CC BY
13
13. Феденко, Е. С. Крапивница - актуальная проблема клинической аллергологии / Е. С. Фе-денко // Аллергология. - 2002. - № 4. - C. 31-35.
14. Хаитов, Р. М. Руководство по клинической иммунологии : иммунодиагностика заболеваний иммунной системы / Р. М. Хаитов. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 352 с.
15. Ярилин, А. А. Иммунология : учебник. / А. А. Ярилин. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 752 с.
16. Dierich, M. P. Structural and functional relationships among receptors and regulators of the complement system / M. P. Dierich, T. F. Schulz, A. Eigentler et al. // Mol. Immunol. - 1988. - Vol. 25, № 11. - P. 1043-1051.
Шапошникова Ксения Владимировна, врач-педиатр детского хирургического отделение № 2, ГБУЗ АО «Областная детская клиническая больница имени Н.Н. Силищевой», Россия, 414011, г. Астрахань, ул. Медиков, д. 6, тел.: (8512) 54-37-52, е-mail: shaposhnikova_ks@mail.ru.
Башкина Ольга Александровна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой факультетской педиатрии, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: (8512) 38-50-66, е-mail: agma@astranet.ru.
Логунов Олег Владимирович, заведующий клинико-диагностическим центром, ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского» Роспотребнад-зора, Россия, г. Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: (495) 452-18-16, е-mail: info@gabrich.com.
Кокуев Александр Викторович, кандидат медицинских наук, заместитель главного врача по медицинской части, ГБУЗ АО «Областная детская клиническая больница имени Н.Н. Силищевой», Россия, 414011, г. Астрахань, ул. Медиков, д. 6, тел.: (8512) 61-87-72, е-mail: odkb_2005@mail.ru.
УДК 616-002.73:612.017
© М.Ю. Юшин, А.Г. Давыдов, В.В. Анохина, О.В. Дегтярев, З.Я. Ибадулаев, 2013
М.Ю. Юшин1, А.Г. Давыдов1, В.В. Анохина1, О.В. Дегтярев12, З.Я. Ибадулаев1
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ КЛАССА G В СЫВОРОТКАХ КРОВИ ДОНОРОВ АСТРАХАНСКОЙ ОБЛАСТИ И БОЛЬНЫХ ЛЕПРОЙ К СПЕЦИФИЧЕСКОМУ ПОЛУСИНТЕТИЧЕСКОМУ АНТИГЕНУ MYCOBACTERIUM LEPRAE - DIS-BSA И АНТИГЕНУ ИЗ MYCOBACTERIUM LUFU
:ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, г. Астрахань 2ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России
Проведено сравнительное изучение наличия специфических антител к M. leprae у больных лепрой с регрессом заболевания и здорового населения Астраханской области - доноров крови к видоспецифическому полусинтетическому аналогу фенольного гликолипида-1 M. leprae - Dis-BSA и антигену из M. lufu. Исследование показало, что антитела класса G к Dis-BSA присутствуют в сыворотках крови у 51,1 %, а к антигену из M. lufu у 52,3 % доноров крови. Значительно более низкие показатели наличия антител зарегистрированы при обследовании больных лепрой с регрессом заболевания. На антиген Dis-BSA он составил 13,3 %, а на антиген из M. lufu - 17,8 %. Специфические антитела к M. leprae в сыворотках крови доноров свидетельствуют о контакте с возбудителем лепры и латентной иммунизации населения. Результаты ИФА с использованием тест-антигенов Dis-BSA и M. lufu коррелируют между собой (коэффициент корреляции - 0,72). Из этого следует, что препарат из M. lufu может быть использован в качестве индикаторного тест-антигена для определения антител к M. leprae в иммуноферментном анализе.
Ключевые слова: доноры крови, больные лепрой, иммуноферментный анализ, антиген Dis-BSA, антиген M. lufu, антитела к M. leprae, латентная иммунизация.
M.Yu. Yushin, |A.G. Davydov, V.V. Anohina, O.V. Degtyarov, Z.Yu. Ibadulaev
THE COMPARATIVE INVESTIGATION OF IMMUNOGLOBULIN CLASS G CONTENT IN SERUM OF DONORS BLOOD OF THE ASTRAKHANIAN REGION AND PATIENTS WITH LEPRA TO SPECIFIC SEMISYNTHETIC ANTIGENE MYCOBACTERIUM LEPRAE - DIS-BSA AND ANTIGENE FROM MYCOBACTERIUM LUFU
The comparative investigation of existance of specific antibodies to M. leprae in patients with lepra with regress of disease and healthy population of the Astrakhanian region - blood donors to videospecific semisynthetic analogue of phenol glicolipid-1 M. leprae - Dis-BSA and antigene from M. lufu was made. The study showed that antibodies of class G to Dis-BSA existed in blood serum in 51,1 %, but to antigene from M. lufu in 52,3 % of blood donors. The decreased data were found in patients with lepra of regressed period. It was 13,3 % to antigene Dis-BSA, and 17,8 % - to antigene from M. lufu. The specific antibodies to M. leprae in blood serum of donors proved the presence of contact with lepra stimulator and latent immunization of the population. The results of test with the usage of test-antigenes Dis-BSA and M. lufu correlated between each other (the coefficient - 0,72). The conclusion should be the following: the preparation from M. lufu may be used as indicator of test-antigene for determination of antibodies to M. leprae in immuno-enzyme analysis.
Key words: blood donors, leprosy patients, immuno-enzyme analysis, antigene Dis-BSA, antigene, M. lufu, antibodies to M. leprae, latent immunization.
Введение. В настоящее время сохраняет актуальность вопрос в отношении источников и путей передачи лепрозной инфекции. Эпидемическая ситуация по лепре в Российской Федерации характеризуется значительным снижением заболеваемости за последние 20 лет, хотя сохраняются регионы, в которых спорадически регистрируются новые случаи заболевания. К таким регионам, в частности, относится Астраханская область. Серологические тесты, направленные на выявление антител к фе-нольному гликолипиду-1 M. leprae (ФГЛ-1) или его полусинтетическому аналогу (Dis-BSA), можно использовать при постановке диагноза только в комплексе с клиническими и гистологическими данными, поскольку продукция антител при лепре наблюдается не только у больных лепрой и лиц, тесно контактирующих с ними, но и у остальной части населения. В ряде случаев отмечено, что серопози-тивность среди контактных не всегда выше, чем в общей популяции [3, 5], что дает основание для дальнейшего проведения сероэпидемиологических исследований.
Отсутствие воспроизводимых способов культивирования M. leprae, трудности, связанные с получением микобактерий из органов и тканей экспериментально зараженных животных и синтезом искусственных антигенов M. leprae, а также потребность в альтернативных тест-системах для определения антител к M. leprae предполагает поиск новых подходов к созданию антигенных препаратов. Разработка тест-системы с использованием препарата, получение которого было бы несложным и который обладал бы высокой специфичностью для детекции антител к M. leprae, не связанных с иммунным ответом на БЦЖ-вакцинацию и другие микобактериальные антигены, расширит имеющиеся возможности определения антител в крови. Таким препаратом может стать разработанный нами тест-антиген из Mycobacterium lufu (M. lufu). Культура M. lufu была получена НИИ по изучению лепры в 1981 г. от профессора J.K. Seydel (ФРГ) при содействии ВОЗ. M. lufu были впервые выделены из почвы в Заире в 1980 г. F. Portaels [6]. Они охарактеризованы как сапрофитные, медленнорастущие кислотоустойчивые микобактерии, обладающие чувствительностью к действию сульфоновых препаратов, сопоставимой с таковой у M. leprae [7, 8]. В наших предыдущих работах, в том числе и в рамках тестов, рекомендованных ВОЗ для идентификации M. leprae, было установлено, что M. lufu по ряду биологических свойств близки к M. leprae [1, 2, 9]. Совокупность характеристик, свидетельствующих о сходстве M. leprae и M. lufu, полученных в результате накопленных данных, позволяют продолжить изучение возможности использования антигена из M. lufu для детекции антител к M. leprae.
Цель: определить наличие антител класса G в сыворотках крови доноров и больных лепрой к специфическому полусинтетическому антигену M. leprae - Dis-BSA и антигену из культивируемых M. lufu.
Материалы и методы исследования. Материалом для исследования служили сыворотки крови от 88 доноров Астраханской области (эндемического по лепре региона) и 45 больных лепрой с регрессом заболевания на фоне противолепрозной химиотерапии, возрастная группа которых представлена лицами старше 70 лет. В качестве антигенных препаратов использовали: 1) Dis-BSA - полусинтетический антиген, полученный из банка ВОЗ, являющийся аналогом углеводного эпитопа ви-доспецифического антигена M. leprae - ФГЛ-1; 2) водную суспензию культивируемых на среде Ле-венштейна-Йенсена M. lufu, подвергнутую термической обработке.
Постановку твердофазного ИФА для определения антител класса G осуществляли по общепринятой методике. Лунки полистиролового планшета сенсибилизировали антигенами Dis-BSA и термо-обработанным из M. Lufu, соответственно. Исследуемые сыворотки разводили 1:3 0,02 М фосфатно-солевым буфером (рН-7,4) с 0,05 % твина-20. Учет результатов осуществляли на фотометре иммуно-ферментном планшетном ЭФОС 9305 (Россия) при длине волны 492 нм. За положительный результат считали образцы, показатель оптической плотности (ОП^) которых в 2,1 и более раз превышал
показатель отрицательного контроля (контроль конъюгата).
Результаты исследования и их обсуждение. Из 88 обследованных доноров крови положительные результаты ИФА с тест-антигеном из M. lufu, подвергнутых термической обработке, были выявлены у 46 (52,3 %) человек. При использовании в качестве тест-антигена Dis-BSA положительные результаты наблюдались у 45 (51,1 %) человек. Совпадение результатов тестирования по двум антигенам отмечено у 77 (87,5 %) доноров. У 6 (6,8 %) доноров выявлены антитела к антигену из M. lufU и не выявлены к антигену Dis-BSA. У 5 (5,7 %) доноров выявлены антитела к антигену Dis-BSA и не выявлены к антигену из M. lufU.
Из 45 обследованных больных лепрой с регрессом заболевания положительные результаты ИФА с тест-антигеном из M. lufu были зарегистрированы у 8 (17,8 %) человек, а при использовании в качестве тест-антигена Dis-BSA положительные результаты наблюдались у 6 (13,3 %) человек. Совпадение результатов тестирования по двум антигенам отмечено у 40 (88,9 %) больных. У 2 (4,4 %) больных выявлялись антитела к антигену из M. lufu и не выявлялись к антигену Dis-BSA, у 3 (6,7 %) больных выявлялись к Dis-BSA и не выявлены к антигену из M. lufu. Статистически установлено, что результаты ИФА с использованием в качестве тест-антигенов Dis-BSA и M. lufu, подвергнутых термической обработке, коррелируют между собой. Коэффициент корреляции (г) - 0,72.
Полученные данные подтверждают результаты наших предыдущих исследований и свидетельствуют о близости биологических свойств M. leprae и M. lufu. Препарат из M. lufu, подвергнутых термической обработке, может быть использован как индикаторный тест-антиген для определения антител к M. leprae.
Анализ литературы и собственный опыт позволяют высказаться в пользу того, что на данном этапе в серологических исследованиях при лепре для получения более полной информации об иммунном статусе следует использовать тест-системы с различными антигенами. В представленной работе показано, что результаты ИФА с использованием в качестве тест-антигенов M. lufu, подвергнутых термической обработке, и Dis-BSA коррелируют между собой. При этом предлагаемый способ обладает определенным преимуществом, заключающимся в использовании культивируемых мико-бактерий для получения антигенного препарата, что существенно упрощает процесс его приготовления. Термической обработкой материала достигается инактивация группоспецифических белковых компонентов, в то время как видоспецифические, представленные термоустойчивыми сахаридами, сохраняются и повышаются агрегационные свойства антигена [4]. Примененный антигенный препарат из M. lufu представляет собой индикаторный антиген, позволяющий говорить о наличии в циркулирующей крови антител к M. leprae.
Наличие в сыворотках крови здоровых доноров антител к специфическому антигену M. leprae (Dis-BSA) может быть обусловлено контактом с возбудителем лепры, что, возможно, указывает на процесс латентной иммунизации населения Астраханской области в условиях регистрации единичных случаев заболевания в течение последнего десятилетия. Ранее мы высказывали предположение о возможности существования внеорганизменной части популяции возбудителя лепры, чем и объясняем выработку антител к M. leprae у здорового населения. По сравнению с донорами крови существенно более низкий процент обнаружения антител в группе больных с регрессом заболевания обусловлен, возможно, пожилым возрастом данной группы обследованных. Полученные данные требуют дальнейшего глубокого изучения.
Выводы.
1. Результаты определения антител класса G в сыворотках крови больных лепрой с регрессом заболевания и доноров в ИФА с использованием в качестве тест-антигенов M. lufu, подвергнутых термической обработке, и к специфическому полусинтетическому антигену M. leprae - Dis-BSA коррелируют между собой.
2. Препарат из M. lufu, подвергнутых термической обработке, может быть использован в качестве индикаторного тест-антигена в ИФА для определения в сыворотке крови антител к M. leprae.
3. Обнаружение антител класса G к специфическому полусинтетическому антигену M. leprae -Dis-BSA в сыворотках крови здоровых доноров может быть обусловлено контактом с возбудителем лепры и, возможно, свидетельствует о латентной иммунизации населения.
Список литературы
1. Юшин, М. Ю. Биологические параллели Mycobaterium leprae и Mycobaterium lufu / М. Ю. Юшин // Вестник дерматологии и венерологии. - 2007. - № 6. - С. 37-41.
2. Юшин, М. Ю. Сравнительная электронно-цитохимическая характеристика Mycobacterium
leprae, Mycobacterium «lufu» и Mycobacterium tuberculosis / М. Ю. Юшин, А. К. Маслов, В.В. Анохина // Вестник новых медицинских технологий. - 2008. - № 3. - С. 9-10.
3. de Moura R. S. Leprosy serology using PGL-I: a systematic review / R. S. de Moura, K. L. Calado, M. L. W. Oliveira et al. // Rev. Soc. Bras. Med. Trop. - 2008. - Vol. 41 (Suppl. II). - P. 11-18.
4. Ireton, G. C. Identification of Mycobacterium tuberculosis antigens of high serodiagnostic value / G. C. Ireton, R. Greenwald, H. Liang et al. // Clinical and Vaccine Immunology. - 2010. - Vol. 17, № 10. -P.1539-1547.
5. Oskam, L. Serology : recent developments, strengths, limitations and prospects : a state of the art overview / L. Oskam, E. Slim, S. Buhrer-Sekula // Lepr. Rev. - 2003. - Vol. 74. - P. 196-205.
6. Portaels, F. Study of unclassified dapsone sensitive mycobacteria isolated from the environment in Zaire / F. Portaels // Ann. Soc. Belge Med. Trop. - 1980. - Vol. 60. - P. 381-386.
7. Portaels, F. Taxonomic studies of mycobacteria belonging to the «M. lufu» group / F. Portaels // XII International Leprosy Congress : Abstracts. - New Delhi, 1984. - IV/220 (A).
8. Seydel, J. K. Bacterial growth kinetics of «M.lufu» in the presence and absence of various drugs alone and in combination. A model for the development of combined chemotherapy against M. leprae / J. K. Seydel, E. C. Wempe // Int. J. Lepr. - 1982. - Vol. 50, № 1. - P. 20-30.
9. Yushin, M. Yu. A study of the biology of M. lufu and prospects for using it in leprosy investigations / Yushin M. Yu. // Int. J. Lepr. - 2000. - Vol. 68, № 2. - P. 179-182.
Юшин Михаил Юрьевич, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лабораторно-экспериментального отдела, ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, Россия, 414057, г. Астрахань, пр. Н. Островского, д. 3, тел.: (8512) 33-96-33, e-mail: niil@astmail.astranet.ru.
Давыдов Анатолий Георгиевич, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник отдела эпидемиологического мониторинга, диспансеризации и реабилитации больных лепрой, ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, Россия, 414057, г. Астрахань, пр. Н. Островского, д. 3, тел.: (8512) 33-96-33, e-mail: niil@astmail.astranet.ru.
Анохина Вера Викторовна, кандидат медицинских наук, научный сотрудник клинического отдела, ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, Россия, 414057, г. Астрахань, пр. Н. Островского, д. 3, тел.: (8512) 33-96-33, e-mail: niil@astmail.astranet.ru.
Дегтярев Олег Владимирович, доктор медицинских наук, профессор кафедры дерматовенерологии, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: (8512) 33-14-20. Ведущий научный сотрудник лабораторно-экспериментального отдела, ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, Россия, 414057, г. Астрахань, пр. Н. Островского, д. 3, тел.: (8512) 33-96-33, e-mail: niil@astmail.astranet.ru.
Ибадулаев Загид Якубович, аспирант, ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, Россия, 414057, г. Астрахань, пр. Н. Островского, д. 3, тел.: (8512) 33-96-33, e-mail: zagid30@rambler.ru.
УДК 616.89-008.447:615.272:616.45-001.1/.3 © А.Л. Ясенявская, М.А. Самотруева, С.А. Лужнова, 2013
А.Л. Ясенявская1, М.А. Самотруева1, С.А. Лужнова2
ВЛИЯНИЕ ЭМОКСИПИНА НА ПОВЕДЕНИЕ КРЫС-САМЦОВ В ТЕСТЕ «ОТКРЫТОЕ ПОЛЕ» В УСЛОВИЯХ ИММОБИЛИЗАЦИОННОГО СТРЕССА
:ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России 2ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, г. Астрахань
Изучено влияние синтетического антиоксиданта эмоксипина на поведение крыс-самцов на разных этапах постнатального онтогенеза в условиях иммобилизационного стресса. Психоэмоциональное состояние животных оценивали по результатам изучения поведения в тесте «Открытое поле». Показана способность эмоксипина оказывать в условиях иммобилизационного стресса анксиолитическое действие.
Ключевые слова: иммобилизационный стресс, эмоксипин, поведение.
