CC BY
30
9. Shchepotina E. G., Vavilin V. A. Vliyanie polimorfizma genov tsitokhromov P-450 3A i pregnanovogo Kh retseptora i vozrasta na aktivnost' CYP3A [The influence of polymorphism of genes cytochromes P-450 3A and pregnanew X receiptor and age on the activity of CYP 3A], Materialy IV s"ezda Rossiyskogo obshchestva biokhimi-kov i molekulyarnykh biologov [Materials of IV th congress of Russian society of biochemists and molecular biologists]. Novosibirsk, 2008, p. 221.
10. Boiko S., Zeiger R. Diagnosis and treatment of atopic dermatitis, urticaria, and angioedema during pregnancy. Immunol. Allergy Clin. North, 2000, vol. 20, no. 4, pp. 839-855.
11. Borzova, E., Grattan S. E. Urticaria: current and future treatments. Expert Review of Dermatology, 2007, vol. 2, no. 3, pp. 317-334.
12. Briganti S., Cristaudo A., D'Argento V., Cassano N., Turbino L., Guarrera M., Vena G., Picardo M. Oxidative stress in physical urticarias. Clin. Exp. Dermatol, 2001, vol. 26, no. 3, pp. 284-288.
13. Brockow K., Scott L.M., Worobec A. S., Kirshenbaum A., Akin C., Huber M. M., Metcalfe D. D. Regression of urticaria pigmentosa in adult patiemts with systemic mastocytosis: correlation with clinical patterns of disease. Arch. Dermatol., 2002, vol. 138, no. 6, pp. 785-790.
14. Czarnetzki B. M. New aspects in diagnosis and therapy of urticaria. Allergology, 1994, vol. 17, no. 1, pp. 2-5.
УДК 616-002.73:612.017 © М.Ю. Юшин, В В. Анохина, 2014
ИЗУЧЕНИЕ АНТИТЕЛЬНОГО ОТВЕТА НА АНТИГЕНЫ MYCOBACTERIUM LEPRAE У ЖИТЕЛЕЙ ЭНДЕМИЧЕСКОГО И НЕЭНДЕМИЧЕСКОГО ПО ЛЕПРЕ РЕГИОНОВ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Юшин Михаил Юрьевич, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лабора-торно-экспериментального отдела, ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, Россия, 414057, г. Астрахань, пр. Н. Островского, д. 3, тел.: (8512) 33-96-33, e-mail: niil@astmail.astranet.ru.
Анохина Вера Викторовна, кандидат медицинских наук, научный сотрудник клинического отдела, ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, Россия, 414057, г. Астрахань, пр. Н. Островского, д. 3, тел.: (8512) 33-96-33, e-mail: niil@astmail.astranet.ru.
Проведено сравнительное изучение сывороток крови здорового населения - доноров крови эндемического (Астраханская область) и неэндемического (Самарская область) по лепре регионов Российской Федерации на наличие антител к антигенам M. leprae с использованием в иммуноферментном анализе разработанного авторами антигенного препарата из M. lufu. Показано, что антитела класса G к антигенам M. leprae определяются у жителей как эндемического, так и неэндемического по лепре регионов. Было определено, что у доноров крови Астраханской области по сравнению с донорами Самарской области процент серопозитивных лиц, а также средние значения уровня антител выше.
Ключевые слова: доноры крови, иммуноферментный анализ, антитела к антигенам M. leprae, эндемический и неэндемический по лепре регионы Российской Федерации.
THE STUDY OF ANTIBODY RESPONSE TO MYCOBACTERIUM LEPRAE ANTIGENS IN POPULATION OF LEPROSY ENDEMIC AND NON-ENDEMIC REGIONS OF THE RUSSIAN FEDERATION
Yushin Mikhail Yu., Cand. Sci. (Med.), Senior Research Associate, Leprosy Research Institute, 3 Os-trovsky passage, Astrakhan, 414057, Russia, tel: (8512) 33-96-33, e-mail: niil@astmail.astranet.ru.
Anokhina Vera V., Cand. Sci. (Med.), Research Associate, Leprosy Research Institute, 3 Ostrovsky passage, Astrakhan, 414057, Russia, tel: (8512) 33-96-33, e-mail: niil@astmail.astranet.ru.
The article presents the comparative study of blood serum of healthy population - blood-donors of leprosy endemic (Astrakhan) and non-endemic (Samara) regions of the Russian Federation - for the presence of antibodies to antigens of M. leprae. Antigenic preparation from M. lufu proposed by the authors was used in the enzyme immunoassay. Antibodies of G class to antigens of M. leprae were defined both in population of leprosy endemic and non-endemic regions. The antibody levels were higher in blood-donors of the Astrakhan region in comparison with blood-donors of the Samara region, and medium meaning of antibodies level was also higher.
Key words: blood-donors, antibodies to M. leprae, endemic and non-endemic regions of the Russian Federation.
Введение. Заболеваемость лепрой привязана к определенным территориям, одной из них в Российской Федерации, где лепра наблюдается длительное время, является Нижнее Поволжье, в основном дельтовые районы Астраханской области. В настоящее время Нижнее Поволжье - это затухающий очаг лепры, в котором отмечаются редко встречающиеся случаи заболевания. Однако до сих пор вопрос о причинах существования эндемических по лепре регионов остается открытым. Его решение напрямую связано с выработкой верных представлений об источнике инфекции и путях ее передачи. В последние годы подвергается сомнению доминирующая теория о том, что единственным источником инфекции является больной человек. С конца XIX века фиксируются факты, говорящие о том, что альтернативным источником инфицирования возбудителем лепры является почва. В ряде работ зарубежных авторов выявлена связь распространенности лепрозной инфекции у человека и животных с наличием нефтегазовых месторождений и другого ископаемого топлива в эндемических регионах Азии, Африки, Южной Америки [14, 15]. Подобная связь была обнаружена и в США, России, Румынии, где лепра была распространена в прошлом. В регионах, где отсутствуют углеводородные залежи (Чили, Шри-Ланка), лепра практически не встречается [1].
Однако не только человек может быть источником лепрозной инфекции, но и объекты окружающей среды, в частности, почва и вода [6]. Это означает, что инфицированию могут подвергаться не только лица, имеющие контакт с больными лепрой, но и никогда не встречавшиеся с ними [8, 16, 17, 18, 19]. Если исходить из представлений о том, что инфекция передается только от человека к человеку, то представляется сложным объяснить тот факт, что у 70 % больных лепрой как в России, так и за рубежом источник инфекции установить не удается.
В связи с этим большой интерес представляет сравнительное изучение населения эндемического (в условиях спорадической заболеваемости) и неэндемического по лепре регионов на наличие антител к возбудителю лепры. Эта информация позволит охарактеризовать потенциальную подверженность населения данных регионов возможности контакта с возбудителем лепры, что особенно важно для прогнозирования заболеваемости лепрой в будущем.
Возбудитель лепры не культивируется in vitro. Это обстоятельство в значительной степени затрудняет изучение биологических свойств М. leprae, а также осложняет решение многих важных проблем практической лепрологии, в частности, таких, как создание диагностических и вакцинных препаратов.
Многолетний собственный опыт исследования в направлении поиска тест-антигена для серодиагностики лепры позволил сделать вывод о том, что одним из реальных источников получения антигенов может быть использование культивируемых М. lufu, биологические и антигенные свойства которых сходны с М. leprae [2, 3, 4, 5, 7, 9, 12, 13, 20].
В предыдущих работах, посвященных серологическим исследованиям при лепре, было показано, что результаты определения антител класса G в сыворотках крови больных лепрой и доноров крови в ИФА с использованием в качестве тест-антигена M. lufU, подвергнутых термической обработке, и видоспецифического полусинтетического антигена M. leprae - Dis-BSA коррелируют между собой. Это дает основание для использования препарата из M. lufu в качестве индикаторного тест-антигена в иммуноферментном анализе (ИФА) для определения в сыворотке крови антител к M. leprae [10, 11].
Цель: изучить содержание антител класса G к M. leprae в сыворотках крови у жителей эндемического и неэндемического по лепре регионов Российской Федерации на примере Астраханской и Самарской областей в ИФА с использованием антигенного препарата из M. lufU.
Материалы и методы исследования. Материалом для исследования служили сыворотки крови от 411 человек - 200 доноров крови Астраханской области (эндемического по лепре региона) и 211 доноров крови Самарской области (неэндемического по лепре региона). В качестве антигенного препарата использовали водную суспензию культивируемых на среде Левенштейна-Йенсена M. lufU, подвергнутых термической обработке.
Постановку ИФА осуществляли на полистироловых планшетах для иммунологических реакций однократного применения (Медполимер, Россия). Лунки полистиролового планшета сенсибилизировали антигеном из термообработанных M. lufu в течение 18 часов при температуре 4° С в карбонат-бикарбонатном буфере рН 9,25 ± 0,25 (1,18 г Na2CO3, 3,47 г NaHCO3, 0,2 г NaN3 в 1 л дистиллированной воды) из расчета 0,1 мкг/мл в объеме 0,1 мл на 1 лунку. Затем планшет отмывали 3 раза по 0,3 мл 0,02 М фосфатно-солевым буфером (рН 7,4) с добавлением 0,05 % твина-20 с помощью автоматического промывателя планшетов. Исследуемые сыворотки разводили 1 : 50;
1 : 200; 1 : 400; 1 : 800; 0,02 М фосфатно-солевым буфером (рН 7,4) с 0,05 % твина-20 и вносили в лунки планшета в дубле. Отрицательным контролем (контроль конъюгата) служили 4 лунки, в которые вносили 0,02 М фосфатно-солевой буфер (рН 7,4) с 0,05 % твина-20. Планшет инкубировали при 37 °С в течение 1 часа, затем повторяли процесс отмывки 0,02 М фосфатно-солевым буфером с 0,05 % твина-20. В каждую лунку добавляли по 0,1 мл конъюгата кроличьих антител к IgG человека, меченных пероксидазой хрена (Merck, Германия) в разведении 1 : 2 000 и инкубировали в течение 1 часа при 37 °С. После пятикратной отмывки 0,02 М фосфатно-солевым буфером (рН 7,4) с 0,05 % твина-20 и двукратной - дистиллированной водой вносили субстратную смесь - 0,04 % ортофени-лендиамина (ОАО «Шосткинский завод химических реактивов») и 0,03 % перекиси водорода. Планшет выдерживали при комнатной температуре в темноте в течение 20 минут, после чего ферментативную реакцию останавливали внесением в каждую лунку 0,05 мл 2М H2SO4. Учет результатов осуществляли на фотометре иммуноферментном планшетном при длине волны 492 нм. За положительный результат считали образцы, показатель оптической плотности (ОП492) которых в 2,1 раза и более превышал показатель отрицательного контроля (контроль конъюгата) и составлял более 0,2.
Статистическую обработку результатов исследования проводили при помощи пакетов программ Microsoft Office Excel 2007 с определением критерия Стьюдента (t). Различия считали статистически значимыми при достигнутом уровне значимости при р < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение. Результаты обследования доноров эндемического и неэндемического по лепре регионов Российской Федерации представлены в таблицах 1 и 2.
Таблица 1
Результаты определения числа серопозитивных лиц среди доноров крови Астраханской и Самарской областей в ИФА с использованием антигена из М. Ми_
Разведение сывороток n АО Количество положительных результатов у доноров крови Астраханской области (АО) n СО Количество положительных результатов у доноров крови Самарской области (СО)
1 : 50 200 168 (84 %) 211 172 (81,5 %)
1 : 200 128 65 (50,8 %) 105 39 (37,1 %)
1 : 400 128 31 (24,2 %) 121 20 (16,5 %)
1 : 800 102 15 (14,7 %) 109 5 (4,6 %)
Как видно из таблицы 1, у жителей эндемического и неэндемического по лепре регионов Российской Федерации антитела класса G к антигенам M. leprae в ИФА с использованием антигена из M. lufU выявляются при всех разведениях сывороток крови. Однако среди доноров Астраханской области процент серопозитивных лиц выше, чем среди доноров Самарской области. При этом в разведении сывороток 1 : 800 процент серопозитивных доноров крови в Астраханской области более чем в 3 раза превышает аналогичный показатель в Самарской области и является статистически достоверным (р < 0,05).
Из таблицы 2 видно, что средние показатели ОП у доноров крови Астраханской области при всех разведениях сывороток превышают аналогичные показатели у доноров крови Самарской области. Статистически достоверные различия показателей ОП наблюдаются при разведении сывороток 1 : 50 (р < 0,01) и 1 : 800 (р < 0,05).
Таблица 2
Средние показатели оптической плотности при определении антител к антигенам M. leprae в сыворотках
крови доноров Астраханской и Самарской областей в ИФА с использованием антигена из М. Ми
Разведение сывороток n АО Средние показатели ОП у доноров крови Астраханской области (АО) n СО Средние показатели ОП у доноров крови Самарской области (СО)
1 : 50 200 0,37 ± 0,01 211 0,32 ± 0,01
Мин. ОП 0,09 0,09
Макс. ОП 1,02 1,04
1 : 200 128 0,22 ± 0,009 105 0,20 ± 0,008
Мин. ОП 0,08 0,08
Макс. ОП 0,55 0,55
1 : 400 128 0,17 ± 0,007 121 0,16 ± 0,006
Мин. ОП 0,07 0,07
Макс. ОП 0,46 0,44
1 : 800 102 0,15 ± 0,006 109 0,13 ± 0,004
Мин. ОП 0,07 0,07
Макс. ОП 0,39 0,23
Заключение. Антитела к антигенам M. leprae присутствуют в сыворотках крови у жителей как Астраханской, так и Самарской областей. Однако среди жителей Астраханской области - эндемического по лепре региона Российской Федерации - процент серопозитивных лиц выше. Кроме того, у жителей Астраханской области в ИФА с антигеном из термически обработанных M. lufu определяется более высокий уровень специфических антител класса G по сравнению с жителями Самарской области.
Дальнейшее исследования уровня и авидности антител к антигенам M. leprae у жителей различных регионов в ИФА с использованием в качестве тест-антигена M. lufu возможно позволит охарактеризовать население по степени вероятного контакта с возбудителем лепры, установить потенциальный риск появления новых больных, повысить настороженность в отношении лепры в регионах, считающихся «нелепрозными», что улучшит контроль над эпидемиологической ситуацией по лепре в Российской Федерации.
Список литературы
1. Ещанов, Т. Б. Организационные и научные основы ликвидации лепры в Каракалпакской эндемической зоне / Т. Б. Ещанов, Ч. А. Абдиров, А. А. Ющенко, Н. Г. Урляпова - Нукус : Изд. Каракалпакстан, 2003. -168 с.
2. Дячина, М. Н. Пат. 2171689 Рос. Федерация, МПК A 61 K 39/04 Способ диагностики лепры / М. Н. Дячина, М. Ю. Юшин, А. А. Ющенко, В. А. Бочановский; заявитель и патентообладатель НИИ по изучению лепры Министерства здравоохранения РФ. - № 2000123326/14; заявл. 07.09.2000; опубл. 10.08.2001. Бюл. № 22.
3. Саламатина, О. С. Сравнительная характеристика антигенного состава микобактерий лепры и некоторых культивируемых микобактерий : автореф. дис. ... канд. мед. наук / О. С. Саламатина. - М., 2000. - 22 с.
4. Саламатина, О. С. Выявление видоспецифических антигенных детерминант микобактерий лепры с помощью моноклональных антител / О. С. Саламатина, М. Н. Дячина, О. А. Калинина, Л. Н. Черноусова, О. В. Калянина, М. Ю. Юшин // Актуальные вопросы дерматологии и венерологии : труды Астраханской государственной медицинской академии. - Астрахань : АГМА; ГП ИПК «Волга», 1998. - Т. 10 (34). - С. 115-117.
5. Юшин, М. Ю. Биологические параллели Mycobacterium leprae и Mycobacterium lufu / М. Ю. Юшин // Вестник дерматологии и венерологии. - 2007. - № 6. - С. 37-41.
6. Юшин, М. Ю. Эпидемиология лепры : новый взгляд на старую проблему / М. Ю. Юшин // Астраханский медицинский журнал (приложение).- 2008. - Т. 3, № 3. - С. 326-329.
7. Юшин, М. Ю. Изучение некоторых свойств M. lufu в опытах in vivo / М. Ю. Юшин, А. Э. Васильев, О. В. Калянина // Эпидемиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика важнейших инфекционных болезней : мат-лы конференции / ред. кол.: В. И. Покровский, В. В. Малеев, В. С. Буркин, Ю. Ю. Черникова. -Тамбов; Астрахань, 1994. - С. 137-138.
8. Юшин, М. Ю. Определение иммуноглобулинов класса G к специфическому полусинтетическому антигену Mycobacteriumleprae в сыворотках крови доноров Астраханской области (предварительное сообщение) / М. Ю. Юшин, А. Г. Давыдов, В. В. Анохина, О. В. Дегтярев, З. Я. Ибадулаев // Астраханский медицинский журнал. - 2012. - Т. 7, № 4. - С. 272-275.
9. Юшин, М. Ю. Пат. 2124730 Рос. Федерация, МПК G 01 N 33/569 Способ диагностики лепры / М. Ю. Юшин, М. Н. Дячина, О. В. Дегтярев, О. В. Калянина; заявитель и патентообладатель Научно-исследовательский институт по изучению лепры Минздравмедпрома РФ. -№ 96110599/14; заявл. 28.05.1996; опубл. 10.01.1999. Бюл. № 1.
10. Юшин, М. Ю. Пат. 2500423 Рос. Федерация, МПК А61К39/04 Способ определения антител к Mycobacterium leprae / М. Ю. Юшин, А. Г. Давыдов, О. В. Дегтярев, В. В. Анохина; заявитель и патентообладатель ФГБУ «НИИЛ» Минздравсоцразвития России. - №2012112089/10; заявл. 28.03.2012; опубл. 10.12.2013. Бюл. № 34.
11. Юшин, М. Ю. Сравнительное изучение содержания иммуноглобулинов класса G в сыворотках крови доноров Астраханской области и больных лепрой к специфическому полусинтетическому антигену Mycobacte-rium leprae - Dis-BSA и антигену из Mycobacterium lufu / М. Ю. Юшин, А. Г. Давыдов, В. В. Анохина,О. В. Дегтярев, З. Я. Ибадулаев // Астраханский медицинский журнал. - 2013. - Т. 8, № 2. - С. 93-96.
12. Юшин, М. Ю. Биохимическое и электронно-цитохимическое изучение ДОФА-оксидазной активности у M. lufu / М. Ю. Юшин, А. К. Маслов, В. А. Бочановский, О. В. Калянина, М. Н. Михайлова // Тезисы докладов итоговой научной конференции Астраханского государственного педагогического университета (г. Астрахань, 29 апреля 1997 г.). - Астрахань : Изд-во АГПУ, 1997. - С. 26.
13. Юшин, М. Ю. Сравнительная электронно-цитохимическая характеристика Mycobacterium leprae, My-cobacterium «lufu» и Mycobacterium tuberculosis / М. Ю. Юшин, А. К. Маслов, В. В. Анохина // Вестник новых медицинских технологий. - 2008. - Т. 15, № 3. - С. 9-10.
14. Chakrabarty, A. N. Correlation between occurance of leprosy and fossil fuels : Role of fossil fuels bacteria in the origin and global epidemiology of leprosy / A. N. Chakrabarty, S. G. Dastidar // Indian J. Exp. Biol. - 1989.-Vol. 27, № 6.- P. 483-496.
15. Chakrabarty, A. N. Repeated isolation of Nocardia like organisms from multibacillary cases of leprosy / A. N. Chakrabarty, S. G. Dastidar, S. Das, S. K. Chaudhurry // Indian J. Lepr. - 1987. - Vol. 59.- P. 247-262.
16. Cunanan, A. Jr. Risk of development of leprosy among Culion contacts / A. Jr. Cunanan, G. P. Chan, J. T. Douglas // 15th Int. Leprosy Congress : abstracts. - Beijing, 1998. - EP12. - P. 78A.
17. de Moura, R. S. Leprosy serology using PGL-I: a systematic review / R. S. de Moura, K. L. Calado, M. L. W. Oliveira, S. Buhrer-Sekula // Rev. Soc. Bras. Med. Trop. - 2008. - Vol. 41 (Suppl. II). - P. 11-18.
18. Oskam, L. Serology : recent developments, strengths, limitations and prospects: a state of the art overview / L. Oskam, E. Slim, S. Buhrer-Sekula // Lepr. Rev. - 2003. - Vol. 74. - P. 196-205.
19. Spencer, J. S. The role of Mycobacterium leprae phenolic glycolipid 1 (PGL-1) in serodiagnosis and in the pathogenesis of leprosy / J. S. Spencer, P. J. Brennan // Lepr. Rev. - 2011. - Vol. 82, № 4. - P. 344-357.
20. Yushin, M. Yu. A study of the biology of M. lufu and prospects for using it in leprosy investigations / M. Yu. Yushin // Int. J. Lepr. Other Mycobact. Dis. - 2000. - Vol. 68, № 2. - P. 179-182.
References
1. Eshchanov T. B., Abdirov Ch. A., Yushchenko A. A., Urljapova N. G. Organizacionnye i nauchnye osnovy likvidacii lepry v Karakalpakskoj jendemicheskoj zone [Organizational and scientific principles of leprosy elimination in Karakalpak endemic zone]. Nukus: Karakalpakstan, 2003, 168 p.
2. Dyachina M. N.,Yushin M. Yu., Yushchenko A. A., Bochanovskij V. A. Sposob diagnostiki lepry [The method of diagnosis of leprosy]. RF patent, no. 2171689, 2001.
3. Salamatina O. S. Sravnitel'naja harakteristika antigennogo sostava mikobakterij lepry i nekotoryh kul'ti-viruemyh mikobakterij. Avtoreferat dissertacii kandidata medicinskih nauk [Comparative characteristic of antigenic composition of M. leprae and some cultivated mycobacteria. Abstract of thesis of Candidate of Medical Sciences]. Moscow, 2000. - 22 p.
4. Salamatina O. S., Dyachina M. N., Kalinina O. A., Chernousova L. N., Kalyanina O. V., Yushin M. Yu. Vyjavle-nie vidospecificheskih antigennyh determinant mikobakterij lepry s pomoshh'ju monoklonal'nyh antitel [Detection of species-specific antigenic determinants of M. leprae with the help of monoclonal antibodies]. Trudy Astrahanskoj gosudarstvennoj medicinskoj akademii. Aktual'nye voprosy dermatologii i venerologii [Proceedings of Astrakhan State Medical Academy. Actual problems of dermatology and venereology: collection of scientific works]. Astrakhan, 1998, vol. 10 (34), pp. 115-117.
5. Yushin M. Yu. Biologicheskie paralleli Mycobacterium leprae i Mycobacterium lufu [Biological parallels between Mycobacterium leprae and Mycobacterium lufu]. Vestnik dermatologii i venerologii [Bulletin of Dermatology and Venereology], 2007, no. 6, pp. 37-41.
6. Yushin M. Yu. Jepidemiologija lepry: novyj vzgljad na staruju problemu [Epidemiology of leprosy: a new view on the old problem]. Astrahanskij medicinskij zhurnal [Astrakhan medical journal], 2008, Vol. 3, pp. 326-329.
7. Yushin M. Yu., Vasil'ev A. Je., Kalyanina O. V. Izuchenie nekotoryh svojstv M. lufu v opytah in vivo [The study of some characteristics of M. lufu in experiments in vivo]. Jepidemiologija, klinika, diagnostika, lechenie i pro-filaktika vazhnejshih infekcionnyh boleznej : materially konferencii [Epidemiology, clinic, diagnosis, treatment and prophylaxis of major infections: materials of conference]. Tambov; Astrakhan, 1994, pp. 137-138.
8. Yushin M. Yu., Davydov A. G., Anokhina V. V., Degtyarev O. V., Ibadulaev Z. Ja. Opredelenie immu-noglobulinov klassa G k specificheskomu polusinteticheskomu antigenu Mikobakteriilepry v syvorotkah krovi donorov Astrahanskoj oblasti (predvaritel'noe soobshhenie) [The analysis of immunoglobulin G to specific semisynthetic antigen Mycobacterium leprae in serum of blood-donors of the Astrakhan region (preliminary report)]. Astrahanskij medicinskij zhurnal [Astrakhan medical journal], 2012, vol. 7, no. 4, pp. 272-275.
9. Yushin M. Yu., Dyachina M. N., Degtyarev O. V., Kalyanina O. V. Sposob diagnostiki lepry [The method of diagnosis of leprosy]. RF patent, no. 2124730, 1999.
10. Yushin M. Yu., Davydov A. G., Degtyarev O. V., Anokhina V. V. Sposob opredelenija antitel k Mikobak-terii lepry [The method for analysis of antibodies to Mycobacterium leprae]. RF patent, no. 2500423, 2013.
11. Yushin M. Yu., Davydov A. G., Anokhina V. V., Degtyarev O. V., Ibadulaev Z. Ya. Sravnitel'noe izuchenie soderzhanija immunoglobulinov klassa G v syvorotkah krovi donorov Astrahanskoj oblasti i bol'nyh leproj k speci-ficheskomu polusinteticheskomu antigenu Mycobacterium leprae - Dis-BSA i antigenu iz Mycobacterium lufu [The comparative investigation of immunoglobulin G content in serum of blood donors of the Astrakhan region and patients with lepra to specific semisynthetic antigen Mycobacterium leprae - Dis-BSA and antigen from Mycobacterium lufu]. Astrahanskij medicinskij zhurnal [Astrakhan Medical Journal], 2013, vol. 8, no. 2, pp. 93-96.
12. Yushin M. Yu., Maslov A. K., Bochanovskij V. A., Kalyanina O. V., Mikhajlova M. N. Biohimicheskoe i jelektronno-citohimicheskoe izuchenie DOFA-oksidaznoj aktivnosti u M. lufu [Biochemical and electronic-cytochemical study of DOPA-oxide activity in M. lufu] Tezisy dokladov itogovoj nauchnoj konferencii Astrahanskogo gosudarstvennogo universiteta [Abstracts of reports of concluding scientific conference of Astrakhan State Pedagogical University]. Astrakhan, 1997, p. 26.
13. Yushin M. Yu., Maslov A. K., Anokhina V. V. Sravnitel'naja jelektronno-citohimicheskaja harakteristika Mycobacterium leprae, Mycobacterium «lufu» i Mycobacterium tuberculosis [The comparative electron-cytochemical characteristics of Mycobacterium leprae, Mycobacterium lufu and Mycobacterium tuberculosis]. Vestnik novyh medicinskih tehnologij [Journal of new medical technologies], 2008, vol. 15, no. 3, pp. 9-10.
14. Chakrabarty A. N., Dastidar S. G. Correlation between occurance of leprosy and fossil fuels: Role of fossil fuels bacteria in the origin and global epidemiology of leprosy. Indian J. Exp. Biol., 1989, vol. 27, no.6, pp. 483-496.
15. Chakrabarty A. N., Dastidar S. G., Das S., Chaudhurry S. K. Repeated isolation of Nocardia like organisms from multibacillary cases of leprosy. Indian J. Lepr, 1987, vol. 59, pp. 247-262.
16. Cunanan A. Jr., ChanG. P., Douglas J. T. Risk of development of leprosy among Culion contacts / A. Jr. Cunanan. 15th Int. Leprosy Congress: abstracts. - Beijing, 1998, EP12, pp. 78A.
17. de Moura R. S., Calado K. L., Oliveira M. L. W., Buhrer-Sekula S. Leprosy serology using PGL-I: a systematic review. Rev. Soc. Bras. Med. Trop., 2008, vol. 41, (Suppl. II), pp. 11-18.
18. Oskam L., Slim E., Buhrer-Sekula S. Serology: recent developments, strengths, limitations and prospects: a state of the art overview. Lepr. Rev., 2003, vol. 74, pp. 196-205.
19. Spencer J. S., Brennan P. J. The role of Mycobacterium leprae phenolic glycolipid 1 (PGL-1) in serodiagno-sis and in the pathogenesis of leprosy. Lepr. Rev., 2011, vol. 82, no. 4, pp. 344-357.
20. Yushin M. Yu. A study of the biology of M. lufu and prospects for using it in leprosy investigations. Int. J. Lepr., 2000, vol. 68, no. 2, pp. 179-182.
