CC BY
55
ные молекулой 1-Е ГКГС II. Впоследствии формируется преимущественно, по-видимому, моноспецифичный ответ, который может поддерживаться как Мф, так и В-клет-ками, представляющими данный пептид в ассоциации с молекулой 1-А. Однако В-клетки способны также представлять, эпитоп белка в ассоциации с молекулой 1-Е. Возможно, что пептид, представляемый молекулой 1-Е, является субдоминантным.
Влияние иммунных комплексов на макропиноцитоз красителя дендритными клетками
Соколов Д.И.Кузнецова С.А.1, Чураков Г.А.1, Денисенко А.Д.2, Фрейдлин И.С.'
Институт экспериментальной медицины РА МН 'отдел иммунологии, :отдел биохимии
Дендритные клетки (ДК) относятся к антигенпрезен-тирующим клеткам. В процессе дифференцировки незрелые ДК поглощают антиген при помощи неспецифического или зависимого от маннозных рецепторов мак-ропиноцитоза. Кроме того, ДК активно связывают иммунные комплексы (ИК) благодаря выраженной экспрессии Рс-рецепторов. Поглощение антигена или связывание ИК является сигналом к дифференцировке. При этом ДК утрачивают способность к пиноцитозу параллельно с изменением секреторной активности, созревающие ДК мигрируют в лимфоидные органы, где уже зрелые ДК презентируют антиген Т-клеткам. Поскольку интенсивность макропиноцитоза ДК отражает, в известной мере, степень их дифференцировки, ее оценка может быть использована при изучении влияния на ДК предполагаемых индукторов дифференцировки.
Целью настоящего исследования было изучить влияние ИК на интенсивность макропиноцитоза ДК. Для этого использовали метод оценки макропиноцитоза ДК по количеству поглощенного красителя мста-нитросинего тет-разолия. В работе использовали перевиваемую линию 025с\1 мышиных дендритных клеток, имеющих характеристики незрелых ДК. Для оценки взаимодействия макрофагов и ДК использовали перевиваемую линию Р3880( мышиных макрофагоподобных клеток. В супернатантах клеток Р3880(, инкубированных в присутствии индукторов в течение 18 ч., определяли также уровень ФНО-апь-фа при помощи биологического тестирования.
Стандартный индуктор дифференцировки и активации моноцитов\макрофагов форболмиристатацетат в концентрации 10нг\мл усиливал макропиноцитоз ДК. Циркулирующие ИК, выделенные из плазмы больных ревматоидным артритом, в концентрации 50 мкг\мл ингибировали макропиноцитоз ДК, что согласуется с литературными данными. Эти же ИК, а также ИК, содержащие в качестве антигена нативные липопротеины низкой плотности (нЛПНП-ИК) в концентрации 50 мкг\мл по белку нЛПНП, индуцировали продукцию ФНО-альфа клетками линии Р3880,, что также согласуется с литературными данными.
Супернатанты клеток Р3880,, инкубированных в присутствии тех же ИК и нЛПНП-ИК, усиливали макропиноцитоз несмотря на присутствие ФНО-альфа, по литературным данным, угнетающего макропиноцитоз ДК. Ни нЛПНП, ни супернатанты клеток Р3880,, инкубированных в присутствии нЛПНП, не влияли на макропиноцитоз ДК.
Супернатанты клеток Р3880,, инкубированных с ИК, в отличие от самих ИК, не угнетали, а стимулировали макропиноцитоз ДК. Такое разнонаправленное действие можно, предположительно, объяснить тем, что ИК индуцируют накопление в супернатантах компонентов, стимулирующих макропиноцитоз, выступающих в качестве антагонистов присутствующего в этих же супернатантах ФНО-альфа. Таким компонентом может быть ИЛ-10, так как ранее было показано, что ЦИК могут индуцировать выработку этого цитокина моноцитами\макрофагами, и ИЛ-10 способен усиливать макропиноцитоз незрелых ДК.
Таким образом, полученные нами данные согласуются с литературными данными об угнетающем влиянии иммунных комплексов на макропиноцитоз ДК. Вопрос о том, какими секреторными продуктами макрофагов или ДК опосредован этот эффект, нуждается в дальнейшем изучении.
Работа поддержана фантом РФФИ№97-04-48889.
Кинетика воспаления и иммунного ответа
Фрейдлин И.С.
НИИ экспериментальной медицины РАМН
Ответ иммунной системы на контакт с патогенным микроорганизмом характеризуется этапностью: после раннего воспалительного ответа следует развитие событий специфического иммунного ответа. Уже на этапе раннего воспалительного ответа господствует строго определенная кинетика вовлечения отдельных молекул и клеток. Экспрессия одних адгезионных молекул на эндотелиальных клетках сменяется экспрессией других, чем определяется закономерная кинетика клеток в очаге воспаления: на смену грануло-цитам приходят мононуклеары. Кинетика воспалительных клеток контролируется также изменением спектра хемоки-нов: хемокилы класса СХС дополняются хемокииами класса СС. Параллельно разворачиваегся цитокиновая кинетика: контакте объектом фагоцитоза служит для макрофагов сигналом индукции синтеза и секреции провоспалительных ци-токинов: 1Ы,ТНРа, 1Ь-6,1Ь~8,1Ы2, однако через сутки среди секреторных продуктов макрофагов появляются, а затем начинают преобладать противовоспалительные цитокины: 1Ь-1ЯА, 1Ь-10, ТОР(3. На смену раннему воспалительному ответу через 4 суток приходит специфический иммунный ответ, который запускается теми же макрофагами или дендритными клетками, выступающими в роли антигенпрезен-тирующих клеток (АПК). Кинетика взаимодействия АПК с Т-хелперами характеризуется переключением через 2-3 суток с костимуняции, опосредованной взаимодействием поверхностных молекул В7 и С028, на супрессию, опосредо-
ванную взаимодействием В7 с аналогом CD28 — молекулой CTLA-4. Кинетика последующего антительного ответа определяется участием во взаимодействии Т-хелперов с В-лимфоцитами другой пары костимупирующих молекул: CD40L-CD40, необходимых для переключения синтеза иммуноглобулинов с IgM на IgG. Другие варианты переключения контролируются цитокинами:: TGF0—с IgM на IgA, IL-4—с IgM на IgE. В эффекторнойфазе иммунного ответа на кинетику его течения существенно влияют образующиеся иммунные комплексы, которые, связываясь с Fcy-рецеп-торами макрофагов, индуцируют преимущественную продукцию IL-10, супрессирующего опосредованный ТН1 ответ. При развитии клеточно-опосредованного отпета активированные гамма-интерфероном макрофаги продуцируют антимикробные нитроксидные радикалы, которые вносят свой вклад в негативную регуляцию опосредованного Thl ответа. Продукции важнейшего пропоспалительного и регуляторного цитокина IL-12 сопутствует продукция его физиологического антагониста, биологически неактивного гомодимера IL-12 (р40)2, который синтезируется дольше и в количестве, превосходящем количество IL-12. Этим также обеспечивается негативная регуляция клеточно-опосредованного ответа. Преобладание Th2 в кинетике иммунного ответа может быть связано и с более высокой чувствительностью Thl к апоптозу. Кинетику воспалительного и иммунного ответа так или иначе искажают патогенные микроорганизмы, особенно внутриклеточно паразитирующие. Нарушения кинетики иммунного ответа лежат в основе иммунопатологических процессов, что необходимо учитывать при иммунологической лабораторной диагностике. Конечной целью иммунокоррекции является восстановление нормальной иммунокинетики.
Работа поддержана грантом РФФИ №97-04-48889.
Внутривенное введение пептида, представляющего доминантный Т-клеточный эпитоп основного белка аллергена ASP F1, приводит к отмене ответа на полный аллерген
Фролова Э.Г., Коцарева О.Д., Свирщевская Е.В.
Институт биоорганической химии
им. М. М.Шемякина и Ю. В. Овчинникова РАН
Москва, Россия
Аллергия на грибок Aspergillus fumigatus (Asp f) приводит к ряду заболеваний, включая такие тяжелые, как аллергический бронхолегочный аспергиллез (АБЛА) и астма. В состав комплекса Asp f входит более 15 белков. На начальных этапах гиперчувствительности клетки больных распознают только часть белков, главным образом низкомолекулярных. Так, у больных с легкой формой аллергии выявляются антитела к риботоксину Asp fl (18,5 кДа) и пероксисомному белку Asp f3 (18 кДа). При прогрессировании заболевания появляется 'гувствительность к основным белкам аллергена Asp fl, Asp f6, Asp-hsp и, воз-
можно, к другим. Проведение гипосенсибилизации на ранних этапах гиперчувствительности могло бы позволить предотвратить развитие тяжелых форм заболевания. В данной работе изучали в мышиной модели возможность выработки толерантности к полному аллергену, используя гипосенсибилизацию за счет введения неимму-ногенного пептида, соответствующего доминантному эпитопу белка риботоксина Asp fl. Для выявления доминантного эпитопа были синтезированы 4 пептида Asp f 1, отобранных на основе компьютерного прогноза и соответствия карманам молекулы I-Ad, которая опосредует представление данного антигена Т-клеткам. Лимфоциты лимфатических узлов мышей BALB/c, иммунизированных неочищенным экстрактом грибка Asp f в дозе 100 мкг/мышь, рестимулировали in vitro в присутствии анти-генпредставляющих клеток и пептидов. Пептид 165-177 стимулировал продукцию интерлейкина-2 (ИЛ-2) и пролиферацию Т-клеток, то есть потенциально может являться доминантным эпитопом для Т-клеток, распознающих Asp fl. Анализ продукции мРНК ИЛ-4 и ИНФ-у показал, что данный пептид является, по-видимому, регуляторным, так как поддерживает продукцию ИНФ-у, но не поддерживает продукцию ИЛ-4. Выбранный пептид вводили внутривенно в дозе 50 мкг/мышь до иммунизации экстрактом либо этим пептидом, введеном п/к с адыовантом. Однократное введение пептида приводило к полной отмене продукции ИЛ-2 in vitro лимфоцитами мышей, иммунизированных пептидом в иммуногенной форме, и к частичному снижению продукции ИЛ-2 после иммунизации экстрактом Asp f. При трехкратном введении пептида за 5,3 и 2 дня до иммунизации ответ на полный экстракт снижался значительно. Это показывает, что использование пептидов, соответствующих доминантным эпитопам белков, вызывающих первичный иммунный ответ, может значительно снизить иммунный ответ на полный аллерген, тем самым повышая порог чувствительности к аллергену и снижая риск прогрессирования заболевания.
Модельная система для изучения роли углеводов поверхности клеток-мишеней на цитотоксическую активность естественных киллеров человека
Хирова Е.В., Коваленко Е.И., Саблина М. А.,
Хайдуков С.В., Бовин Н.В.
ИБХнм. М.М.Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН Москва, Россия
В настоящее время известно, что существующие на поверхности клеток-мишеней олигосахариды могут выполнять роль как позитивного, так и негативного сигнала для естественных киллеров (NK-клеток) человека, усиливая или ослабляя их литическую активность. Однако механизмы углевод-зависимого распознавания все еще остаются неизвестными.
