CC BY
23
Твердую фазу сенсибилизировали моноклональными анти-Иг Е антителами, клон РИ-8Е-5Д4 производства Санкт-Петербургского НИРРИ. Дозу моноклональных анти-Иг Е антител на твердой фазе подбирали таким образом, чтобы и в этой референс-системе, и в амброзий-ной оценка уровня чувствительности больного к данному аллергену была одинаковой. При сравнении уровней сигналов стандартов Иг Е в обеих референс-систе-мах не выявлено достоверных различий ни в одном из разведений стандартов, что позволило сделать вывод об адекватности двух вариантов референс-систем в тесте ИФА.
Парадоксальные реакции иммунокомпетентных клеток на гидрокортизон in vitro при экстремальных воздействиях или терапии глюкокортикоидами
Горелов А.И.,Волчек И. А.,Тимофеева H.H.
Научно-производственный центр медицинской биотехнологии М3 РФ
Взаимодействие элементов гипофизарно-адреналовой оси и системы иммунитета является одним из основных механизмов по поддержанию антигено-струк-турного гомеостаза и имеет большое значение для обеспечивания нормальной жизнедеятельности организма. Исследование этих взаимодействий весьма важно при изучении различных заболеваний и патологических состояний.
В разное время и по различным причинам нами предпринято исследование функциональных характеристик иммунокомпетентных клеток в ответе на гидрокортизон in vitro в группах пациентов, находящихся в условиях длительного воздействия повышенной концентрации ппюкокортикоидных гормонов.Одну из групп составили военнослужащие из состава действующих войск на территории Афганистана, другую группу - больные бронхиальной астмой, получавшие терапию глюкокор-тикоидами. Результаты сравнивали с показателями здоровых доноров. Мононуклеарные клетки периферической крови инкубировали 15 минут при 37 градусах С в присутствии гидрокортизона 0,001 мкг/мл. После этого оценивали уровень экспрессии поверхностных Е-рецеп-торов и CD4 антигенов, а также ответ в реакции БТЛ на ФГА,
Установлено, что у 79,9% пациентов, находившихся в экстремальных условиях, и у 46,1% больных реакция на гидрокортизон инвертирована, что выражалось в увеличении экспрессии поверхностных рецепторов и в усилении ответа на ФГА, тогда как в контроле данные показатели были ингибированы. Механизм данного явления требует дальнейшего изучения и, по всей видимости, связан с нарушением синтеза и/или истощением пула внутриклеточнх глюкокортикоидных рецепторов.
Исследование напряженности иммунитета против дифретии и столбняка у лиц с аллергическими заболеваниями при вакцинопрофилактике
Грек Е. А.
Поликлиника ГУВД Санкт-Петербурга и ЛО Санкт-Петербург, Россия
Вакцинопрофилактика АДС-М анатоксином взрослого населения широко применяется в настоящее время. Известно, что для предотвращения развития токсических форм дифтерии необходимо привить не менее 70% контингента. Однако нередки случаи, когда некоторые врачи продолжают широко отводить от вакцинации против дифтерии и столбняка лиц, нуждающихся в иммунизации. И это—несмотря на то что, во-первых, в 93 -94 годах отмечался подъем заболеваемости по дифтерии, сопровождающийся, довольно часто, случаями летального исхода непривитых взрослых. Во-вторых, сам по себе АДС-М анатоксин является малореактогенным препаратом, и побочные реакции с осложнениями встречаются редко.
Принимая во внимание разнообразие аллергических заболеваний по своей структуре и их сочетание друг с другом, практические врачи сталкиваются с затруднениями по проведению вакцинопрофилактики АДС-М анатоксином у взрослых, в результате чего иммунизация откладывается на неопределенный срок, и они оказываются не защищенными перед инфекцией.
Было проведено серологическое обследование на напряженность иммунитета против дифтерии и столбняка до и после вакцинопрофилактики. При обследовании до иммунизации были выявлены лица с титрами ниже 1:40 для дифтерии, а для столбняка ниже 1:20, которые подлежали 3 -кратной иммунизации АДС-М анатоксином. Первые две вакцинации проведены 40 пациентам. Ревакцинация была сделана 20 лицам из этой группы и 20 больным, имевшим две вакцинации в анамнезе. Иммунизацию осуществляли обычным АДС-М анатоксином не ранее чем через 1,5 месяца после исчезновения клинических симптомов обострения аллергических заболеваний и не позже чем за 1,5 месяца до сезона привычных обострений. Учитывалась тяжесть течения заболевания, в связи с чем назначалась медикаментозная терапия до и после вакцинопрофилактики, что способствовало неосложненному течению аллергических заболеваний.
Серологические обследования на напряженность иммунитета против дифтерии и столбняка, проводившиеся через 2 месяца после второй вакцинации АДС-М анатоксином показали, что противодифтерийные антитела вырабатывались в титрах, средний показатель которых 1:160, а противостолбнячные антитела—в титрах 1:320. Окончательные результаты исследования напряженности иммунитета против дифтерии и столбняка, т. е. уже после ревакцинации АДС-М анатоксином спустя 2 месяца, позволили выявить противодифтерийные антитела в более высоких
тиграх, средний показатель которых составил 1:640, а противостолбнячные антитела— в титрах 1: 1280.
У этих пациентов после второй иммунизации АДС-М анатоксином продуцируются протективные антитела п титрах, способных защитить от дифтерии и столбняка. А после ревакцинации АДС-М анатоксином отмечается дальнейшее повышение уровня поствакциналыюго иммунитета, и анти тела против этих инфекций обнаруживаются в высоких протективных титрах.
Следовательно, вакцинацию взрослого населения с различными аллергическими заболеваниями, особенно улиц из групп повышенного риска заражения дифтерией н столбняком, целесообразно осуществлять на фоне медикаментозной терапии, с учетом тяжести течения аллергического заболевания.
Моноклональные антитела и тест-системы для выявления секреторного 1дА и свободного секреторного компонента
Грязева И.В., Климович В. Б.
Центральный научно-исследовательский решпгенорадиологический институт М3 РФ Санкт-Петербург
Секреты слизистых оболочек и экзокринных желез, наряду с секреторным 1цА (б^А), содержат составляющие его молекулы: свободный секреторный компонент (БС) и сывороточный 1”А. Количественные соотношения между тремя указанными компонентами могут изменяться в зависимости от строения и состояния синтезирующих их тканей. Поэтому для выявления каждого из них требуются стандартные и высокоспецифнчные реагенты. На молекуле БС обнаружены 4 антигенные детерминанты (Вгапс12ае» Р., 1975). Две из них (А1 и А2), экспрессированы как на свободном БС, так и на БС, входящем в состав б^А, т. е. являются для них общими. Третья детерминанта (I) скрыта в молекуле б^А, экспрессирована только на свободном БС и, следовательно, специфична для него. Четвертая детерминанта (С)— конформационная. Она экспрессирована наиболее сильно тогда, когда БС связан с молекулой ^А. Таким образом, антигенная структура БС позволяет получать антитела, распознающие этот белок либо в свободном состоянии, либо в составе молекулы б1цА.
Целыо настоящей работы было получение моноклональных антител (МКАТ) против БС и отбор среди них реагентов, дискриминирующих свободную и связанную формы этого белка.
Для создания гибридом были использованы лимфоциты мышей, иммунизированных порознь препаратами б^А или изолированного БС. Было получено 28 МКАТ, взаимодействующих с б^А (против детерминант А1 и А2), и 10 МКАТ, реагирующих со свободным БС (против детерминанты 1). Испытания МКАТ в двухде-терминантных системах детекции БС и э^А позволили отобрать реагенты с оптимальным сочетанием свойств,
и на их основе создать две иммуноферментные тест-си-стемы.
Первая из них служит для определения концентрации slgA. Она включает в себя иммобилизованное на твердой фазе МКАТ, взаимодействующее с антигенной детерминантой. обшей для SC и slgA ( продукт штамма 5D8). Для выявления фиксированного па твердой фазе slgA используется меченое пероксидазой МКАТ, специфичное к альфа-цепи. Порог чувствительности выявления slgA с помощью данной системы составляет 5 нг/мл.
Вторая тест-система предназначена для определения концентрации свободного БС. На твердой фазе иммобилизовано МКАТ, распознающее только свободный БС (продукт клона 6ВЗ). Для выявления фиксированного па твердой фазе БС используется упомянутое выше МКАТ 5D8 в виде конъюгата с пероксидазой. Порог детекции свободного БС составляет около 100 нг/мл.
Специфичность и чувствительность иммунофермен-гных тест-систем на основе полученных МКАТ позволяет проводить количественное определение slgA и свободного БС в сыворотке крови и секретах слизистых покровов и экзокринных желез.
Характер иммунного дисбаланса у коренных жителей Севера России
Евсеева И.В, Добродеева JI.K.
Архангельская Государственная медицинская академия, Архангельский Отдел экологической физиологии человека Института физиологии КомиНЦУрО РАН г. Архангельск, Россия
Территория Крайнего Севера России, в том числе Ненецкого Автономного Округа (Н АО), является экологически крайне неблагоприятной, что сказывается па состоянии иммунной системы его жителей.
Современные возможности фенотипирования нмму-нокомпетентных клеток с использованием широкого спектра моноклональных антител CD позволили нам углубить имеющиеся представления о характере иммунных лис-балансов у коренных жителей Севера России. Показатели клеточного и гуморального иммунитета были определены у 90 взрослых ненцев, коренных жителей Ненецкого Автономного Округа, не имевших хронических заболеваний и не предъявлявших жалоб па момент обследования. При сравнении с показателями иммунограммы здоровых русских жителей Архангельской области (Щеголева Л.С., 1996), у ненецких аборигенов в средних числах установлено более низкое содержание лимфоцитов (2,09 х 10 кл/л, р<0,05) — в основном, за счет T-фракции. Так, уровень клеток-носителей CD5 т составил лишь 0,61x10 кл/л (р<0,01), а клеток-носителей CD3' — 0,59 х 10 кл/л (р<0,01). Соотношение субпопуляций Т-лимфоцитов у ненецкого населения также отличалось от таковог о у русских. Отмечено значительно более высокое содержание клеток - носителей CD8' (0,58 х 10 кл/л, р< 0,01 ) при прак-
