CC BY
8
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИтом X, № 4, 2014
Результаты. В настоящее время в РосНИИГТ совместно с НТЦ «Мепотекс» и ЗАО «НПП «Ин-тероко» проводится работа по созданию новых образцов устройств для лейкоредукции цельной крови, в том числе с фильтрующими материалами на основе нановолокон. При апробации 6 опытных образцов количество остаточных лейкоцитов в эритроцитной массе составило в среднем 2,65±0,58хЮ6/л (0,66хЮ6 в условной дозе 250 мл) при подсчете в камере Nageotte и 2,93±0,59хЮ6/л(0,73хЮ6в усл. дозе) - при подсчете с помощью аппарата АОАМ-^ВС. Важный результат получен при оценке эффективности устройства «Лейкосеп»® (в виде малого макетного образца фильтра) при проведении пилотного исследования (п=3) с кровью больных с активной ЦМВ и ВЭБ инфекцией (наличие генома вируса в клетках крови). Методом полиме-разной цепной реакции установлено, что исходная вирусная нагрузка соответствовала <500 ген-экв/мл; после пропускания крови через фильтр
сигнал в ПЦР («real time») - отсутствовал, что позволяет сделать вывод об эффективности лей-кодеплеции, повышающей инфекционную безопасность крови.
Выводы. Внедрение в практику отечественных устройств для удаления лейкоцитов из гемо-компонентов, имеющих стоимость в 4-6 раз ниже зарубежных аналогов, позволит удовлетворить клинические потребности в обедненных лейкоцитами компонентах крови и существенно снизить риск развития посттрансфузионных реакций и осложнений. Метод лейкофильтрации дает возможность уменьшить опасность инфицирования больных лейкоцитассоциированными гемотранс-миссивными инфекциями, особенно у пациентов, получающих множественные гемотрансфузии. Сравнение двух методов оценки остаточного содержания лейкоцитов в фильтрованной эритроцитной массе (в камере Nageotte и с помощью аппарата ADAM-rWBC) не выявило статистически значимых различий в результатах.
Кудинова Е. В., Гуменоеа В. Н., Суслина О. В., Кузнецов С. И., Киселева Е. В.
ГБУЗ «Самарская областная клиническая станция переливания крови», Самара
ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНОГО ГЕПАТА В (ИВУ) В СЛУЖБЕ КРОВИ САМАРСКОЙ ОБЛАСТИ
Введение. Вирусный гепатит В (НВУ-инфекция) является распространенным и социально-значимым заболеванием во всем мире. В Российской Федерации ежегодно регистрируется высокий уровень впервые выявленных хронических форм заболевания вирусными гепатитами (далее — ХВГ), которые характеризуются возможным неблагоприятным исходом заболевания, включая развитие цирроза и (или) первичной гепатоцеллюлярной карциномы. По данным ВОЗ 57 % случаев цирроза печени и 78 % случаев первичного рака печени обусловлены инфицированием вирусами гепатитов В или С. Основными путями передачи вируса гепатита В являются: парентеральный — переливание крови, инвазивные исследования, гемодиализ; нарушение целостности кожи и слизистых оболочек (татуировки, акупунктура, пользование общими зубными щетками); половой, вертикальный, перинатальный. В службе крови на сегодняшний день в соответствии с действующими приказами обязательным скрининговым маркером является определение HBsAg (поверхностный антиген
вируса гепатита В) в сывотке крови доноров. Ранее считалось, что основным критерием хронической НВУ- инфекции является циркуляция HBsAg в сыворотке крови больных более 6 месяцев, но благодаря молекулярно-биологическим методам было установлено, что у больных в отсутствие НВв-антигена в сыворотке крови может выявляться ДНК вируса, что свидетельствует о латентном варианте НВУ- инфекции. Известно, что потенциальным источником заражения реципиентов крови может служить «HBsAg-мутантная» форма инфекции (при которой в крови циркулирует структурно-измененный поверхностный антиген). Эти штаммы НВУ способны обуславливать ложноотрицательный результат при скрининге донорской крови на НВв-антиген.
Цель. Проанализировать результаты исследований, полученных при скрининге крови доноров на ДНК НВУ методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) .
Материалы и методы. В службе крови Самарской области, начиная с 2009 года, доноры крови, тромбоцитафереза и эритроцитафереза
«(ИНФЕКЦИИ И ИНФЕКЦИОННАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ В ГЕМАТОЛОГИИ И СЛУЖБЕ КРОВИ»
Санкт-Петербург 13-14 ноября 2014 г.
обследуются методом ПЦР на выявление ДНК НВУ. Все образцы крови доноров исследовались методом иммуноферментного анализа (ИФА) на следующий день после взятия пробы. Образцы плазмы с отрицательными результатами ИФА тестов объединялись в минипулы и тестировались методом тестирования нуклеиновых кислот на наличие ДНК НВУ. Первое молеку-лярно-биологическое исследование проводилось в единичной постановке каждого минипула. При получении положительного результата образцы тестировались индивидуально с сохранением условий первой постановки, включая реагенты. При получении позитивного результата данный образец донорской крови проверялся повторно и при воспроизведении результата учитывался положительным.
Результаты. За период с 2009 по сентябрь 2014 года методом ПЦР было исследовано 122 834 серонегативных образца крови доноров. При этом в 12 случаях (0,01 %) было зарегистрировано нарастание флуоресцентного сигнала, свидетельствующее о наличии в образце ДНК НВУ.
Выводы. 1. Определение HBsAg в службе крови как единственного обязательного маркера наличия вируса гепатита В не гарантирует полного исключения случаев передачи вируса реципиенту.
2. Использование молекулярно-биологиче-ских методов исследования одновременно с обязательными серологическими методами повышает вирусную безопасность донорской крови.
Куклина Т. Г., ВолковА. В., Григорьева Л. Г.
Санкт-Петербургское ГКУЗ «Городская станция переливания крови», Санкт-Петербург
ОПЫТ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ АВТОМАТИЗИРОВАННОЙ СИСТЕМЫ ГЕМОКУЛЬТИВИРОВАНИЯ «ВБ ВАСТЕС ЕХ» ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ГЕМОТРАНСФУЗИОННЫХ СРЕД В СЛУЖБЕ КРОВИ
Введение. Задачи контроля стерильности крови консервированной и её компонентов традиционно решаются с применением классического культурального микробиологического метода. Очевидным недостатком метода является трудоёмкость и длительность получения результатов, что заставляет обращаться к использованию современных автоматических технологий.
Цель. Обобщение опыта использования автоматизированной системы для контроля бактериальной стерильности крови и ее компонентов.
Материалы и методы. Культивирование заготовленной крови и гемокомпонентов с использованием автоматизированной системы ге-мокультивирования «ВО ВАСТЕС БХ».
Результаты. Автоматизированная система для гемокультивирования с наиболее эффективным выделением микроорганизмов и минимальным временем до детекции «ВО ВАСТЕС БХ» используется в работе бактериологической группы Отдела Контроля Качества Городской станции переливания крови для бактериологического контроля гемотрансфузионных сред с ноября 2011 года. На первом этапе освоения прибора проведена валидация методики испытания на стерильность консервированной крови
и её компонентов (тромбоцитного концентрата, эритроцитной взвеси) с использованием питательных сред BD ВАСТЕС PLUS «AerobicYF», «AnaerobicYF», «PEDS PLUS\F»; музейных и клинических штаммов микроорганизмов (St. aureus, E.coli, CI. novyi 198). Результаты валида-ции подтвердили достоверность и воспроизводимость полученных результатов в условиях лаборатории. Пробы для тестирования на стерильность отбирались в пробоотборники и контейнеры в количестве не менее 20 мл. Посев образцов проводился спустя не менее 24 часов после донации в асептических условиях при помощи стерильных двусторонних игл «VACUETTE» и держателей игл многоразового использования «TERUMO» на питательные среды Aerobic\F, Anaerobic\F для выделения аэробных и анаэробных бактерий и дрожжевых грибов. Инкубирование флаконов осуществлялось в течение 5 суток. Результаты исследований регистрировались в отчётах «Unloaded Negative Vials» (извлеченные отрицательные флаконы) и «Unloaded Positive Vials» (извлеченные положительные флаконы). Идентификация обнаруженных культур проводилась по культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам. Мазки,
