CC BY
26
УДК 636.52/.58.082.454
КАЧЕСТВЕННЫЕ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ
СПЕРМЫ ПЕТУХОВ ПРИ ВВЕДЕНИИ В РАЦИОН СОРБЕНТА
О. В. ГАВИЛЕЙ
Государственная опытная станция птицеводства НААН, с. Борки, Змиевской р-н, Харьковская обл., Украина, 63421
(Поступила в редакцию 19.02.2017)
Резюме. В статье рассматривается влияние препарата «Микосорб» фирмы Alltech при Т-2 токсикозе, вызванного культурой гриба Fusarium sporotrichioides, на качественные и количественные изменения спермы петухов: объем эякулята, концентрация сперматозоидов, подвижность, переживаемость, количество целых сперматозоидов. Изучено влияние препарата «Микосорб» на оплодотворенность яиц, количество «кровяных колец», количество живых зародышей после 10 суток инкубации.
Установлено положительное влияние препарата «Микосорб» в количестве 1 кг/т на показатели качества спермы петухов.
Ключевые слова: культурa гриба Fusarium sporotrichioides, Т-2 токсин, петухи, сперма, оплодотворенность.
Summary. The article examines the impact of the preparation «Mycosorb» by Alltech at T-2 toxicosis caused by the culture of the fungus Fusarium sporotrichioides on the qualitative and quantitative changes in the sperm of the cocks: ejaculate volume, sperm concentration, mobility, survival, the number of whole spermatozoa. It was studied the influence of «Mycosorb» on the fertilization of eggs, the number of «blood rings», the number of live embryos after 10 days of incubation.
The positive effect of the preparation «Mycosorb» in the amount of 1 kg per ton of feed on the quality of the sperm of cocks was established.
Key words: fungus culture Fusarium sporotrichioides, T-2 toxin, cocks, sperm, fertility.
Введение. Воспроизводство птицы является необходимым условием поддержания численности ее поголовья и обеспечения соответствующего уровня производства сельскохозяйственной продукции. Важным фактором успешного проведения работ, связанных с использованием половых клеток как в сельскохозяйственной практике, так и в научных целях, является высокое качество используемого материала. Биологическая полноценность спермы обеспечивает ее способность осуществлять оплодотворение и дать начало новому жизнеспособному потомству [8].
Анализ источников. Загрязнение кормов Т-2 токсином в значительной степени является санитарно-гигиенической проблемой для стран с умеренным климатом. При потреблении корма, контаминированного Т-2 токсином, у птицы возникает состояние токсикоза, что проявляется ухудшением роста, снижением производительных качеств и воспроизводи-
тельной функции [6, 12, 16]. При этом ухудшение яйценоскости пропорционально концентрации токсина в рационе [15]. Так, при скармливании Т-2 токсина в концентрации 1мг/кг корма отмечали уменьшение воспроизводительной способности птицы на 12,5 %, при 5 мг/кг и 10 мг/кг этот показатель уменьшался на 68 % и 78,9 % соответственно. Ухудшение качества скорлупы яиц отмечали при потреблении более чем 20 мг/кг Т-2 токсина [13, 14]. При скармливании курам токсина в количестве 10 мг/кг масса яиц уменьшается на 3,4-11,6 %, их оплодотворенность - на 8,3-34,8 %, выводимость на 3,6-13,6%, а также увеличивается эмбриональная смертность на 3,6-13,6 %, количество слабых цыплят на 12-20 %. Последействие Т-2 токсина наблюдается по крайней мере два недели после изъятия токсичного корма из рациона кур [7]. Контроль качества и безопасность корма - одна из основных задач для птицеводческих хозяйств и комбикормовых заводов.
Первостепенное значение для сохранения здоровья птицы и жизнеспособности молодняка имеет применение в составе корма проверенного адсорбента, который способен минимизировать отрицательный эффект ми-котоксинов. Одним из таких препаратов является «Микосорб» на основе модифицированных глюкоманнанов. Он эффективно адсорбирует мико-токсины в желудочно-кишечном тракте сельскохозяйственных животных и птиц [9]. Результаты эксперимента, полученные А. Н. Котиком и другими [1], свидетельствуют об эффективном влиянии препарата «Микосорб» фирмы Alltech (1кг/т корма) на сохранность и воспроизводительные качества птицы. При добавлении к основному рациону несушки сорбента «Микосорб» наблюдалось улучшение качества скорлупы яиц, а эмбриональная смертность в этой группе была ниже по сравнению с группой, которая получала корм, контаминированный Т-2 токсином.
Цель работы - выяснить степень влияния профилактического действия препарата «Микосорб» фирмы Alltech на качественные и количественные изменения спермы петухов при загрязнении корма культурой гриба Fusarium sporotrichioides.
Материал и методика исследований. Для изучения показателей качества спермы петухов было сформировано четыре группы (контрольная и три опытные) по 5 петухов в каждой, аналогичные по возрасту и живой массе. Исследования проводились на петухах породы «Полтавская глинистая», которых содержали в клеточных батареях. Во время эксперимента петухам контрольной группы скармливали стандартный комбикормом [4]. В рацион петухов второй и третьей опытных групп вносили культуру гриба Fusarium sporotrichioides путем подмешивания в корм в концентрации 4 мг/кг (табл. 1). В рацион петухов первой и третьей групп в корм добавляли «Микосорб» фирмы Alltech (1кг/т корма).
Т а б л и ц а 1. Схема опыта
№ Группы Основной рацион (ОР) Т-2 токсин, мг/кг «Микосорб», кг/т
1 Контроль + - -
2 Опыт + - 1
3 Опыт + 4 -
4 Опыт + 4 1
Во время проведения исследований сперму от петухов контрольной и опытных групп получали два раза в неделю методом абдоминального массажа. В полученных образцах изучали объем эякулята (мл), концентрацию (млрд/мл), подвижность (по 10-балльной шкале), переживаемость (в часах), количество целых сперматозоидов (%). Оценку спермы проводили на каждом этапе исследований. Объем эякулята определяли мерным спермоприемником, концентрацию - с помощью счетной камеры Горяева и фотоэлектроколориметра «Спикол 210» по стандартным методикам [3]. Подвижность сперматозоидов оценивали в висящей капле на термостолике три температуре 38-40 0С путем микроскопии (х400). В качестве разбавителя спермы использовали фосфатный буфер рН 7.0 [5]. Для определения переживаемости сперматозоидов использовали температурный режим хранения 2-5 0С. Продолжительность переживаемости сперматозоидов устанавливали по стандартной методике [2]. С помощью флюориметра определяли морфологическую целостность сперматозоидов. В качестве флуорохрома использовали этидиум бромид, который слабо люминесци-рует при температуре 38-40 0С в растворе, но при попадании в клетку, связывается с молекулами ДНК, увеличивая интенсивность люминесценции. Как известно, этидиум бромид медленно диффундирует через натив-ные мембраны клеток и легко проникает в поврежденные сперматозоиды. Люминесценцию образцов измеряли в области 610 нм, согласно методике [8].
Результаты исследований и их обсуждение. В результате проведенных исследований у опытной птицы в течение исследуемого периода наблюдалось снижение потребления корма, что в свою очередь приводило к уменьшению веса петухов, наблюдалось появление некротического стоматита.
Спустя неделю после исключения из рациона петухов корма, контами-нированного культурой гриба Fusarium sporotrichioides, восстанавливался вес петухов, потребление корма приближалось к показателям контрольной группы. В опытный период не наблюдалось снижения объема эякулята во всех опытных группах (табл. 2).
Т а б л и ц а 2. Влияние «Микосорба» при Т-2 токсикозе петухов на объем эякулята, мл
№ Группы Периоды эксперимента
пред-опытный опытный после-опытный
Недели 1-2 3 4 5 6 7 8 9
1 Контрольная 0,50±0,05 0,50± 0,08 0,50± 0,07 0,50± 0,13 0,60± 0,14 0,40± 0,06 0,50± 0,05 0,50± 0,13
2 - 0,60±0,13 0,60± 0,14 0,50± 0,17 0,50± 0,28 0,40± 0,23 0,40± 0,24 0,60± 0,23 0,60± 0,42
3 Т-2 токсин, 4 мг/кг 0,60±0,05 0,60± 0,06 0,50± 0,04 0,60± 0,53 0,50± 0,13 0,60± 0,15 0,50± 0,15 0,50± 0,12
4 Т-2 токсин, 4 мг/кг 0,50±0,03 0,70± 0,05 0,60± 0,04 0,60± 0,04 0,50± 0,07 0,50± 0,08 0,50± 0,08 0,50± 0,08
Подвижность сперматозоидов ухудшалась уже на третью неделю опытного периода (табл. 3). Так, во второй опытной группе, получавшей корм, контаминированный культурой гриба Fusarium sp., этот показатель значительно уменьшался уже на третьей опытной неделе и был на 12,8 % меньше, чем в контроле (P <0,05) и на 8 % меньше, чем в 3 группе (к контамини-рованному корму был добавлен препарат «Микосорб») (P<0,05). Через неделю после изъятия контаминированного корма из рациона петухов этот показатель во всех опытных группах достигал контрольного значения.
Т а б л и ц а 3. Влияние «Микосорба» при Т-2 токсикозе петухов на подвижность сперматозоидов, балы
Периоды эксперимента
№ Группы Пред-опытный Опытный После-опытный
Недели 1-2 3 4 5 6 7 8 9
1 Контрольная 7,7± 0,1 7,7± 0,2 7,7± 0,2 7,8± 0,3 8,0± 0,0 8,0± 0,0 7,5± 0,3 7,3± 0,3
2 - 7,5± 0,2 7,9± 0,1 7,6± 0,2 7,5± 0,3 7,0± 0,0** 7,8± 0,3 7,5± 0,3 7,0± 0,0
3 Т-2 токсин, 4 мг/кг 7,5± 0,1 7,7± 0,1 7,3± 0,2 6,8± 0,2* 6,8± 0,3 7,3± 0,3* 7,3± 0,6 7,8± 0,3
4 Т-2 токсин, 4 мг/кг 7,6± 0,1 7,9± 0,1 7,9± 0,1 7,4± 0,2 7,7± 0,2 7,8± 0,2 7,4± 0,3 7,6± 0,3
Примечания: 1. Тут и дальше разница между данными является достоверной: * - при Р <0,05; ** - при Р <0,01; *** - при Р <0,001. 2. Данные, которые сравниваются, находятся в пределах одного столбца.
Концентрация сперматозоидов при воздействии препарата «Мико-сорб» при Т-2 токсикозе петухов, в течение предопытного периода находились в пределах 1,2-1,8 млрд/мл (табл. 4). В течение второй опытной недели концентрация сперматозоидов в третьей опытной группе (корм, контаминированный Т-2 токсином) уменьшилась на 20,3 % по сравнению с контролем. В течение следующих двух недель этот показатель был на 17,6 % и 23,3 % меньше контроля соответственно. Концентрация сперматозоидов четвертой группы (контаминированный корм с добавлением сорбента) в течение всего опыта значительно не отличалась от контрольного значения, а иногда даже и превосходила его. Следует отметить, что в течение третьей недели после начала скармливания петухам препарата «Микосорб», концентрация сперматозоидов четвертой группы превышала значение контрольной группы на 35,3 %. Через три недели послеопытного периода этот показатель во второй и четвертой группах достигал контрольного значения, в то время как в третьей группе, которая не получала сорбент, восстанавливался только на четвертую неделю после удаления контаминированного корма.
Т а б л и ц а 4. Влияние «Микосорба» при Т-2 токсикозе петухов на концентрацию сперматозоидов, млн/мл
№ Группы Периоды эксперимента
пред опытный опытный после-опытный
Недели 1-2 3 4 5 6 7 8 9
1 контрольная 1,541± 0,195 1,661± 0,384 1,297± 0,358 1,632± 0,368 2,324± 0,766 1,307± 0,249 2,177± 0,324 1,913± 0,493
2 - 1,266±0,446 1,256± 0,284 1,462± 0,704 1,089± 0,391 1,373± 0,548 0,719± 0,324 1,596± 0,359 2,568± 0,535
3 Т-2 токсин, 4 мг/кг 1,709±0,254 1,854± 0,405 1,362± 0,252 1,344± 0,311 1,782± 0,668 2,195± 0,742 1,211± 0,499 1,346± 0,295
4 Т-2 токсин, 4 мг/кг 1,877±0,214 2,827± 0,450 2,011± 0,210 2,524± 0,503 1,989± 0,433 2,008± 0,527 2,399± 0,890 2,060± 0,342
В течение опыта не наблюдалось значительного уменьшения количества сперматозоидов с поврежденными мембранами головок. Следует отметить, что этот показатель почти не отличался от контроля во всех опытных группах, а в третьей группе иногда даже превышал его (табл. 5).
Т а б л и ц а 5. Влияние «Микосорба» при Т-2 токсикозе петухов на количество сперматозоидов с поврежденными мембранами головок в эякуляте
№ Группы Периоды эксперимента
пред-опытный опытный после-опытный
Недели 1-2 3 4 5 6 7 8 9
1 Контрольная 88,5±0,8 87,0± 2,4 85,8± 1,3 87,0± 4,4 93,3± 0,8 90,8± 1,1 90,3± 1,0 89,5± 1,5
2 - 85,8±1,6 86,8± 1,7 88,3± 1,0* 88,0± 0,7 91,0± 1,4 85,8± 6,1* 89,5± 2,4 90,5± 0,7
3 Т-2 токсин, 4 мг/кг 88,6±0,9 86,3± 1,9 87,4± 1,8 89,0± 2,0 90,2± 1,8 83,5± 6,4 90,5± 1,2 88,3± 2,1
4 Т-2 токсин, 4 мг/кг 88,3±1,0 92,9± 1,0* 90,0± 0,4** 88,3± 0,7 90,3± 0,8* 88,6± 0,7* 90,6± 1,0 89,6± 2,8
Абсолютный показатель переживаемости сперматозоидов при воздействии препарата «Микосорб» при экспериментальном Т-2 токсикозе петухов в течение предопытного периода во всех опытных группах достигал контрольного значения (табл. 6). Однако уже в течение второй недели опытного периода в третьей группе этот показатель ухудшился на 4,1 % по сравнению с контролем. В течение следующих двух недель он уменьшился на 24,3 % (Р <0,05) и на 24,5 % (Р <0,05) по сравнению с контролем. Следует отметить, что этот показатель в четвертой группе в течение опыта почти не отличался от контроля, только на третью неделю опытного периода он увеличился на 11,9 % (Р <0,05). Через две недели после изъятия контаминированного корма из рациона петухов данный показатель во всех группах практически не отличался.
Т а б л и ц а 6. Влияние «Микосорба» при Т-2 токсикозе петухов на абсолютный показатель переживаемости сперматозоидов
Периоды эксперимента
№ Группы пред-опытный опытный после-опытный
Недели 1-2 3 4 5 6 7 8 9
1 Контроль 379,5± 363,4± 418,3± 444,0± 496,0± 366,0± 354,0± 320,0±
ная 36,7 49,4 35,1 21,0 19,6 28,6 36,0 51,1
2 388,0± 397,5± 436,5± 356,0± 450,0± 393,0± 354,0± 348,0±
29,9 37,2 26,4 34,3 48,5 57,5 36,0 67,9
3 Т-2 токсин, 4 мг/кг 365,0± 27,3 359,3± 22,9 401,3± 24,5 336,0± 31,3* 374,0± 35,2* 300,0± 50,9 339,0± 48,1 315,0± 42,5
4 Т-2 токсин, 4 мг/кг 343,7± 23,0 374,6± 19,9 469,7± 27,3 390,9± 9,3* 480,0± 29,5 369,6± 21,4 352,8± 27,0 384,0± 23,6
В течение опыта (рис. 1.) оплодотворенность яиц контрольной группы была на 0,36 % больше по сравнению со второй группой, на 2,04 % (основной рацион + «Микосорб») по сравнению с третьей (Р <0,05) (основной рацион + Т-2 токсин) группой, и на 0,81 % - с четвертой (основной рацион + «Микосорб» + Т-2 токсин).
42
/
/ /
1 /
3,88
Контроль
4,24
1 группа
лт
/
2 группа
3 группа
Рис. 1. Количество неоплодотворенных яиц, полученных от кур контрольной и опытных групп
При этом следует отметить, что оплодотворенность яиц в группе, которой в контаминированный корм был добавлен препарат «Микосорб», была на 1,23 % больше, чем в группе, получавшей корм контаминированный культурой гриба Fusarium sporotrichioides (третья группа).
Таким образом, потребление петухами корма, контаминированного культурой гриба Fusarium sporotrichioides, привело к ухудшению оплодотворяющей способности сперматозоидов, что вызвало увеличение неоплодотворенных яиц в третий опытной группе.
Наивысшее количество «кровяных колец» при инкубации яиц наблюдалось в третьей опытной группе. Этот показатель был выше, чем во второй группе на 2,53 %, и на 2,47 %, чем в контроле. Однако в четвертой группе, получавшей «Микосорб», количество «кровяных колец» было значительно ниже, как по сравнению с контролем (Р<0,01), так и по сравнению с другими опытными группами (Р<0,001), и составило 2,34 % (рис. 2).
Одной из причин появления «кровяных колец» при инкубации является нарушение генома эмбрионов, которое могло возникнуть при развитии половых клеток петухов после получения птицей корма, контаминиро-ванного Т-2 токсином.
Р и с. 2. Количество «кровяных колец» при инкубации яиц контрольной и опытных групп
Во время проведения миража на 11 сутки инкубации были отобраны яйца с живыми зародышами, их количество составляло в контрольной группе 91,38 %, во второй группе - 88,98 %, в третьей группе - 85,53 %, в четвертой - 92,97 % (рис. 3).
Р и с. 3. Количество живых зародышей после 10 суток инкубации
Итак, наибольшее количество живых зародышей наблюдалось в четвертой опытной группе, что свидетельствует о положительном влиянии препарата «Микосорб».
Заключение. Результаты исследований позволяют утверждать, что пре-
парат «Микосорб» во всех исследованиях влияет положительно на показатели качества спермы производителей, а в некоторых случаях оказывает стимулирующее действие. Следует отметить, что в группе, которая вместе с контаминированным кормом получала сорбент «Микосорб» оплодотворен-ность яиц была на 1,23 % больше по сравнению с группой, которой скармливали контаминированный корм без добавления профилактического препарата. Следует отметить, что наибольшее количество живых зародышей на 11 сутки инкубации наблюдалась также в этой группе.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ефектившсть препарату «Мжосорб» (Alltech) в умовах перюдично! контамшаци кор]шв мжотоксинами / А. М. Котик [ та in.] // Ефективне птах1вництво та тваринництво. -2004. - № 1. - С. 46-49.
2. Искусственное осеменение птицы / А. Д. Курбатов [и др.]. - М.: Агропромиздат, 1987. -С. 26-28.
3. Пудов, В. Я. Методические рекомендации по технологии содержания и режимам использования петухов яичных пород селекционного и родительского стад в клеточных батареях при искусственном осеменении / В. Я. Пудов; ИП УААН. - Харьков, 1990. - 28 с.
4. Рекомендацп з нормування годiвлi сшьськогосподарсько! птищ / 1нститут птахiв-ництва УААН. - Бiрки, 2005. - 101 с.
5. Родин, И. И. Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных / И. И. Родин. - М., 1976. - С. 26.
6. Сахацький, I. М. Т-2 токсикоз курей / I. М. Сахацький // Ветеринарна медицина Укра1ни. - 2000. - № 6. - С. 36-37.
7. Сахацький, I. М. Вплив фузарютоксишв на показники iмуniтету курей, 1х репродук-тивну здатшсть та яюсть потомства: автореф. дис. на здобуття наук. ступеня канд. ветери-нарних наук: спец. 16. 00. 04 / I. М. Сахацький; 1нститут експериментально! i кшшчно! вете-ринарно! медицини УААН. - Х., 2001. - 19 с.
8. Сахацкий, Н. И. Экспресс-метод оценки оплодотворяющей способности заморожено-оттаянной спермы сельскохозяйственной птицы / Н. И. Сахацкий, А. В. Терещенко, А. Б. Артеменко // С.-х. биология. - 1987. - № 12. - С. 77-80.
9. Эффективность адсорбции микотоксинов / Р. Ахмадышин [и др.] // Комбикорма. -2006. - № 4. - С. 64-65.
10. Янович, Д. Застосування сучасних аналгтичних метсдав контролю за вмютом мжо-токсишв в кормах, продуктах тваринного походження та харчовш сировиш / Д. Янович // Ефективш корми та гсдавля. - 2008. - № 2.
11. Agag, B. I. Mycotoxins in foods and feeds 5-Trichothecenes A-T-2 Toxin / B. I. Agag // Ass. Univ. Bull. Environ. Res. - 2005. - Vol. 8. - № 2. - P. 641-645.
12. Effect of T-2 toxin on productive performance and health of laying hens / M. S. Chi, C. [et al.] // Poultry Sci. - 1977. - Vol. 56. - P. 628-637.
13. Egg Production, Shell Thickness, and Other Phisiological Parameters of Laying Hens Affected by T-2 toxin / R. D. Wyatt [et al.] // Applied Microbiology. - 1975. - Vol. 29. - P. 641-645.
14. Pier, A. C. The implication of mycotoxins in animal disease / A. C. Pier, J. L. Richard, S. J. Cysewski // J. Am.Vet. Med .Assoc. - 1980. - Vol. 176. - P. 719-724.
15. Tobias, S. Effect of T-2 toxin on egg production and hatchability in laying hens / S. Tobias, J. Rajis, A. Vanyi //Acta veterenaria hungarica. - 1992. - Vol. 40. - Р. 47-54.
16.Wyatt, R. D. Altered feathering of chicks caused by T-2 toxin / R. D. Wyatt, P. B. Hamilton, H. R. Burmeister // Poultry Sci. - 1975. - Vol. 54. - P. 1042-1045.
