CC BY
17
УДК: 636.52/.58.082.453:619:615.9.
Дротенко О.В., астрант, Терещенко О.В., к. б. н. ©
1нститут птах1еництеа УААН Укра!на, Харювська обл., Змпвський р-н., с. Бiрки
ВПЛИВ КУЛЬТУРИ ГРИБА FUSARIUM SPOROTRICHIOIDES В КОРМ1 НА ПОКАЗНИКИ ЯКОСТ1 СПЕРМИ П1ВН1В
При згодоеуеанш теням корму контамтоеаного культурою гриба Fusarium sporotrichioides е концентращях 2, 4, 8, 16 мг/кг, е1дм1чалася пояеа ознак некротичного стоматиту, пог1ршення спожиеання корму, зменшення жиеог маси тете. nid час спожиеання тенями корму, контамтоеаного культурою гриба Fusarium sporotrichioides е концентращях 2 мг/кг, еiдмiчалося зменшення концентрацп та рухлиеостi сперматозоШе. При концентращях 4 i 8 мг/кг - зменшення об 'ему еякуляту, концентрацп та погiршення рухлиеостi сперматозоШе. При концентрацп 16 мг/кг - зменшення еякуляту, концентрацп, еiдсотка неушкоджених голiеок сперматозоШе та погiршення гх рухлиеостi.
Ключоei слова: культура гриба Fusarium sporotrichioides теш, сперма.
Вступ. Вщтворення птищ е необхщною передумовою тдтримання чисельност 1'х поголiв'я та забезпечення вщповщного рiвня виробництва сшьськогосподарсько! продукци. Важливою умовою устшного проведення роб^ пов'язаних з використанням статевих кл^ин, як в сшьськогосподарськш практищ, так i в наукових цшях, е надшна оцiнка якостi матерiалу, що використовуеться.
Якiсть статевих клiтин залежить вiд багатьох факторiв: умов годiвлi, утримання, стану здоров'я птицi, тривалост свiтлового дня, iнтенсивностi освiтлення, температурного режиму та шших факторiв [8]. Одним з таких факторiв е наявшсть мiкотоксинiв в кормах.
В лiтературi iснують противоречивi свiдчення стосовно впливу токсишв на якiсть статевих кл^ин. У зрiлиx пiвнiв породи бший леггорн зменшуеться об'ем еякуляту, маса ам'яниюв, сперматокрiту та рiвня тестостерону при афлатоксикозi [9, 10]. Також спостер^аеться зниження концентрацп' тестостерону в плазмi кровi молодих твшв породи леггорн [7]. У плщниюв м'ясних порiд та пiвнiв бройлерiв афлатоксин негативно впливае на масу тша, але при цьому характеристика сперми не змшюеться [12, 6]. Афлатоксин негативно впливае на життездатшсть сперми твшв, рухливють сперматозо1дов [11]. При цьому зменшуеться вмют загального азоту та альбумiнiв, проте об'ем еякуляту та концентращя сперматозо1дов не змшюеться.
На Новосибiрськiй бройлернiй птахофабрищ у пiвнiв батькiвського стада вiдмiчалося погiршення репродуктивних здiбностей при мжотоксикоз^ викликаного мiкотоксинами трixотеценового ряду (Т-2 - 10; зеараленон - 110; ДОН - 0,35 мкг/кг ), що сприяло попршенню статево! активност та раннiй
© Дротенко О.В., Терещенко О.В., 2008
75
вибраковщ по цьому признаку. При дослщженш ам'яниюв твшв pi3Horo BiKy вiдмiчалося порушення сперматогенезу, починаючи з 274 доби. Мехашзм порушення пов'язаний з гiперплазieю сперматогенного пласта на 274 добу, надлишковою пролiферативною активнiстю i порушенням дифференцшовки сперматоцитiв i сперматозовдв, що призводять до виснаження i гшоплази ам'яниюв в бiльш пiзнiй перiод. Ц змiни можуть бути викликанi гормональним дисбалансом токсично! етюлогп [1].
Таким чином, метою нашо! роботи було визначити змши якостi сперми твшв при експериментальному Т-2 токсикозi спричиненого культурою гриба Fusarium sporotrichioides, а також дослщити здатнiсть пiвнiв вщновлювати якiсть сперми пiсля мiкотоксикозу.
Матер1али i методи. Дослiд проведено в лаборатори репродукци птицi 1нституту птахiвництва УААН та вiварil iнституту на твнях породи плiмутрок вiком 434 дш, якi утримувались в кл^кових батареях. Було сформовано п'ять груп по п'ять твшв в кожнш (контрольну i чотири дослiдних) твшв аналопв за вiком та живою вагою. Протягом порiвняльного (1-2 тижш) i заключного (7-10 тиждень) перiодiв пiвням усiх груп згодовували стандартний комбшормом. Протягом дослiдного перiоду (3-6 тижш) в стандартний комбшорм для твшв дослщних груп було внесено Т-2 токсин в формi культури гриба Fusarium sporotrichioides в концентращях: 2; 4; 8; 16 мг/кг, яку вводили шляхам пщмшування в корм.
Таблиця 1
Схема дослвду (3-6 тижш)
№ групи Стандартний Культура гриба Fusarium
комбжорм sporotrichioides, мг/кг
Контроль + -
1група + 2
2 група + 4
3 група + 8
4 група + 16
Отримання сперми тд час проведення дослщжень у твшв контрольно! i дослщних груп проводили два рази на тиждень методом абдомшального масажу. В отриманих зразках вивчали: об'ем еякуляту (мл), концентращю (млрд/мл), рухливють (по 10-бальнш шкалi), живучiсть (в годинах), кшьюсть цiлих сперматозовдв (%). Ощнку сперми проводили на кожному еташ дослiджень.
Об'ем еякуляту визначали мiрним спермоприймачем. Концентрацiю - за допомогою лiчильноl камери Горяева та фотоелектроколориметру "Сшкол 210" за стандартними методиками [3].
Рухливiсть сперматозоидов оцiнювали у висячiй краплi на термостолику три температурi 38-400С шляхом мжроскопи (400 х). В якост розчиннику сперми використовували фосфатний буфер рН 7.0 До рухливих кл^ин вiдносили статевi клiтини з прямолшшно-поступальним рухом, до мало рухливих - з круговим рухом, або як не рухались[4].
76
Для визначення переживаемост сперматозовдв використовували температурний режим збереження 2-50С. Подовжешсть переживаемостi сперматозо1дов встановлювали за стандартною методикою [2].
За допомогою флуорометра визначали морфологiчну цЫсшсть сперматозо1дов. В якостi флуорохрома використовували етвдум бромiд, який слабо люмшсцуе при температурi 38-400С в розчиш, але коли вiн потрапляе в кл^ину то зв'язуеться з молекулами ДНК збшьшуючи iнтенсивнiсть люмшесценци. Як вщомо, етiдiум бромiд повiльно дифундуе через нативнi мембрани клiтин i легко проникае в пошкодженi сперматозощи. Люмiнесценцiю зразкiв вимiрювали в област 610 нм, згiдно методики [5].
Результати дослщжень. У пiвнiв дослiдних груп протягом дослiдного перiоду вiдмiчалося погiршення споживання корму, що спричиняло зменшення ваги пiвнiв, погiршення 1х фiзiологiчного стану, появу некротичного стоматиту. Через тиждень пiсля вилучення з ращону пiвнiв корму контамiнованого культурою гриба Fusarium sporotrichioides вiдновилася вага швшв, споживання корму пiвнями до показниюв контрольно! групи.
З попршенням фiзiологiчного стану пiвнiв через три тижш вiд початку згодовування твням корму контамiнованого культурою гриба Fusarium sporotrichioides в другш, третiй i четвертiй дослiдних групах зменшувався об'ем еякуляту на 33%, 30% i 43% (Р<0,05) вiд об'ему еякуляту в порiвняльному перiодi. Кожного наступного дослiдного тижня цей показник попршувався на 50% (Р<0,01), 67% (Р<0,001) i 33% у другiй дослщнш групi, на 60%, 40% (Р<0,05) i 30% в третiй грут, в четвертiй на 43% (Р<0,05), 43% (Р<0,05) i 14%. На четвертий тиждень заключного перiоду цей показник в уЫх дослiдних групах майже досягав значень, що були отримаш тд час порiвняльного перюду.
Таблиця 2
Вплив культури гриба Fusarium sporotrichioides в кормп на об'см
еякуляту
№ групи порiвня Дослiдний перiод Заключний перiод
льний (3-6 тиждень) (7-10 тиждень)
перiод 1 2 3 4 5 6 7 8
Контроль 0
,7± Г) 0 ,8± ,8± ,7± ,8± ,8± ,7± ,7± ,7±
,1 ,1 ,1 ,1 ,1 ,1 ,1 ,1 ,1
1група 1
(2 мг/кг) ,1± ,2± ,1± ,1± ,9± ,9± ,0±
0 ,0± ,1±
,1 ,1 ,1 ,1 ,1 ,1* ,1
2 група 0
(4 мг/кг) ,6± 0 ,7± ,6± ,6± ,4± ,3± ,2± ,4± ,6±
,1 ,1 ,1 ,1 ,1 1** 5 i *** ,1 ,1
3 група 1
(8 мг/кг) ,0± ,1± ,0± ,9± ,7± ,6± ,6± ,7± ,8±
0
77
4 rpyna (1бмг/кг)
,1
,7± ,1
0 0
,1 ,1 ,2 ,2 ,2 ,1* ,2 ,2
,8± ,8± ,7± ,4± ,4± ,4± ,б± ,7±
,1 ,1 ,1 ,1* ,1* ,1* ,2 ,2
Примтка: *Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001 тут i дaлi
Зменшення oб'емy сyпpoвoджyвaлoсь зменшенням кoнцентpaцiï спеpмaтoзoïдiв в еякyлятi. Цей шгазник пoгipшyвaвся пpoтягoм дoслiднoгo ropio^. Тaк пpoтягoм четвеpтoгo дoслiднoгo тижня в пеpшiй дoслiднiй гpyпi вш стaнoвив нa 30% (Р<0,05) менше в пopiвняннi i3 пopiвняльнiм пеpioдoм, в дpyгiй - нa 25%, в тpетiй - нa 40%, в четвеpтiй нa 2б% (Р<0,05). Ha п'ятий тиждень пiсля вилyчення з paцioнy пiвнiв кoнтaмiнoвaнoгo кopмy кoнцентpaцiя спеpмaтoзoïдiв вiднoвилaся дo кoнтpoльних пoкaзникiв (Тaблиця 3).
Таблиця 3
Вплив культури гриба Fusarium sporotrichioides в корми на концeнтpaцiю сперматозоидов
№ гpyпи пopiвня
Кoнтpoл ь
1 ^yna (2 мг/кг)
льний œp^
,305
0,4
,903 0,3
Дoслiдний пеpioд (3-б тиждень) 2 3
,891 0,4
,303 0,5
,503 0,4
,452 0,5*
,324
0,4
,023
0,3 *
4
,725 0,4
,437 0,2*
5
,582 0,4
,92б 0,3
Зaключний пеpioд (7-10 тиждень) б 7
,714 0,3
,770 0,4
,97б 0,3
,073 0,4
8
,б28 0,7
,815 0,4
2 гpyпa (4 мг/кг) ,141 2 ,240 ± 0,4 ,151 ,49б ,59б ,593 1 ,072 ,042 ,312
0,2* 0,5 0,4 0,4 0,5 ± 0,4 0,7 0,5
3 ^yna (8 мг/кг) ,07б 4 ,855 ± 0,3* ,972 ,792 ,433 ,029 г ' ,312 ,358 ,0б2
0,3 0,4 0,4 0,4* 0,4* ± 0,5 0,8 0,б
4 ^yna (1б ,022 4 ,459 ,500 ,448 ,97 ,941 0 ,278 ,482 ,55б
мг/кг) 0,3 ± 0,4 0,3 0,3 0,3 0,2** ± 0,3 0,9 0,5
Пpoтягoм дoслiднoгo пеpioдy цшсшсть гoлoвoк знaчнo не змiнювaлaся. Пpoте нa пеpший тиждень зaключнoгo ropio^ цей пoкaзник пoгipшився в дpyгiй дoслiднiй гpyпi нa 1%, в ■фетт нa 4%, в четвеpтiй нa 5% вiдпoвiднo no вщтошенню дo пoкaзникiв в пopiвняльнoмy пеpioдi. В кiнцi зaключнoгo пеpioдy цей гокгзник в пеpшiй i четвеpтiй гpyпi стaнoвив нa 3% менше в пopiвняннi з
78
4
±
4
±
контролем, в той час як в другш i третш вiдрiзнявся на 9% i 16% вщповщно (Таблиця 4).
Таблиця 4
Вплив культури гриба Fusarium sporotrichioides в кормп на
№ групи порiвня-
цьшсшсть головок сперматозоlДiв
Дослiдний перiод
Заключний перiод
льний (3-6 тиждень) (7-10 тиждень)
перюд 1 2 3 4 5 6 7 8
Контроль 8
3,7 9,0 6,4 4,1 6,4 2,3 1,6 3,3 7,2
1,1 4,0 1,3 1,6 1,6 2,0 1,6 4,4 5,0
1 група 8
(2 мг/кг) 2,9 -L 8,0 5,0 4,4 6,8 3,8 4,5 5,0 5,0
1,2 3,6 1,2 1,2 1,6 0,8 4,9 4,6 4,8
2 група 7
(4 мг/кг) 8,1 -L 9,8 3,4 0,3 3,3 7,4 4,6 6,7 0,5
3,0 4,0 1,8 5,7 7,4 7,9 7,1 8,2 5,1
3 група 8
(8 мг/кг) 2,4 8,6 6,1 6,9 4,8 8,8 9,3 4,3 5,0
1,7 2,8 0,7* 1,4 1,3 3,8 7,7 9,7 3 2**
4 група 7
(16 мг/кг) 9,2 2,3 2,2 9,7 1,8 4,9 0,8 8,3 5,0
2,0 1,8 2,2 2,2 1,3 5,0 4,1 23,7 5,2
Рухливють сперматозо1дов всiх дослiдних груп попршувалась вже на другий тиждень дослщного перiоду. Вона становила менше на 4%, 9% (Р<0,05), 3% (Р<0,05), 6% (Р<0,01) вiдповiдно по вщношенню до показникiв порiвняльного перiоду. Кожного наступного дослiдного тижня цей показник в першш групi становив на 8% (Р<0,05), 10% (Р<0,05) i 9% менше, в другiй груш на 8% (Р<0,05), 14%, 18% (Р<0,05), в третiй на 10% (Р<0,001), 14% (Р<0,01), 7% (Р<0,05), в четвертiй на 7% (Р<0,01), 6%, 21% (Р<0,001), проте як в контрольнш групi протягом дослщного перюду цей показник майже не змшювався. На четвертий тиждень заключного перiоду цей показник в уЫх дослiдних групах досягав контрольного значення (Таблиця 5).
Таблиця 5
Вплив культури гриба Fusarium sporotrichioides в кормп на рухливiсть сперматозо1щв
№ групи порiвня- Дослiдний перiод Заключний перюд
льний (3-6 тиждень) (7-10 тиждень)
перюд 1 2 3 4 5 6 7 8
Контроль 7
,5± ,6± ,7± ,7± ,4± ,3± ,5± ,2±
0 ,0± ,2 ,3 ,2 ,2 ,2 ,2 ,2 ,2
79
1 група 7
(2 мг/кг) ,7± ,9± ,4± ,1± ,9± ,8± ,3± ,3±
0 ,0±
,2 7 ,1 ,3 ,1* ,1* ,2 ,3 ,3
2 група
(4 мг/кг) ,6± ,9± ,9± ± ,5± ,2± ,2± ,3± ,3±
0
,2 ,1 ,2* ,2* ,5 ,4* ,4 ,4 ,3
3 група
(8 мг/кг) 7 ,6± ,3±
,3± ,5± ,1± ,8± ,8± ,8±
0 ,2 ,3 ,0±
,2 ,3 ,1* ,2* ,3* ,3
** *
4 група
(16 мг/кг) 7 ,8± ,7± ,7± ,2±
,2± ,6± ,8± ,8± ,3±
0 ,3 ,3 ,3 ,2
,2 ,3 * * ,3 ** ** ,3 ,3
Не дивлячись на попршення рухливост сперматозоидов Абсолютний показник переживаемост (АПП) сперматозоïдiв протягом дослщного перiоду майже не вiдмiчався на вiдмiну вiд результатiв, якi було отримано пщ час заключного перюду. Першого тиждня заключного перiоду цей показник попршився в другiй, третш та четвертiй дослiдних групах на 1%, 4%, 5% вщповщно по вщношенню до показникiв, якi було отримано пщ час порiвняльного перюду. Через п'ять тижшв пiсля вилучення контамiнованого корму з рацiону твшв АПП в усiх дослiдних групах був майже однаковим (Таблиця 6).
Трихотеценовi мжотоксини до яких вщноситься i Т-2 токсин, як вщомо, здатнi пригнiчувати синтез бiлкiв, який штенсивно пов'язаний зi сперматогенезом, що на нашу думку i стало причиною зменшення об'ему еякуляту пщ час дослiду i збiльшення кшькост недорозвинутих сперматозоïдiв, що в свою чергу негативно вплинуло на концентрацш спермiïв.
№ групи пор1вня льний перюд
Контроль
70,7 17,9
Таблиця 6
Вплив культури гриба Fusarium sporotrichioides в кормп на АПП
сперматозоидов
Дослвдний перюд (3-6 тиждень)
Заключний перюд (7-10 тиждень)
2
±
1 2 3 4 5 6 7 8
18,0 82,8 27,3 30,9 77,2 76,6 82,0 40,5
22,4 28,6 31,9 56,9 31,5 37,9 25,6 38,7
80
1група (2 мг/кг)
2 група (4 мг/кг)
3 група
65,5 28,2
22.5
21.6
±
46.5
35.6
3 14,0
± 25,2 **
2
07,5 43,0
41,0 43,4
35,5
25,1
**
16,5 29,0
78,7 46,6
37,5 60,0
06,3 38,8
50,8 50,1
14.5
20.6
61,6 47,7
51,0 43,6
84.0
44.1
11,0
82.4
09.5 49,7
(8 мг/кг) 47,5 ± 82,0 94,0 54,3 00,0 68,5 40,0 57,0 46,5
11,1 13,3 35,4 48,7 39,0 42,1 31,2 48,1 63,3
4 група 2
(16мг/кг) 85,3 ± 09,6 97,6 31,7 68,5 19,4 59,2 51,0 23,6
21,2 28,0 30,7 37,7 35,0 35,2 22,7 39,7 23,8
Здатшсть спермив пересуватися залежить вщ енерги одержано! в результат ензиматичного розщеплення АТФ, що утворюеться в результат глiколiзу. Оскiльки рухливiсть сперматозо!дов погiршувалась в усiх дослiдних групах, то ми можемо стверджувати про порушення цього процесу пiд час мжотоксикозу.
Висновки.
1. Т-2 токсикоз спричинений культурою гриба Fusarium sporotrichioides негативно впливае на рухливiсть, абсолютний показник переживаемостi, цiлiснiсть сперматозо!дiв, концентращю та об'ем еякуляту.
2. Повне вщновлення показникiв якостi сперми твшв встановлено на п'ятий тиждень тсля вилучення контамiнованого корму з ращону птицi.
2
Л1тература
1. Афонюшкин В.Н. Особенности сочетанного воздействия трихотеценовых микотоксинов ( Т-2 и зеараленона) на репродуктивную систему петухов/ В.Н. Афонюшкин, В.А. Степков и др. // Ефективне шаавництво. - 2007. - №9. - С. 21-23.
2. Искусственное осеменение птицы / А.Д Курбатов, Л.Е. Нарубина, В.В Богомолов и др. - М.: Агропромиздат, 1987. - С.26-28.
3. Пудов В.Я. Методические рекомендации по технологии содержания и режимам использования петухов яичных пород селекционного и родительского стад в клеточных батареях при искусственном осеменении /ИП УААН. - Харьков, 1990. - С. 28.
4. Родин И.И. Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных / И.И. Родин. - М., 1976.- С. 26.
81
5. Сахацкий Н.И., Терещенко А.В., Артеменко А.Б. Экспресс-метод оценки оплодотворяющей способности заморожено-оттаянной спермы сельскохозяйственной птицы / Н.И. Сахацкий, А.В. Терещенко, А.Б. Артеменко // С.-х. биология. - 1987. - №12. - С. 77-80.
6. The individual and combined effects of citrinin and ochratoxin A on renal ultrastructure in layer chicks / T.P Brown, R.O. Manning, O.J. Fletcher et al. Avian Dis. -1986. - Vol. 30. - P. 191-198.
7. Doerr J. A. Relative importance of dietary aflatoxin and feed restriction of reproductive changes associated with aflatoxins in the maturing white leghorn male / J.A Doerr, M.A. Ottinger // Poultry Sci. - 1986. - Vol. 65. - P. 22392245.
8. Marquez B. J. Scanning electron microscope studies of turkey semen / B.J. Marquez, G.X Ogasawara // Poultry Sc. - 1975. - V.54. - P.1139-1143.
9. Sharlin J.S. Decreased reproductive potential and reduced feed consumption in mature white leghorn males fed aflatoxin / J.S.Sharlin, B. Howarth, E.N. Thompson et al. // Poultry Sci. - 1981. - Vol. 60. - P. 2701-2708.
10. Sharlin J.S. Effect of dietary aflatoxin on reproductive performance of mature white leghorn males / J.S. Sharlin, B. Howarth and R.D. Wyatt // Poultry Sci. - 1980. - Vol. 59. - P. 1311-1315.
11. V. de Andres. Action of afflatoxin on the fertility and on the spermatogenesis of the cock. 14 congreso mundal de aviculture / V. de Andres, J. de Andres // 14 Congreso mundal de aviculture. Sec. I-II. - 1970. - P. 215 - 216.
12. Wyatt R.D. The effect of dietary aflatoxin on mature broiler breeder males / R.D. Wyatt, D M. Briggs and P.B. Hamilton // Poultry Sci. - 1973. - Vol. 52. P. 1119-1123.
Summary Drotenko O. V., Tereshchenko O. V. THE EFFECT CULTURE OF FUSARIUM SPOROTRICHIODES FUNGI IN CORN ON THE SPERM QUALITY INDICES
It was observed the appearance of sings of necrotic stomatitis, change for the worse in feed consumption, the decrease of the cock's live weight when feeding cocks by the feed, contaminated with the culture of Fusarium sporotrichioides fungi at the concentration 2, 4. 8, 16 mg/kg. It was noticed that the concentration of spermatozoa in ejaculate and the mobility of spermatozoa reduced under the feeding of cocks by the feed, contaminated with Fusarium sporotrichioides fungi at the concentration 2 mg/kg. The decrease of ejaculate, concentration of spermatozoa and their worse mobility took place when the concentration were 4 and 8 mg/kg. The reduction of ejaculate, concentration, percentage of unhurt spermatozoon heads and worsening of spermatozoa mobility were observed under the concentration 16 mg/kg.
Стаття надшшла до редакцИ 9.04.2008
82
