CC BY
13
«(ИНФЕКЦИИ И ИНФЕКЦИОННАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ В ГЕМАТОЛОГИИ И СЛУЖБЕ КРОВИ»
Санкт-Петербург 13-14 ноября 2014 г.
обследуются методом ПЦР на выявление ДНК НВУ. Все образцы крови доноров исследовались методом иммуноферментного анализа (ИФА) на следующий день после взятия пробы. Образцы плазмы с отрицательными результатами ИФА тестов объединялись в минипулы и тестировались методом тестирования нуклеиновых кислот на наличие ДНК НВУ. Первое молеку-лярно-биологическое исследование проводилось в единичной постановке каждого минипула. При получении положительного результата образцы тестировались индивидуально с сохранением условий первой постановки, включая реагенты. При получении позитивного результата данный образец донорской крови проверялся повторно и при воспроизведении результата учитывался положительным.
Результаты. За период с 2009 по сентябрь 2014 года методом ПЦР было исследовано 122 834 серонегативных образца крови доноров. При этом в 12 случаях (0,01 %) было зарегистрировано нарастание флуоресцентного сигнала, свидетельствующее о наличии в образце ДНК НВУ.
Выводы. 1. Определение HBsAg в службе крови как единственного обязательного маркера наличия вируса гепатита В не гарантирует полного исключения случаев передачи вируса реципиенту.
2. Использование молекулярно-биологиче-ских методов исследования одновременно с обязательными серологическими методами повышает вирусную безопасность донорской крови.
Куклина Т. Г., ВолковА. В., Григорьева Л. Г.
Санкт-Петербургское ГКУЗ «Городская станция переливания крови», Санкт-Петербург
ОПЫТ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ АВТОМАТИЗИРОВАННОЙ СИСТЕМЫ ГЕМОКУЛЬТИВИРОВАНИЯ «ВБ ВАСТЕС ЕХ» ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ГЕМОТРАНСФУЗИОННЫХ СРЕД В СЛУЖБЕ КРОВИ
Введение. Задачи контроля стерильности крови консервированной и её компонентов традиционно решаются с применением классического культурального микробиологического метода. Очевидным недостатком метода является трудоёмкость и длительность получения результатов, что заставляет обращаться к использованию современных автоматических технологий.
Цель. Обобщение опыта использования автоматизированной системы для контроля бактериальной стерильности крови и ее компонентов.
Материалы и методы. Культивирование заготовленной крови и гемокомпонентов с использованием автоматизированной системы ге-мокультивирования «ВО ВАСТЕС БХ».
Результаты. Автоматизированная система для гемокультивирования с наиболее эффективным выделением микроорганизмов и минимальным временем до детекции «ВО ВАСТЕС БХ» используется в работе бактериологической группы Отдела Контроля Качества Городской станции переливания крови для бактериологического контроля гемотрансфузионных сред с ноября 2011 года. На первом этапе освоения прибора проведена валидация методики испытания на стерильность консервированной крови
и её компонентов (тромбоцитного концентрата, эритроцитной взвеси) с использованием питательных сред BD ВАСТЕС PLUS «AerobicYF», «AnaerobicYF», «PEDS PLUS\F»; музейных и клинических штаммов микроорганизмов (St. aureus, E.coli, CI. novyi 198). Результаты валида-ции подтвердили достоверность и воспроизводимость полученных результатов в условиях лаборатории. Пробы для тестирования на стерильность отбирались в пробоотборники и контейнеры в количестве не менее 20 мл. Посев образцов проводился спустя не менее 24 часов после донации в асептических условиях при помощи стерильных двусторонних игл «VACUETTE» и держателей игл многоразового использования «TERUMO» на питательные среды Aerobic\F, Anaerobic\F для выделения аэробных и анаэробных бактерий и дрожжевых грибов. Инкубирование флаконов осуществлялось в течение 5 суток. Результаты исследований регистрировались в отчётах «Unloaded Negative Vials» (извлеченные отрицательные флаконы) и «Unloaded Positive Vials» (извлеченные положительные флаконы). Идентификация обнаруженных культур проводилась по культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам. Мазки,
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИтом X, № 4, 2014
окрашенные по Граму, изучались под микроскопом «Leica DM1000», позволяющим создать электронный архив мазков. На этапе освоения прибора в 2012 году проводилось параллельное тестирование образцов на стерильность двумя методами: классическим культуральным с использованием тиогликолевой среды и автоматическим. Всего исследовано 578 проб. Получены идентичные результаты. За период 2012-2013 и 8 месяцев 2014 года проведено 7995 исследований бактериальной безопасности 4983 образ-
цов крови консервированной и её компонентов. Ложноположительных результатов не отмечено. Не соответствовал требованиям стерильности 1 образец (0,02%) компонента эритроцитная взвесь с ресуспендирующим раствором, фильтрованная.
Выводы. Применение автоматизированного микробиологического метода культивирования позволяет существенно повысить бактериальную безопасность гемокомпонентов.
ЛюбимоваА. В., Зубаровская Л. С., Шаляпина Н. А.,Аеерьяноеа М. Ю.
ГБОУВПО «Северо-западный государственный медицинскийуниверситет имени И. И.Мечникова», Санкт-Петербург Научно-Исследователъский институт детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, ФГБОУВПО «Первый Санкт-Петербургский государственныймедицинскийуниверситет им. акад. И. П. Павлова», Санкт-Петербург
ПРЕВАЛЕНТНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ПЕЙЗАЖА В ОТДЕЛЕНИИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ КОСТНОГО МОЗГА
Введение. На данный момент инфекционные осложнения являются одной из ведущих проблем у больных злокачественными болезнями крови. Спектр микроорганизмов, которые вызывают инфекционный процесс у таких больных, многообразен, и представлен грам-положительной, грамотрицательной флорой и грибами, Совершенствование оказания медицинской помощи таким пациентам приводит к постоянному изменению микробиологического пейзажа
Цель. Изучить микробиологический пейзаж микроорганизмов, выделенных из клинического материала пациентов отделения трансплантации костного мозга в современный период.
Материалы и методы. 1) Исследование точечной превалентности: трижды один раз в месяц через равные промежутки времени проводились бактериологические исследования смывов со слизистой оболочки ротовой полости, кожи, посевы мочи, кала пациентов, а также смывов с объектов внешней среды. 2) Проспективное наблюдение: один раз в семь дней, начиная с первого дня госпитализации пациента в отделение, проводились бактериологические исследования смывов со слизистой оболочки ротовой полости, кожи и прямой кишки. 3) Молеку-лярно-генетическое типирование выделенных штаммов. Верификация устойчивости энтерококков к ванкомицину осуществлялась амплификацией кассет ванкомицин-резистентности уапА и уапВ согласно методике, предложенной
Dutka-Malen S. et al. (Dutka-Malen S, Evers S, CourvalinP, 1995).
Результаты. При превалентном исследовании было выявлено, что наиболее распространенными грамотрицательны-
ми микроорганизмами являлись Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, также высевались Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella oxytoca. Частота обнаружения Klebsiella pneumonia среди пациентов варьировала от 0 до 30 на 100 пациентов, а в смывах с объектов внешней среды от 0 до 15,8 на 100 смывов, при этом на некоторых этапах исследования доля штаммов резистентных к имипенему достигала 25 % от всех выделенных клебсиелл. Превалентность Enterobacter cloacae среди пациентов составила от 0 до 27 на 100 пациентов, в смывах с объектов внешней среды — от 0 до 5,7 на 100 смывов, доля штаммов резистентных к имипенему достигала 33 %. Среди грамположительных микроорганизмов доминировали энтерококки. Ванкомицинрези-стентность была обнаружена только у E.faecium (VRE), превалентность которых среди пациентов варьировала от 0 до 40 на 100 пациентов, частота обнаружения VRE в смывах с внешней среды колебалась от 1,8 до 3,2 на 100 смывов, доля VRE составила от 8,3 до 38,4%.
Выводы. Таким образом, в отделениях трансплантации костного мозга в современный период наиболее значимыми микроорганизмами являются Klebsiella pneumoniae, Enterobacter
