЦМВ и ВЭБ инфекцией (наличие генома вируса в клетках крови). Методом полиме-разной цепной реакции установлено, что исходная вирусная нагрузка соответствовала <500 ген-экв/мл; после пропускания крови через фильтр
сигнал в ПЦР («real time») - отсутствовал, что позволяет сделать вывод об эффективности лей-кодеплеции, повышающей инфекционную безопасность крови.
Выводы. Внедрение в практику отечественных устройств для удаления лейкоцитов из гемо-компонентов, имеющих стоимость в 4-6 раз ниже зарубежных аналогов, позволит удовлетворить клинические потребности в обедненных лейкоцитами компонентах крови и существенно снизить риск развития посттрансфузионных реакций и осложнений. Метод лейкофильтрации дает возможность уменьшить опасность инфицирования больных лейкоцитассоциированными гемотранс-миссивными инфекциями, особенно у пациентов, получающих множественные гемотрансфузии. Сравнение двух методов оценки остаточного содержания лейкоцитов в фильтрованной эритроцитной массе (в камере Nageotte и с помощью аппарата ADAM-rWBC) не выявило статистически значимых различий в результатах.
Кудинова Е. В., Гуменоеа В. Н., Суслина О. В., Кузнецов С. И., Киселева Е. В.
ГБУЗ «Самарская областная клиническая станция переливания крови», Самара
ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНОГО ГЕПАТА В (ИВУ) В СЛУЖБЕ КРОВИ САМАРСКОЙ ОБЛАСТИ
Введение. Вирусный гепатит В (НВУ-инфекция) является распространенным и социально-значимым заболеванием во всем мире. В Российской Федерации ежегодно регистрируется высокий уровень впервые выявленных хронических форм заболевания вирусными гепатитами (далее — ХВГ), которые характеризуются возможным неблагоприятным исходом заболевания, включая развитие цирроза и (или) первичной гепатоцеллюлярной карциномы. По данным ВОЗ 57 % случаев цирроза печени и 78 % случаев первичного рака печени обусловлены инфицированием вирусами гепатитов В или С. Основными путями передачи вируса гепатита В являются: парентеральный — переливание крови, инвазивные исследования, гемодиализ; нарушение целостности кожи и слизистых оболочек (татуировки, акупунктура, пользование общими зубными щетками); половой, вертикальный, перинатальный. В службе крови на сегодняшний день в соответствии с действующими приказами обязательным скрининговым маркером является определение HBsAg (поверхностный антиген
вируса гепатита В) в сывотке крови доноров. Ранее считалось, что основным критерием хронической НВУ- инфекции является циркуляция HBsAg в сыворотке крови больных более 6 месяцев, но благодаря молекулярно-биологическим методам было установлено, что у больных в отсутствие НВв-антигена в сыворотке крови может выявляться ДНК вируса, что свидетельствует о латентном варианте НВУ- инфекции. Известно, что потенциальным источником заражения реципиентов крови может служить «HBsAg-мутантная» форма инфекции (при которой в крови циркулирует структурно-измененный поверхностный антиген). Эти штаммы НВУ способны обуславливать ложноотрицательный результат при скрининге донорской крови на НВв-антиген.
Цель. Проанализировать результаты исследований, полученных при скрининге крови доноров на ДНК НВУ методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) .
Материалы и методы. В службе крови Самарской области, начиная с 2009 года, доноры крови, тромбоцитафереза и эритроцитафереза
