CC BY
9
acid and ethylacetate in the air. At the final stages of sulfanilamide synthesis the air is contaminated with the dust of the production to a considerable extent. Mechanization of certain manul operations in the course of sifting, grinding and packing of sulfanilamides will decrease their contents in the air of the worker's respiration zone. An investigation of certain physiological indices and that of the health of workers who are in close contact with sulfanilamides dust, detected certain relation between the pathological cases and the prevailing labour conditions.
On the basis of investigation measures for improving the working conditions were elaborated and introduced at certain plants.
УДК 616.981.55-022.38-039:616.3-008.1-092.9
К ПАТОГЕНЕЗУ ПИЩЕВЫХ ОТРАВЛЕНИИ, ВЫЗЫВАЕМЫХ CL. PERFRINGENS ТИПА А
М. М. Гасилина
Кафедра гигиены If Московского медицинского института им. Н. И. Пирогова
Установлено, что CI. perfringens типа А может вызывать у человека легко протекающие пищевые отравления. По данным различных авторов, причиной таких отравлений служат слабогемолитические штаммы типа А, образующие термоустойчивые споры (Parry; Г. И. Сидоренко). Ввиду того что CI. perfringens является микроорганизмом, широко распространенным во внешней среде (В. В. Скворцов и сотрудники; Г. И. Сидоренко; Ю. П. Пивоваров), во многих случаях крайне трудно обычными лабораторными методами в короткий срок доказать его этиологическую роль в возникновении пищевого отравления. Решению этого вопроса может помочь эксперимент на лабораторном животном, чувствительном и энтеральному введению указанного возбудителя.
Однако в литературе нет исчерпывающих данных об экспериментальной модели пищевого отравления, вызываемого CI. perfringens. Имеются лишь отдельные указания на использование какого-либо лабораторного животного при выяснении источников заражения во время такого отравления (Moser) либо констатируются удачные и неудачные попытки вызвать заболевание у различных животных (белых мышей, морских свинок) при введении данного микроорганизма per os (М. К. Винокурова и А. И. Попова).
В нашей работе белые мыши заражались 2 штаммами Cl. perfringens типа А. Штамм А-821, выделенный при пищевом отравлении, имел токсигенность 10 Dim и 2-часовую термоустойчивость спор. Для сравнения был взят музейный штамм А-28 с токсигенностью 200 Dim и часовой термоустойчивостью спор. Оба штамма обладали типичными морфологическими и биохимическими свойствами. Мышам вводили суточную культуру микробов, выращенную на казеиново-грибной среде с добавлением 0,5% глюкозы или на свежепрокипяченном молоке. Патогенный материал вводили животным в 4 модификациях. Одна из них — цельная неконцентрированная бактериальная культура. Количество клеток, отцентрифугированных из 1 мл ее, определяли по стандарту мутности; оно достигало 10 млрд. клеток. Другой патогенный материал представлял собой цельную культуру с концентрацией клеток и уменьшенным (по сравнению с исходным) количеством клеток в 1 мл; третий — отмытые культуры клеток, разведенные на физиологическом растворе; четвертый — чистый токсин.
Токсин получали путем центрифугирования культуры в течение 30 мин. со скоростью 5000 об/мин. Отмытые клетки бактерий получали
после сливания токсина и трехкратного центрифугирования с физиологическим раствором.
Заражали мышей 2 возрастных групп: неполовозрелых весом до 10 г и половозрелых весом 18—20 г. Культуру вводили им в пищевод в количестве 0,5 мл через металлическую иглу с напаянной оливой, а контрольным мышам во всех случаях — чистую среду, на которой выращивали культуру, в количестве 0,5 мл. Кратность введения мышам культур в первых сериях достигала 5—6 раз, эксперименты проводили через день. Однако в первых же сериях установлено, что случаи заболеваний снижаются и становятся единичными после 4—6-го введения, что следует, очевидно, объяснять развитием у мышей иммунитета к изучаемому возбудителю (Н. Н. Глезерова; А. А. Вальдман). Ввиду того что максимальное число заболеваний наблюдалось после 2—3-го заражения культур, мы в дальнейшем проводили их трехкратно, с ежедневным введением культур.
После введения культуры у животных отмечали наличие заболевания и его симптоматику. Но проследить клинические проявления болезни у белых мышей нелегко, поэтому наиболее объективным доказательством ее служит их гибель. Как положительный результат мы регистрировали только те случаи заболевания, которые кончались смертельным исходом. Погибших мышей вскрывали сразу же, с соблюдением правил асептики. Мышей, оставшихся в живых, а также контрольных забивали и вскрывали через 2 суток после последнего заражения. При вскрытии проводили посев внутренних органов (печени, селезенки, толстых и тонких кишок), а также крови из сердца и экссудата из плевральной полости. Выделяли и идентифицировали чистые культуры, согласно инструкции о порядке расследования случаев пищевых отравлений с методикой бактериологических исследований при пищевых отравлениях.
Для выяснения роли количества бактериальных клеток в вводимой цельной культуре мы использовали концентрации клеток С1. perfringens А-28, превышающие исходную в 10 раз и меньше исходной в 10 раз (т. е. 100 млрд. и 1 млрд. клеток в 1 мл). Этими концентрациями было заражено 150 мышей. Гибель мышей, зараженных культурой с исходной концентрацией клеток и с концентрацией, в 10 раз большей, была одинаковой. В группе мышей, зараженных разведенной культурой, гибель отмечалась в 31/г раза реже (¿ = 4,8, Р = 0,001). При заражении мышей отмытыми культурами С1. репппдепз заболевание возникает только при введении больших количеств клеток — около 50 млрд., причем гибель мышей по сравнению с введением цельных культур значительно ниже (соответственно 18,6 и 31,8%). Кроме того, наибольшее количество смертельных исходов при заражении мышей отмытой культурой наблюдалось после 3-го введения ее, тогда как при заражении цельной культурой — после 1—2-го введения ее.
Таким образом, удалось выяснить, что наиболее часто заболевания у мышей воспроизводятся при заражении их цельной культурой С1. рег^тдепв с содержанием клеток около 10 млрд. в 1 мл.
Смертельные исходы в этой группе животных составляют от 20 до 30%. Сравнивая эти данные с результатами заражения мышей отцент-рифугированным токсином С1. perfгingens А-28, мы установили, что заболевание чаще возникает при введении цельной культуры, чем при заражении одним токсином (31% случаев против 11%, ¿ = 2,48, Р = 0,01). Очевидно, отдельные заболевания мышей при введении им токсина следует объяснить тем, что путем центрифугирования токсин не полностью освобождался от клеток С1. регГпг^епв.1 Это подтверждается выделением данного возбудителя из органов мышей, погибших после введения
1 Для большей убедительности целесообразно было бы культуры подвергать фильтрованию, а не центрифугированию. — Ред.
токсина. Полученные данные позволяют считать пищевые отравления, вызываемые С1. регГпп§епз типа А, токсикоинфекцией, а не бактериальной интоксикацией.
На первых этапах эксперимента в качестве подопытных животных мы использовали как половозрелых мышей весом 18 г, так и молодых весом 8—10 г. Сравнивая данные, полученные при заражении 188 мышей, из которых 122 были весом 18—20 г и 66 весом 8—10 г, мы нашли статистически достоверную разницу частоты случаев заболевания и гибели животных: среди взрослых мышей смертельные исходы составили 16%, а среди молодых — 32% (/ = 2,08, Р = 0,05). На основании этих данных мы в дальнейшем использовали для заражения только молодых мышей весом 8—10 г.
При выборе условий, оптимальных для воспроизведения заболевания у животных, мы использовали 2 различные питательные среды для выращивания культуры С1. ре^ппдепБ: казеиново-грибную и молоко. В том и в другом случае после инкубирования в течение суток брали жидкую часть среды, причем молоко фильтровали через тонкий слой стерильной ваты для отделения сгустков. Сравнивая результаты заражения 90 мышей 2 штаммами (А-28 и А-821), выращенными параллельно на молоке и на казеиново-грибной среде, удалось обнаружить статистически достоверную разницу в частоте гибели мышей в обеих группах (/ = 5,44, Р = 0,001). При введении мышам культуры на казеиново-грибной среде процент смертельных исходов был примерно в 4 раза выше, чем при введении молочной культуры.
Таким образом, используя в качестве модели белую мышь, мы смогли при пероральном введении С1. регктдепэ вызвать заболевание, оканчивающееся гибелью животного, в среднем в 20—30% случаев. В контрольных группах за время опытов не было ни одного заболевания. Подопытное животное заболевало и погибало в 1-е сутки после введения культуры, обычно через 3—6 часов, причем в случае введения отмытых клеток бактерий инкубационный период был несколько дольше, чем при введении цельной культуры. Для начала клинической картины заболевания были характерны двигательное беспокойство, одышка, ригидность мышц хвоста. Тогда же наблюдались незначительные слизистые выделения из ануса, а в некоторых случаях — гематурия. Двигательное беспокойство переходило в угнетение, на фоне которого развивались судороги, часто имевшие характер «осциллярного движения», описанного С. И. Наследышевой с сотрудниками. На вскрытии животных, как правило, наблюдались вздутый желудок, гиперемия тонкого кишечника, увеличение и разрыхление печени и селезенки, особенно при поздней гибели животного. Иногда отмечались экссудат в плевральной полости и точечные кровоизлияния на поверхности легких.
Во всех случаях гибели животных в посевах (чаще всего из печени и крови) были выделены чистые культуры С1. регГппдепэ типа А, что подтверждало наличие у животных заболевания, связанного с введением данного возбудителя. В виде исключения удалось выделить С1. perfringens из органов переболевших мышей, но не погибших; ни одного случая выделения этого микроорганизма не было в группе контрольных животных, забитых после опыта.
Выводы
1. При пероральном введении белой мыши С1. регМпдепэ типа А удается вызвать заболевание с определенной симптоматологией, в некоторых случаях оканчивающееся гибелью. В среднем гибель животных составляет 25%.
2. Наиболее оптимальной для воспроизведения заболевания является цельная культура С1. регГпг^епэ с концентрацией клеток около
10 млрд. в 1 мл при введении мыши 0,5 мл. Снижение концентрации клеток в 1 мл приводит к уменьшению числа заболевших мышей; искусственное увеличение концентрации клеток не приводит к усилению патогенных свойств культуры.
3. Введение одной и той же культуры CI. perfringens, выращенной параллельно на молоке и казеиново-грибной среде, показывает, что наиболее патогенны культуры с последней, что может быть вызвано лучшими условиями токсинообразования на этой среде.
4. Наиболее чувствительны к введению CI. perfringens молодые мыши весом 8—10 г: у них частота смертельных исходов вдвое большая, чем у мышей весом 18—20 г.
5. Сравнение результатов заражения мышей цельной культурой, отмытыми клетками и отцентрифугированным токсином CI. perfringens указывает на то, что пищевое отравление, вызываемое этим возбудителем, является токсикоинфекцией; в ней определенную роль играет токсин, образованный клетками и накопленный в культуре.
У белых мышей заболевание протекает с явлениями септицемии.
ЛИТЕРАТУРА
Вальдман А. А. Опыт экспериментального анализа инфекционного процесса. JI., 1964. — Винокурова М. К., Попова А. И. Труды Саратовск. ин-та гигиены и профпатологии. Саратов, 1959, с. 286. — Глезерова Н. Н. Тезисы докл. на конференции, посвящ. итогам научной работы Горьковск. научно-исслед. ин-та эпидемиологии и гигиены. Горький, 1956, с. 27. — Наследышева С. И., Завадов-ская Т. А., Фрейдзон П. С. В кн.: Вопросы этиологии пищевых отравлений и патогенное значение бактерий группы coli. Л., 1948, с. 95. — Пивоваров Ю. П. Гиг. и сан., 1964, № 12, с. 91. — С и д о р е н к о Г. И., Там же, 1965, № 1, с. 73. — С и д о -ренко Г. И. Там же, № 5, с. 26.—Скворцов В. В., Киктенко В. С., К у ч е р е н -ко В. Д. Выживаемость и индикация патогенных микробов во внешней среде. М., 1960. — Moser L., Dtsch. med. Wschr., 1953, Bd 78, S. 1762.— Parry W. H„ Brit, med. J. 1963, v. 2, p. 1616.
Поступила 19/11 1966 г.
PATHOGENESIS OF FOOD POISONINGS CAUSED BY CL. PERFRINGENS
TYPE A
Af. M. Gasilina
The author studied the use of albino mice as experimental model of food poisoning caused by CI. perfringens type A. The-best results were obtained on per oral intro duction of undiluted cultures of the causative agent at a dose of 5 milliard cells. The mice became ill and died in an average of 25% of cases. On the basis of the results obtained the author believes that food poisonings caused by CI. perfingens type are toxinfections, wherein the toxin produced by the cells and accumulated in the culture plays an important role.
УДК 576.851.555:664.8
СЬ. РЕЯГ11ШСЕ№ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ И ПОЛУФАБРИКАТАХ КОНСЕРВНОГО ПРОИЗВОДСТВА
С. А. Николаева
Всесоюзный научно-исследовательский институт консервной и овощесушильной промышленности, Москва
С!, perfringens — один из наиболее распространенных в природе микроорганизмов. Он обнаруживается в почве, воде, пищевых и кормовых продуктах.
Пищевые отравления за счет С1. perfгingens чаще всего связаны с употреблением в пищу мяса и мясных продуктов. К ним в основном от-
