CC BY
15
лыс пострадиационные иммуносупрессии. В этих условиях назначение иммуностимулятора бемитила, являющегося производным меркалтобензимидазола, двухнедельным курсом в суточной дозе 0,25-0,5 грамм нормализует продукцию оксида азота, а также значительно улучшает показатели иммунного статуса организма.
Таким образом, результаты проведенных исследований выявили существенные изменения в регуляторной системе "Ь-аргинин - азота оксид” под действием имму-номодулируюших препаратов, что следует учитывать при проведении иммунокорригирующей терапии.
Неспецифический иммуногенный шок у мышей и его отмена
Семенова И.В., Кузнецов С.И.
Медицинская академия последипломного образования Санкт-Петербург, Россия
Ранее мы сообщали об открытом нами лабораторном феномене “переноса смерти”. Последний заключается в гибели большинства мышей, получивших еппеноциты от доноров, подвергавшихся воздействиям экстремальных факторов. Патологический процесс, наблюдаемый при этом, мы назвали неспецифическим иммуногенным шоком (НИШ), так как, подобно любому шоку, он имеет стадии возбуждения и торможения, вызывается иммуноцитами, но не требует специфической сенсибилизации. Симптомами НИШ служат: взъерошивание шерсти, гипсрсаливация, отеки дыхательных путей, катаракты. НИШ, как правило, сопровождается неврологической симптоматикой: чаще это судороги, реже—нарушение координации движений, в отдельных случаях—параличи и парезы конечностей, атетоз.
В настоящей работе удалось показать возможность предотвращения феномена “переноса смерти” с полным предупреждением всей его симптоматики. Для этого требовалось предварительное (за 1 мин.) введение животным значительно меньшей дозы тех же донорских спленоцитов, которые в контроле вызывали шок и гибель реципиентов. Результаты были идентичны на самцах и самках как в синген-ной системе (с использованием мышей СВА и С17В16),так и в аллогенной (у беспородных, а также в группе, где донорами служили мыши С„В16, а реципиентами - СВА). В качестве контроля использовалось введение среды 199 перед инъекцией спленоцитов от стрессированных животных, которое не отменяло возникновение указанного феномена. Нами показано также, что защитная доза спленоцитов зависит от степени выраженности симптоматики и вероятности гибели животных в соответствующей контрольной группе.
Таким образом, показана возможность предотвращения лабораторного феномена “переноса смерти”. Немаловажен тот факт, что приобретение устойчивости к летальной дозе спленоцитов от стрессированных мышей происходит очень быстро, практически мгновенно. Хочется надеяться, что выявление способа предупреждения неспецифического иммуногенного шока облегчит дальнейшее уточнение природы этого явления.
Формирование иммунного ответа на белок аллергена ASP F2 начинается с подавления !-Ed рестришрованного представления антигена
Свирщевская Е.В.
Институт биооргапической химии
им. М.М.Шемякина и Ю.В.Овчинникова РАН
Москва, Россия
Формирование иммунного ответа на белковые антигены начинается с распознавания Т-хелперами комплекса пептид-молекула ГКГС II класса. Показано, что ответ на белки чаще всего рестриктирован преимущественно одной молекулой ГКГС, чаще — молекулой I-А. В данной работе изучали динамику формирования иммунного ответа на рекомбинантный белок аллергена AspJ2. Мышей линии В ALB/c иммунизировали 50 мкг/мышь AspJ2, п.к. в подушечки задних лап. Лимфатические узлы, дренирующие место инъекции, забирали через 6, 12 и 25 дней. В качестве антигенпредставляющих клеток (АПК) использовали макрофаги (Мф) либо В-лимфоциты, для чего Мф выделяли адгезией на пластике, а В-лимфоциты получали из неадгезивной фракции спленоцитов пеннингом на антителах к IgG мыши. Для анализа участия молекул ГКГС II класса использовали антитела к l-Ad либо I-Ad/l-Ed. Распознавание антигена Т-хелперами определяли in vitro по продукции интерлейкина-2 (ИЛ-2). На 6 день после иммунизации в условиях in vitro можно было наблюдать ответ T-клеток только на антиген, представленный Мф, но не В-клетками. Добавление антител к I-А приводило к значительному усилению продукции ИЛ-2 Т-клетками в ответ на представление антигена Мф и к появлению ответа на антиген, представленный В-клетками. Добавление антител к обеим молекулам ГКГС II класса полностью блокировало продукцию ИЛ-2. Через 12 дней после иммунизации наблюдался трехфазный, по-видимому, полиспецифичный, ответТ-клеток in vitro на антиген, представленный как Мф, так и В-клетками. Антитела к молекуле 1-А полностью отменяли ответ на пептиды, представленные Мф. При ответе на В-клетки, нагруженные антигеном в низкой и средней концетрации (< 10 мкг/мл), ответ также подаплялся а) ггите-лами к I-А. При высокой концентрации антигена (12-50 мкг/ мл) В-клетки были способны представлять антиген в ассоциации с молекулой 1-Е. Далее, к 25 дню, при ответе на Мф формировался затухающий и, по-видимому, моноспеци-фичный иммунный ответ, рестриктированный по молекуле I-А. Ответ выражался in vitro в виде колоколообразной кривой с одним пиком в районе 5 мкг/мл AspJ2. При представлении антигена В-клетками выявлялось два пика ответа. Первый пик наблюдался при концентрации 5 мкг/мл и был I-А рестриктирован, а второй пик наблюдался при высокой концентрации (более 25 мкг/мл) и был рестриктирован по молекуле 1-Е, так как наблюдался и при добавление антител к I-А. Таким образом, формирование иммунного ответа на Asp t2 начинается с подавления ответа Т-клеток, распознающих пептиды антигена, представлен-
ные молекулой 1-Е ГКГС II. Впоследствии формируется преимущественно, по-видимому, моноспецифичный ответ, который может поддерживаться как Мф, так и В-клет-ками, представляющими данный пептид в ассоциации с молекулой 1-А. Однако В-кпетки способны также представлять, эпитоп белка в ассоциации с молекулой 1-Е. Возможно, что пептид, представляемый молекулой 1-Е, является субдоминантным.
Влияние иммунных комплексов на макропиноцитоз красителя дендритными клетками
Соколов Д.И.Кузнецова С.А.1, Чураков Г.А.1, Денисенко А.Д.2, Фрейдлин И.С.'
Институт экспериментальной медицины РА МИ 'отдел иммунологии, :отдел биохимии
Дендритные клетки (ДК) относятся к антигенпрезен-тирующим клеткам. В процессе дифференцировки незрелые ДК поглощают антиген при помощи неспецифического или зависимого от маннозных рецепторов мак-ропиноцитоза. Кроме того, ДК активно связывают иммунные комплексы (ИК) благодаря выраженной экспрессии Рс-рецепторов. Поглощение антигена или связывание ИК является сигналом к дифференцировке. При этом ДК утрачивают способность к пиноцитозу параллельно с изменением секреторной активности, созревающие ДК мигрируют в лимфоидные органы, где уже зрелые ДК презентируют антиген Т-клеткам. Поскольку интенсивность макропиноцитоза ДК отражает, в известной мере, степень их дифференцировки, ее оценка может быть использована при изучении влияния на ДК предполагаемых индукторов дифференцировки.
Целью настоящего исследования было изучить влияние ИК на интенсивность макропиноцитоза ДК. Для этого использовали метод оценки макропиноцитоза ДК по количеству поглощенного красителя мста-нитросинего тет-разолия. В работе использовали перевиваемую линию 025с\1 мышиных дендритных клеток, имеющих характеристики незрелых ДК. Для оценки взаимодействия макрофагов и ДК использовали перевиваемую линию Р3880( мышиных макрофагоподобных клеток. В супернатантах клеток Р3880(, инкубированных в присутствии индукторов в течение 18 ч., определяли также уровень ФНО-аль-фа при помощи биологического тестирования.
Стандартный индуктор дифференцировки и активации моноцитов\макрофагов форболмиристатацетат в концентрации 10нг\мл усиливал макропиноцитоз ДК. Циркулирующие ИК, выделенные из плазмы больных ревматоидным артритом, в концентрации 50 мкг\мл ингибировали макропиноцитоз ДК, что согласуется с литературными данными. Эти же ИК, а также ИК, содержащие в качестве антигена нативные липопротеины низкой плотности (нЛПНП-ИК) в концентрации 50 мкг\мл по белку нЛПНП, индуцировали продукцию ФНО-альфа клетками линии Р3880,, что также согласуется с литературными данными.
Супернатанты клеток Р3880,, инкубированных в присутствии тех же ИК и нЛПНП-ИК, усиливали макропиноцитоз несмотря на присутствие ФНО-альфа, по литературным данным, угнетающего макропиноцитоз ДК. Ни нЛПНП, ни супернатанты клеток Р3880,, инкубированных в присутствии нЛПНП, не влияли на макропиноцитоз ДК.
Супернатанты клеток Р3880,, инкубированных с ИК, в отличие от самих ИК, не угнетали, а стимулировали макропиноцитоз ДК. Такое разнонаправленное действие можно, предположительно, объяснить тем, что ИК индуцируют накопление в супернатантах компонентов, стимулирующих макропиноцитоз, выступающих в качестве антагонистов присутствующего в этих же супернатантах ФНО-альфа. Таким компонентом может быть ИЛ-10, так как ранее было показано, что ЦИК могут индуцировать выработку этого цитокина моноцитами\макрофагами, и ИЛ-10 способен усиливать макропиноцитоз незрелых ДК.
Таким образом, полученные нами данные согласуются с литературными данными об угнетающем влиянии иммунных комплексов на макропиноцитоз ДК. Вопрос о том, какими секреторными продуктами макрофагов или ДК опосредован этот эффект, нуждается в дальнейшем изучении.
Работа поддержана фантом РФФИ№97-04-48889.
Кинетика воспаления и иммунного ответа
Фрейдлин И.С.
НИИ экспериментальной медицины РАМН
Ответ иммунной системы на контакт с патогенным микроорганизмом характеризуется этапностью: после раннего воспалительного ответа следует развитие событий специфического иммунного ответа. Уже на этапе раннего воспалительного ответа господствует строго определенная кинетика вовлечения отдельных молекул и клеток. Экспрессия одних адгезионных молекул на эндотелиальных клетках сменяется экспрессией других, чем определяется закономерная кинетика клеток в очаге воспаления: на смену грануло-цитам приходят мононуклеары. Кинетика воспалительных клеток контролируется также изменением спектра хемоки-нов: хемокины класса СХС дополняются хемокииами класса СС. Параллельно разворачиваегся цитокиновая кинетика: контакте объектом фагоцитоза служит для макрофагов сигналом индукции синтеза и секреции провоспалительных ци-токинов: 1Ы,ТНРа, 1Ь-6,1Ь~8,1Ы2, однако через сутки среди секреторных продуктов макрофагов появляются, а затем начинают преобладать противовоспалительные цитокины: 1Ь-1ЯА, 1Ь-10, ТСР(3. На смену раннему воспалительному ответу через 4 суток приходит специфический иммунный ответ, который запускается теми же макрофагами или дендритными клетками, выступающими в роли антигенпрезен-тирующих клеток (АПК). Кинетика взаимодействия АПК с Т-хелперами характеризуется переключением через 2-3 суток с костимуняции, опосредованной взаимодействием поверхностных молекул В7 и С028, на супрессию, опосредо-
