CC BY
11
Список литературы
1. Гусейнов, Т. С. Морфология тимуса при воздействии бальнеологических факторов / Т. С. Гусейнов, А. Э. Эседова. - Махачкала : ИД «Наука плюс», 2008. - 160 с.
2. Сапин, М. Р. Иммунная система человека / М. Р. Сапин, Л. Е. Этинген. - М. : Медицина, 1996. -
304 с.
Эседова Анжела Эседовна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры анатомии человека, ГБОУ ВПО «Дагестанская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 367000, г. Махачкала, пл. Ленина, д. 1, тел.: (8722) 67-49-03, е-mail: dgma@list.ru.
Гусейнов Тагир Сайдуллахович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой анатомии человека, ГБОУ ВПО «Дагестанская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, г. Махачкала, пл. им. В.И. Ленина, д. 1, тел.: 8-928-555-90-00, e-mail: tagirguseinov@mail.ru.
Гусейнова Сабина Тагировна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры анатомии человека, ГБОУ ВПО «Дагестанская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 367000, г. Махачкала, пл. Ленина, д. 1, тел.: (8722) 67-49-03, е-mail: dgma@list.ru.
Кадиев Анвар Шамильевич, ассистент кафедры анатомии человека, ГБОУ ВПО «Дагестанская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 367000, г. Махачкала, пл. Ленина, д. 1, тел.: (8722) 67-49-03, е-mail: dgma@list.ru.
УДК 616-002.73:612.017
© М.Ю. Юшин, А.Г. Давыдов, В.В. Анохина, О.В. Дегтярев, З.Я. Ибадулаев, 2012 М.Ю. Юшин1, А.Г. Давыдов1, В.В. Анохина1, О.В. Дегтярев12, З.Я. Ибадулаев1
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ КЛАССА G К СПЕЦИФИЧЕСКОМУ ПОЛУСИНТЕТИЧЕСКОМУ АНТИГЕНУ MYCOBACTERIUM LEPRAE В СЫВОРОТКАХ КРОВИ ДОНОРОВ АСТРАХАНСКОЙ ОБЛАСТИ (ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЕ СООБЩЕНИЕ)
:ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, г. Астрахань 2ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России
Для установления факта наличия специфических антител к Mycobacterium leprae (M. Leprae) у здорового населения - доноров крови Астраханской области в иммуноферментном анализе использовали тест-систему с антигеном, представленным дисахаридом, конъюгированным с бычьим сывороточным альбумином - полусинтетическим аналогом видоспецифического для M. leprae фенольного гликолипида-1. В результате проведенного исследования были обнаружены антитела класса G к специфическому полусинтетическому антигену M. leprae в сыворотках крови у 51,1 % обследованных доноров. Наличие специфических антител к M. leprae в сыворотках крови здоровых доноров может указывать на контакт с возбудителем лепры и на процесс латентной иммунизации населения.
Ключевые слова: доноры крови, иммуноферментный анализ, антитела к M. leprae, латентная иммунизация.
M.Yu. Yushin, A.G. Davyidov, V.V. Anohina, O.V. Degtyarev, Z.Ya. Ibadulaev
THE DEFINITION OF IMMUNOGLOBULIN G TO SPECIFIC SEMISYNTHETIC ANTIGENE MYCOBACTERIUM LEPRAE IN BLOOB SERUM OF DONEE IN THE ASTRAKHANIAN REGION (PRELIMINARY REPORT)
The test-system, with antigene represented by disacharide conjugated with bull serum albumin - semisynthetic analogue type-specific for M. leprae of phenol-glycolipid -1, was used to find out the fact of presence of specific antibodies to Mycobacterium leprae (M. leprae) in healthy population - blood donee of the Astrakhanian region in immunoenzyme analysis. In the result of the investigation there were found out the antibodies of class G to specific semisynthetic antigene M. leprae in the blood serum of 51,1% of observed persons. The presence of specific antibodies to M. leprae in the blood serum of healthy donee may show the contact with agent of lepra and the process of latent immunization of the population.
Key words: blood donee, immunoenzyme analysis, antibodies to M. leprae, latent immunization.
Введение. В 80-х гг. ХХ в. из M. leprae был выделен видоспецифический антиген - фенольный гликолипид-1 (ФГЛ-1), специфичность которого обусловлена уникальной структурой концевой углеводной детерминанты [7]. Показана способность связывания ФГЛ-1 в иммуноферментном анализе (ИФА) с антителами класса М в сыворотках крови больных лепрой [6]. В дальнейшем были синтезированы аналоги ФГЛ-1 на основе моно-, ди- и трисахаридной детерминант. Синтезированные сахариды были конъюгированы с бычьим сывороточным альбумином (BSA), полученные полусинтетические конъюгаты стали использовать в качестве антигенов в ИФА для выявления антител класса М к M. leprae у больных лепрой, контактных лиц и населения в эндемических регионах [1, 2, 3, 4, 8, 10, 11, 12].
Исследования, проведенные в эндемических по лепре странах, показали, что антительный ответ у больных лепрой существенно изменяется в зависимости от типа и формы заболевания. При многобактериальных формах лепры от 75 до 100 % больных серопозитивны, в то время как при малобактериальных формах лишь у 15-40 % больных обнаруживаются антитела к ФГЛ-1. Следует отметить, что серопозитивность в эндемических по лепре регионах отмечается не только у контактных лиц, но и среди населения, не имеющего непосредственного контакта с больными лепрой. При этом не всегда прослеживается взаимосвязь между заболеваемостью и инфицированностью [14, 15].
Цель: установить факт наличия специфических антител к M. leprae у здорового населения -доноров крови Астраханской области.
Материалы и методы. Для определения специфических антител к M. leprae использовали Dis-BSA - полусинтетический антиген, полученный из банка ВОЗ, являющийся аналогом углеводного эпитопа видоспецифического антигена M. leprae - ФГЛ-1.
Постановку ИФА осуществляли на полистироловых планшетах для иммунологических реакций однократного применения («Медполимер», г. Санкт-Петербург ТУ 64-2-375-86). Лунки полистиролового планшета сенсибилизировали антигеном Dis-BSA в течение 18 часов при температуре 4° С в карбонат-бикарбонатном буфере рН 9,25 ± 0,25 (1,18 г Na2CO3; 3,47 г NaHCO3 и 0,2 г NaN3 в 1 л дистиллированной воды) из расчета 0,1 мкг/мл в объеме 0,1 мл на 1 лунку. Затем планшет отмывали 3 раза по 0,3 мл 0,02 М фосфатно-солевым буфером (рН = 7,4) с добавлением 0,05 % твина-20 с помощью автоматического промывателя планшет (ПП2 428, г. Дубна). Сыворотки разводили 1 : 3 0,02 М фос-фатно-солевым буфером (рН = 7,4) с 0,05 % твина-20 и вносили в лунки планшета в дубле. Отрицательным контролем (контроль конъюгата) служили 4 лунки, в которые вносили 0,02 М фосфатно-солевой буфер (рН = 7,4) с 0,05 % твина-20. Планшет инкубировали при 37° С в течение 1 часа, после чего повторяли процесс отмывки 0,02 М фосфатно-солевым буфером с 0,05 % твина-20. Затем в каждую лунку добавляли по 0,1 мл конъюгата кроличьих антител к IgG человека, меченных пероксида-зой хрена (Merck, Германия) в разведении 1 : 2000 и инкубировали в течение 1 часа при 37° С. После пятикратной отмывки 0,02 М фосфатно-солевым буфером (рН=7,4) с 0,05 % твина-20 и двукратной дистиллированной водой вносили субстратную смесь - 0,04 % ортофенилендимина (ОАО «Шосткин-ский завод химических реактивов») и 0,03 % перекиси водорода. Планшет выдерживали при комнатной температуре в темноте в течение 20 минут, после чего ферментативную реакцию останавливали внесением в каждую лунку 0,05 мл 2М H2SO4.
Учет результатов осуществляли на фотометре иммуноферментном планшетном (ЭФОС 9305 ОАО «МЗ «Сапфир») при длине волны 492 нм.
За положительный результат считали образцы, показатель оптической плотности (ОП492) которых в 2,1 и более раз превышал показатель отрицательного контроля.
Результаты и их обсуждение. Проведенное исследование образцов сывороток крови от 88 доноров Астраханской области показало наличие положительных результатов ИФА на присутствие специфических антител к M. leprae (Dis-BSA) у 45 человек, что составляет 51,1 %.
Рассматривая лепру как сапрозооноз, мы не исключаем возможности существования внеорга-низменной части популяции возбудителя лепры. Еще с конца XIX века высказывалось предположение о почве как альтернативном источнике инфицирования возбудителем лепры [5]. В настоящее время продолжают накапливаться данные о том, что не только человек является источником возбудителя лепры. Было установлено присутствие жизнеспособных M. leprae в образцах почвы как в регионах постоянного проживания больных лепрой (55 %), так и в областях, где больные лепрой отсутствуют (15 %) [13]. A.N. Chacrabarty и S.G. Dastidar выявили связь распространенности лепрозной инфекции у человека и животных с наличием нефтегазовых месторождений и другого ископаемого топлива в эндемических регионах Азии, Африки, Южной Америки [9].
Заключение. Возможно, внеорганизменная часть популяции возбудителя лепры обеспечивает существование эндемических по лепре регионов даже при отсутствии на данной территории больных
лепрой людей и животных. Из окружающей среды возбудитель может распространяться среди населения и обусловливать процесс проэпидемичивания, что, вероятно, косвенно подтверждается наличием антител к специфическому антигену M. leprae. Присутствие в сыворотках крови здоровых доноров антител к специфическому антигену M. leprae (Dis-BSA) может указывать на контакт населения Астраханской области с возбудителем лепры, стимулирующим выработку специфических антител, вероятно, свидетельствуя о процессе латентной иммунизации.
Список литературы
1. Дегтярев, О. В. Иммуноэпидемиологический контроль в условиях спорадической заболеваемости лепрой : автореф. дис. ... канд. мед. наук / О. В. Дегтярев. - М., 1998. - 18 с.
2. Дегтярев, О. В. Прогностическое значение серологического обследования при лепре / О. В. Дегтярев, М. Н. Дячина, В. В. Дуйко и др. // Проблемы туберкулеза. - 1995. - № 2. - С. 35-37.
3. Дячина, М. Н. Диагностические тест-системы на основе иммуноферментного метода при лепре / М. Н. Дячина, Л. Т. Сухенко, А. А. Ющенко и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1985. - № 1. - С. 64-68.
4. Иммунологическое обследование контактных по лепре лиц : метод. рекомендации / сост. М. Н. Дячина, А. А. Ющенко, О. В. Дегтярев и др. - Астрахань : Научно-исследовательский институт по изучению лепры, 1994. - 12 с.
5. Решетило, Д. Ф. Проказа / Д. Ф. Решетило. - СПб. : Издание К.Л. Риккера, 1904. - 515 с.
6. Brennan, P. J. New found glycolipid antigens of mycobacteria / P. J. Brennan // Microbiology. -1984. - Vol. 2. - P. 366-370.
7. Brennan, P. J. Evidence for species-specific lipid antigens in Mycobacterium leprae / P. J. Brennan, W. W. Barrow // Int. J. Lepr. - 1980. - Vol. 48. - P. 382-387.
8. Brett, S. J. Use of synthetic and immunodominant epitope of phenolic glycolipid-1 in the serology of leprosy / S. J. Brett, S. N. Payne, J. Gigg et al. // Clin. exp. Immunol. - 1986. - Vol. 64. - P. 476-479.
9. Chacrabarty, A. N. Is soil an alternative source of leprosy infection? / A. N. Chacrabarty, S. G. Dastidar // Acta. Leprologica. - 2002. - Vol. 12. - P. 79-84.
10. Cho, N. S. Use of an artificial antigen containing the 3,6-di-O-methyl D-glycopyranosyl epitope for the serodiagnosis of leprosy / N. S. Cho, T. Fujiwara, S. W. Hunter et al. // J. infect. Dis. - 1984. -Vol. 150. - P. 311-322.
11. Harboe, M. Secreted proteins of Mycobacterium leprae / M. Harboe, H. G. Wiker // Scand. J. Immunol. - 1998. - Vol. 48. - P. 577-584.
12. Hussain, R. Quantitation of IgM antibodies to the M. leprae synthetic dissacharide can predict early bacterial multiplication in leprosy / R. Hussain, S. Jamil, A. Kifayet et al. // Int. J. Lepr. - 1990. -Vol. 58. - P. 491-502.
13. Lavania, M. Detection of viable Mycobacterium leprae in soil samples : insights into possible sources of transmission of leprosy / M. Lavania, K. Katoch, V. M. Katoch, A. K. Gupta et al. // Infect. Genet. Evol. - 2008. - Vol. 8. - P. 627-631.
14. Moura, R. S. Leprosy serology using PGL-I : a systematic review / R. S. Moura, K. L. Calado, M. L. Oliveira, S. Buhrer-Sekula // Revta Soc. Bras. Med. Trop. - 2008. - Vol. 41. - P. 11-18.
15. Oskam, L. Serology : recent developments, strengths, limitations and prospects : a state of the art overview / L. Oskam, E. Slim, S. Buhrer-Sekula // Lepr. Rev. - 2003. - Vol. 74. - P. 196-205.
Юшин Михаил Юрьевич, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лабораторно-экспериментального отдела, ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, Россия, 414057, г. Астрахань, пр. Н. Островского, д. 3, тел.: (8512) 33-96-33, e-mail: niil@astmail.astranet.ru.
Давыдов Анатолий Георгиевич, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник отдела эпидемиологического мониторинга, диспансеризации и реабилитации больных лепрой, ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, Россия, 414057, г. Астрахань, пр. Н. Островского, д. 3, тел.: (8512) 33-96-33, e-mail: niil@astmail.astranet.ru.
Анохина Вера Викторовна, кандидат медицинских наук, научный сотрудник клинического отдела, ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, Россия, 414057, г. Астрахань, пр. Н. Островского, д. 3, тел.: (8512) 33-96-33, e-mail: niil@astmail.astranet.ru.
Дегтярев Олег Владимирович, доктор медицинских наук, профессор кафедры дерматовенерологии, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: (8512) 33-14-20. Ведущий научный сотрудник лабораторно-экспериментального отдела, ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, Россия, 414057, г. Астрахань, пр. Н. Островского, д. 3, тел.: (8512) 33-96-33, e-mail: niil@astmail.astranet.ru.
Ибадулаев Загид Якубович, аспирант, ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России, Россия, 414057, г. Астрахань, пр. Н. Островского, д. 3, тел.: (8512) 33-96-33, e-mail: zagid30@rambler.ru.
