CC BY
39
http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2226-7425-2018-20-3-98-101
УДК: 582.661.21:633.84(470.67)
ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЙ И ЖЕЛЧЕГОННОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТОВ ИЗ ТРАВЫ СОЛЯНКИ ИБЕРИЙСКОЙ (SALSOLA IBERICA
(SENNEN&PAU) BOTSCH)
Аминова1 А.А., Гутенева2 Г.С., Ляшенко2 С.С., Юнусова3 С.Г., Денисенко2 О.Н., Юнусов3 М.С.
1ФГБОУ ВО «Дагестанский государственный медицинский университет», г. Махачкала, Российская Федерация 2Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ФГБОУ ВО ВолгГму, г. Пятигорск, Российская Федерация 3ФГБУН Уфимский институт химии РАН, г. Уфа, Российская Федерация
Аннотация. На патологической модели гепатита, вызванного четыреххлористым углеродом, изучена гепатопротекторная активность водного и спиртового экстракта травы солянки иберийской (Salsola ibérica (Sennen&Pau) Botsch.). Установлено, что спиртовый экстракт в дозе 5 мл/кг препятствует развитию синдромов цитолиза гепатоцитов и холестаза. Введение спиртового экстракта в течение 21 дня привело к нормализации весового коэффициента печени и снижению уровня АлАТ (на 67,2%) и АсАТ (на 65,9%) по сравнению с группой, в которой воспроизводилась патологическая модель экспериментального гепатита, а также снижению уровня щелочной фосфатазы на 36,4% по сравнению с группой, получавшей Карсил. Снижение показателя общего билирубина относительно группы с моделью экспериментального гепатита составило 29% при введении Карсила и 40% при введении спиртового экстракта травы солянки иберийской.
Ключевые слова: солянка иберийская (южная), гепатопротекторная активность, желчегонная активность, водный экстракт, спиртовый экстракт.
Поиск новых высокоэффективных гепатопротекто-ров растительной природы не утрачивает актуальности. Солянка иберийская (Salsola ibérica (Sennen&Pau) Botsch.) семейства маревые (Chenopodiaceae Vent.) широко распространена во флоре республики Дагестан. Изучение химического состава солянки иберийской показало наличие фенольных соединений, обладающих антиоксидантной активностью, которые могут оказывать гепатопротекторное действие [1,2]. Кроме того, исходя из родства с солянкой холмовой, сухой экстракт которой (салсоколлин полифенольной природы) проявляет гепатозащитные свойства, можно предположить наличие сходной фармакологической активности у экстракта солянки иберийской [5]. Ранее нами было установлено, что экстракты солянки иберийской могут быть отнесены к практически нетоксичным веществам (ЛД50 составляет 5000 мг/кг) [3].
Методика исследования. Исследование проводилось с соблюдением принципов GLP на лабораторных белых крысах линии Wistar, которые содержались в виварии Пятигорского медико-фармацевтического института в соответствии с правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей [3,5,6,7]. В желудок через зонд вводили 50% масляный раствор четыреххлористого углерода (токсический
агент) в дозе 0,15 мл/100 г массы тела 3 раза через день. В качестве препарата сравнения использовали Карсил форте («Sopharma» Bulgaria) в дозе 150 мг/кг.
Провели 2 серии экспериментов. В первой серии исследуемые экстракты и препарат сравнения - Карсил форте вводили 14 дней. На 9-ый, 11-й и 13 день одновременно с экстрактами и Карсилом вводили 50% масляный раствор тетрахлорметана. На 14-й день проводили исследование биохимических показателей сыворотки крови. Во второй серии исследуемые экстракты и препарат сравнения - Карсил вводили 21 день, причем на 16-й, 18-й и 20-й день одновременно с этими экстрактами и Карсилом вводили 50% масляный раствор тетрахлорметана. На 21-й день проводили исследование биохимических показателей.
Животных разделили на группы по 6 животных: 1 группа (интактная) - контроль-1; 2 группа - патологическая модель экспериментального гепатита - крысы, которым вводили 50% масляный раствор четыреххло-ристого углерода; 3 группа - контроль-2 - крысы, получавшие препарат сравнения; 4-я группа - крысы, получавшие водный экстракт солянки иберийской (5 мл/кг массы тела); 5-я группа - крысы, получавшие водный экстракт солянки иберийской (10 мл/кг массы тела); 6-я группа - крысы, получавшие 40% спиртовый экстракт солянки иберийской (разведение 1:3) (5 мл/кг
массы тела). В конце эксперимента проводили забой животных, извлекали печень для исследования и осуществляли забор крови для получения сыворотки. Эффективность гепатозащитного действия экстрактов оценивали по изменению уровня аланинаминотранс-феразы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и щелочной фосфатазы (ЩФ). Кроме этого у крыс рассчитывали весовой коэффициент печени (отношение массы органа к массе тела животного) и коэффициент де Ритиса (отношение АсАТ к АлАТ).
Желчегонную активность экстрактов определяли по количеству общего билирубина и активности ЩФ в сыворотке крови. Активность ферментов сыворотки крови (АлАТ, АсАТ, ЩФ) измеряли на автоматическом биохимическом анализаторе BS-380 («Mmdray») с использованием стандартных наборов жидких реактивов фирмы «DiaSys» (Германия). Статистическую достоверность результатов вычисляли по ^критерию Стьюдента.
Экспериментальная часть.
Таблица 1
Весовой коэффициент печени, коэффициент де Ритиса и активность АлАТ и АсАТ после введения животным исследуемых экстрактов солянки иберийской (14 и 21 день)
Группа Весовой коэффициент печени АлАТ (U/L) АсАТ (U/L) Коэффициент де Ритиса
1 серия 2 серия 1 серия 2 серия 1 серия 2 серия 1 серия 2 серия
1 3,61 3,65 58±3 64±3 174±5 170±13 2,99 2,63
2 6,0 4,54 520±30 350±70 475±19 530±70 0,92 1,52
3 4,43 4,26 260±30 150±20 320±12 220±20 1,2 1,43
4 5,13 200±30 434±42 2,2
5 3,78 466±62**# t =-6,62 t2 = - 2,99 506±35** t = -9,48 1,08
6 4,29 3,92 155±19**## t = -5,04 t2 = - 3,15 114±31 t = -1,64 252±22 t = -3,49*# t2 = -2,79 180±11 t =0,70 t1= -1,04 1,6 1,58
Примечание: Г - критерий Стьюдента относительно контроля 1 - интактной группы,
* - достоверность Р<0,05; ** - достоверность Р<0,01; *** - достоверность Р<0,001 Г1- критерий Стьюдента относительно контроля 2 - препарата сравнения,
# - достоверность Р<0,05; ## - достоверность Р<0,01; ### - достоверность Р<0,001
В эксперименте установлено, что в группе животных с патологической моделью гепатита увеличение массы печени было на 56,8% больше по сравнению с контрольной группой. После введения экстрактов по весовому коэффициенту печени ближе всех к интактной группе была 5-я группа, которая получала водный экстракт солянки иберийской в дозе 10 мл/кг массы. Уровень активности ферментов АлАТ и АсАТ в группе с патологической моделью был достоверно повышенным по сравнению с контролем - 1 (в 8,9 раза и в 2,7 раза соответственно). В группе, получавшей Карсил, уровень АлАТ и АсАТ не пришел в норму, но снизился на 48,9% и 32,6% соответственно. Максимальное снижение уровня АлАТ (на 69,9%) по сравнению с группой, в которой воспроизводилась патологическая модель экспериментального гепатита, наблюдалось в группе, получавшей спиртовый экстракт. В этой же группе произошло достоверное снижение уровня фермента АлАТ относительно группы № 3, получавшей
Карсил. Коэффициент де Ритиса в группах № 3 и № 6 составил 1,2 и 1,6 соответственно. Наметившаяся тенденция к нормализации показателей в 6 группе позволило нам провести следующую серию экспериментов, где мы продлили поение животных спиртовым экстрактом на 1 неделю.
Вторая серия эксперимента показала, что у крыс, получавших спиртовый экстракт солянки иберийской, нормализовался весовой коэффициент печени (3,92 против группы интактных животных - 3,65) и снизился по сравнению с контролем-1 в 1,7 раза коэффициент де Ритиса. Уровень активности ферментов АлАТ и АсАТ в группе с патологической моделью был достоверно повышенным по сравнению с контролем - 1 (в 5,4 раза и в 3,1 раза соответственно). В группе, получавшей Карсил, уровень АлАТ и не пришел в норму, но снизился на 56,4% и 58,9% соответственно. Введение спиртового экстракта солянки иберийской привело к снижению уровня АлАТ (на 67,2%) и АсАТ (на 65,9%)
по сравнению с группой, в которой воспроизводилась патологическая модель экспериментального гепатита. Также уровень АлАТ снизился относительно группы, получавшей Карсил, однако это снижение было недостоверным.
Известно, что при экспериментальных гепатитах также можно проводить изучение желчегонной активности,
которую обычно определяют при холестазе. При холе-стазе наблюдается повышение активности ЩФ, которая образуется в гепатоцитах.
Результаты эксперимента по определению ЩФ и билирубина приведены в таблице 2.
Таблица 2
Влияние экстрактов из травы солянки иберийской на уровень ЩФ и общего билирубина
Группа Общий билирубин ЩФ
1 серия 2 серия 1 серия 2 серия
Интактная 13,7±1,2 16,8±0,8 216±19 179±13
Патологическая модель экспериментального гепатита 30±4** t = -4,11 28±4 t =--2,64 841±51*** t = -11,42 595±75*** t =- 5,50
Карсил форте 20,1±1,1** t = -3,90 16,6 ± 1,5 t =-0,10 609±54*** t = -6,90 558 ±66*** t = -5,66
Экстракт водный солянки иберийской (5 мл/кг массы) 17,0±0,8* t = -2,38 769±75** t = -7,18
Экстракт водный солянки иберийской (10 мл/кг массы) 21,1 ± 0,6 t = -5,63 n=5 557±66*** t = -8,30
Экстракт спиртовый солянки иберийской 24±2 t = -4,46 15±1 t = -1,105 t = -4,46 700±41*** t = -10,54 355 ±2*** n = 5 t =-5,07
Примечание: Г = - критерий Стьюдента относительно контроля-1 (интактной группы) Г 1= критерий Стьюдента относительно контроля-2 (препарата сравнения) * - достоверность Р<0,05; ** - достоверность Р<0,01; *** - достоверность Р<0,001
Введение препарата сравнения и спиртового экстракта солянки иберийской в течение 14 дней не привело к нормализации уровня ЩФ. Однако через неделю дополнительного поения крыс спиртовым экстрактом наблюдалось снижение показателя ЩФ на 36,4% относительно группы, получавшей Карсил. Количество общего билирубина в группе с патологической моделью увеличилось в 2 раза, т.е. на 107,8% по сравнению с контролем -1. Снижение показателя общего билирубина относительно группы с моделью экспериментального гепатита составило 29% при введении Карсила и 40% при введении спиртового экстракта травы солянки иберийской. При введении водного экстракта солянки иберийской в дозе 5 мл/кг массы количество общего билирубина было повышенным по сравнению с контролем -1 (Р <0,05), однако по сравнению с остальными группами этот показатель был самым низким. Данные 2-ой серии показали, что применение экстракта спиртового приводит к нормализации показателей, определяющих количество билирубина в сыворотке крови.
Таким образом, спиртовый экстракт травы солянки иберийской препятствует развитию синдромов цитолиза гепатоцитов и холестаза, а в некоторых случаях
превосходит по действию препарат сравнения - Кар-сил, что свидетельствует о гепатопротекторной активности экстракта и перспективности его дальнейшего изучения.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
[1] Аминова А.А., Денисенко О.Н., Ляшенко С.С., Бережная Л.А. Изучение состава фенольных соединений травы солянки иберийской (Salsola ibérica (Sennen&Pau) Botsch.) флоры республики Дагестан методом ВЭЖХ // Здоровье и образование в XXI веке. 2016. Т. 18, № 10. С. 109-112.
[2] Аминова А.А., Денисенко О.Н., Ляшенко С.С., Юну-сова С.Г., Денисенко Ю.О. Определение антиоксидант-ной активности извлечений из травы солянки иберийской (южной) Salsola ibérica (Sennen et Pau) Botsch. (S. australis R. Br.): сб. науч. тр. / Волгоградский гос.мед. университет; Ижевск. : ООО «Принт-2», 2016. Вып. 71. С 4-5.
[3] Аминова А.А., Гутенева Г.С., Денисенко Ю.О., Ляшенко С. Изучение острой токсичности экстрактов из травы солянки иберийской флоры Дагестана // Молодые ученые - медицине: Материалы XVI научной конференции молодых ученых и специалистов с международным участием. - Владикавказ: ФГБОУ ВО СОГМА Минздрава России: ИПЦ ИП Цопанова А.Ю., 2017. -С.13 - 14.
[4] Миронов А.Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. М.: Гриф и К. 2012. 944 с.
[5] Новиков В.Е., Климкина Е.И. Фармакология гепато-протекторов // Обз. клин. фармакол. лек. тер. 2005. Т. 4, № 1. С. 2-20.
[6] Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Медицина, 2005. 832 с.
[7] Федеральный закон РФ от 12.04.2010 г. № 61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств».
[8] Национальный стандарт Российской Федерации ГОСТ Р-53434-2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики».
IDENTIFICATION OF HEPATOPROTECTIVE AND CHOLERETIC ACTIVITY OF HERBA SALSOLA IBERICA (SALSOLA IBERICA (SENEN & PAU) BOTSCH)
EXTRACT
Aminova1 A.A., Guteneva2 G.S., Lyashenko2 S.S., Yunusova3 S. G., Denisenko2 O.N., Yunusov3 M.S.
'Dagestan state medical university, Makhachkala, Russian Federation 2Pyatigorsk Medical Pharmaceutical Institute of Volgograd Medical State University, Pyatigorsk, Russian Federation 3Ufa institute of chemistry of the Russian academy of sciences, Ufa, Russian Federation
Annotation. Hepatoprotective activity of aqueous and ethanolic extracts of Herba Salsola iberica (Salsola iberica (Sennen&Pau) Botsch.) was researched on hepatitis pathological model caused by carbon tetrachloride. Ethanolic extract in a dose of 5 ml/kg blocks the growth of syndromes of hepatocytes cytolysis and cholestasia. The injection of ethanolic extract during 21 days period, led to normalization of liver weight coefficient and decrease of alanine-aminotransferase (by 67,2%) and aspartate aminotransferase level (by 65,9%), compared to the group with reproduced pathological model of experimental hepatitis and also it led to decrease ofalkaline phosphatase level by 36,4% compared to a group which used Karsil. Decrease of total bilirubin level was 29% with Karsil injection and 40% with Herba Salsola Iberica extract injection against the group with experimental hepatitis model.
Key words: Salsola iberica (Sennen&Pau) Botsch, hepatoprotective activity, choleretic activity, aqueous extracts, ethanolic extracts.
travy solyanki iberijskoj flory Dagestana // Molodye uchenye - medicine: Materialy XVI nauchnoj konferencii molodyh uchenyh i specialistov s mezhdunarodnym uchas-tiem. - Vladikavkaz: FGBOU VO SOGMA Minzdrava Rossii: IPC IP Copanova A.YU., 2017. - p.13 - 14. Mironov A.N. Guideline on pre-clinical studies of medicinal agents. M.: Grif and K. 2012, 944 p. Novikov V.E., Klimkina E.I. Pharmacology of hepatopro-tectors// Rev.of clin. pharm. lec. ter. 2005. Vol.4, №1, p.2-20.
Habriev R.U. Guideline on experimental (pre-clinical) studies of new medicinal agents. M.:Medicine, 2005. 832 p. Federal Law of the Russian Federation dated 12.04.2010, №61-FZ "On the civil circulation of medical products". National standart of the Russian Federation GOST P-53434-2009 "Principals of good laboratory practice".
REFERENCES
[1] Aminova A.A., Denisenko O.N., Lyashenko S.S., Berezh-naya L.A. Identification of phenolics of Herba Salsola iberica (Sennen&Pau) Botsch. family Chenopodiaceae of flora of the Republic of Dagestan by high performance liquid chromatography// Health and education Millennium 2016. Vol.18, №10. P.109-112.
[2] Aminova A.A., Denisenko O.N., Lyashenko S.S., Yunusova S.G., Denisenko Yu.O. Identification of antioxidative activity of Herba Salsola iberica (Sennen&Pau) Botsch (S.australis R.Br.).:col. of res.pap./The Volgograd State Medical University; Izhevsk, LLC "Print-2", 2016, Edition 71, P.4-5.
[3] Aminova A.A., Guteneva G.S., Denisenko Yu.O., Lyashenko S. Izuchenie ostroj toksichnosti ehkstraktov iz
[4]
[5]
[6]
[7]
[8]
