CC BY
56
Метод заготовки и создания запасов лейкофильтрованных...
79
Г. Ю. Кирьянова, С. Д. Волкова
4
карантинизированных эритроцитов
Метод заготовки и создания запасов лейкофильтрованных
ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства»
Совершенствование диагностики вирусных инфекций и тщательный отбор доноров, внедрение методов лейкофильтрации компонентов крови, вирусной инактивации и карантиниза-ции плазмы позволили в настоящее время снизить опасность гемотерапии. Тем не менее, у трансфузионнозависимых пациентов остается высоким риск инфицирования гемотрансмиссивными инфекциями. Удельный вес посттрансфузионного гепатита среди больных гепатитом В, составляет по данным разных авторов, от 2% до 18%, а среди детей первого года жизни - 77-89%. Частота передачи вируса гепатита С с гемотрансфузиями достигает 5-10% от общей заболеваемости гепатитом С. Вклад гемотрансмиссивной ВИЧ-инфекции в распространение заболеваемости СПИД в глобальном масштабе составляет 3-5%. Даже при использовании метода ПЦР для детекции вирусного генома в крови доноров период «негативного окна» составляет 40 дней при гепатите В и не менее 22 дней при гепатите С и ВИЧ. Проблема усугубляется чрезвычайно высокой инфекционностью этих вирусов: заражение человека происходит при попадании в организм 10-100 полноценных вирусных частиц гепатита В и 0,1 мл крови носителя ВИЧ.
Учитывая сложности диагностики этих опасных инфекций, дополнительной мерой их предупреждения у реципиента является карантинизация эритроцитных сред, наряду с уже широко применяемой в практике службы крови карантинизацией плазмы.
Поскольку продолжительность фазы «диагностического окна» при декретированных гемотрансмиссивных инфекциях, варьируя в широких пределах, не превышает 6 месяцев, эритроциты, предназначенные для карантинизации, должны храниться
80
Вопросы экспериментальной, производственной и клинической ...
в течение этого срока, после чего необходимо провести повторное обследование донора.
Единственным способом долгосрочного хранения эритроцитов является криоконсервирование. Размороженная и отмытая эритроцитная масса имеет, кроме того, преимущества перед другими эритроцитными средами, так как в процессе криоконсервирования разрушается большая часть лейкоцитов и тромбоцитов, а при отмывании от криопротектора удаляются белки плазмы, антитела, микроагрегаты, строма разрушенных клеток, продукты их метаболизма и цитокины, накопившиеся в среде до замораживания. Удаление белков плазмы очень важно для профилактики аллергических реакций, а элиминация анти-HLA и гранулоцитспецифичных аллоантител - для профилактики острого повреждения легких, ассоциированного с трансфузией, и синдрома аллогенной крови.
В то же время взвесь размороженных и отмытых красных клеток способна вызвать аллоиммунизацию и другие иммунологические осложнения за счет не только оставшихся в среде лейкоцитов (от 1х108 до 1х107 в дозе), но и фрагментов разрушенных белых клеток, несущих антигенную информацию.
Кроме того, лейкоциты, присутствующие в размороженных отмытых эритроцитах, могут стать вектором переноса герпесвирусов (цитомегаловируса, Эпштейна-Барр, герпеса человека 6 и 8 типов), Т-лимфотропного вируса человека и других патогенов.
В свете вышеизложенного, только сочетание лейкофильтрации, обеспечивающей снижение количества остаточных лейкоцитов ниже иммуногенного уровня, а лейкоцитассоциирован-ных вирусов ниже инфекционного уровня, и карантинизации в течение 6 месяцев даст возможность получить максимально на данный момент (пока не разработаны эффективные методы вирусинактивации красных клеток крови) безопасную эритроцит-ную среду для особой категории пациентов.
Нами предложена технология лейкофильтрации с последующим криоконсервированием эритроцитов при умеренно низких и ультранизких температурах в целях их карантинизации. Доказана эффективность лейкодеплеции (<0,5х106/доза, что на 1-2 порядка ниже, чем в размороженных отмытых эритроцитах без предварительной лейкофильтрации) и сохранность морфофункциональных свойств лейкофильтрованных эритроцитов после их размораживания и отмывания через 6 месяцев хранения при -38±2°С (содержание свободного гемоглобина в готовой к трансфузии взвеси составляет в среднем 0,68±0,194 г/л; показатель ге-матокрита - 35,7±3,03%; содержание АТФ - 4,37±0,109 мкМ/г Нв,
Метод заготовки и создания запасов лейкофильтрованных...
81
морфологический индекс - 95,7±0,77, содержание осмотически неустойчивых эритроцитов - 1,2±0,09%, что в положительную сторону отличается от соответствующих показателей нефильтрованных размороженных отмытых красных клеток). Помещение эритроцитов в плазму IV группы сопровождалось формированием монетных столбиков, содержащих десятки клеток. Не отмечено нарастания содержания свободного гемоглобина в плазме IV группы после ее соединения с отмытыми эритроцитами (1:1) и хранения при 4°С в течение суток. Фактический выход конечного продукта (взвесь эритроцитов в растворе 8в) составил 271,6±5,99 мл, содержание гемоглобина в полученной дозе - 40,7±0,87 г. Не отмечено достоверных различий между показателями сохранности декриоконсервированных эритроцитов, профильтрованных через отечественное устройство «Лейкосеп» и лейкофильтры Imugard III RC (Terumo). Показана клиническая эффективность их трансфузий (средний прирост гемоглобина у реципиента через сутки после трансфузии двух доз среды составил 19,3±2,73 г/л). Возможность одновременной карантинизации эритроцитов и плазмы, заготовленных от одного донора при использовании устройства «Лейкосеп» (что обеспечивает один вызов его для обследования), является существенным организационным и экономическим преимуществом.
В случае замораживания при ультранизких (-196°С) температурах лейкофильтрованные (через фильтры «Лейкосеп» и Pall BFK) эритроциты ни по одному из показателей не уступали нефильтрованным, а при использовании фильтра Pall BFK статистически значимо превосходили их по содержанию гемоглобина в дозе и более низкому уровню гемолиза в конечной взвеси (p<0,05).
Утверждена и издана новая медицинская технология «Технология заготовки и создания запасов лейкофильтрованных ка-рантинизированных эритроцитов для обеспечения иммунологической и инфекционной безопасности их трансфузий».
Лейкофильтрованные карантинизированные эритроциты представляются оптимальным средством гемокомпонентной терапии для онкогематологических и других больных, получающих множественные трансфузии, в педиатрической и акушерской практике, у пациентов с отягощенным аллергологическим и иммунологическим анамнезом.
Создание широкой сети банков лейкофильтрованных ка-рантинизированных эритроцитов наряду с лейкофильтрацией и карантинизацией плазмы открывает перспективу резкого снижения риска отрицательного воздействия гемотрансфузий на организм реципиента.
