CC BY
22
Заключение. Предлагаемая схема иммунизации позволяет в короткий период (18 дней) получить О-антисы-норотки к У еШетсоНИса в титрах 1:3200-1:6400, пригодные для диагностического серотипиропания. Обнаруженное сходство антигенов У еШегосоНИса 1Р846(0:18) м У. р±-еш1о1иЬегси1ох1х 1 серовара представляет интерес, поскольку У.етегосоКиса серовара 0:18 относится к клиническим штаммам I биотипа, вызывающим тяжелую форму гастроэнтерита в Америке.
Определение абсолютного количества аллергенспецифических Иг Е-антител методом ИФА
Головин Г.Г., Ермолов В.В., Герпазнсва В.Б.,
Райкис Б.Н.
ФГУП "Аллерген", г. Ставрополь
При разработке иммуноферментиых тест-систем (ИФТС) для определения аллергенспецифических Иг Е-антител к пыльце злаковых трав и деревьев оценку уровня Иг Е-антител к этим аллергенам в сыворотках больных и здоровых людей проводили в сравнении со стандартизованной сывороткой больных, чувствительных к указанным аллергенам. В стандартизованной сыворотке содержание аллергенспецифических Иг Е соответствовало 4 классу, определенному в радиоаллергосорбент-иом тесте. Для отработки параметров референс-систе-мы необходимо было провести первичную стандартизацию сывороток, уровень Иг Е которых соответствовал 4 классу в РАСТ, т. е. определить абсолютное количество аллергенспецифических Иг Е-антител. При этом мы использовали ИФТС для определения общего Иг Е и аллергенспецифических Иг Е-антител.
На первом этапе в лунках стрипов, сенсибилизированных соответствующими аллергенами, инкубировали сыворотки крови больных с высокой чувствительностью к данному аллергену. После инкубации с аллергосорбентом подсчитывали количество аллергенспецифических Иг Е, связавшихся с аллергеном, и тех, что остались в растворе. Для оценки количества Иг Е-антител, связавшихся с аллергеном, их элюировали с поверхности твердой фазы путем добавления в лунки фосфатносолевого буферного раствора рЫ 11.0. Далее элюаты отбирали из лунок, и содержание ИгЕ в них определяли иммуноферментным анализом.
После удаления элюатов подсчитывали количество оставшихся на поверхности лунок неэлюированных Иг Е-антител. Количество неэлюированных Иг Е-аитител определяли путем сравнения уровней сигналов иммуно-ферментной реакции исследуемых образцов и разных концентраций стандарта общего ИгЕ на калибровочной кривой.
Таким образом, процедура определения абсолютного количества аллергенспецифических Иг Е-антител методом элюции с твердофазного аллергена состоит из
определения количества аллергенспецифических Иг Е. зафиксированных на аллергене, и Иг Е-антител, не связавшихся с аллергеном.
Разработка референс-системы в иммуноферментном тесте для определения аллергенспецифических Иг Е-антител
Головин Г.Г., Ермолов В.В., Гсрвазиепа В.Б.,
РаПкис Б.Н.
ФГУП “Аллерген" г. Ставрополь
В разработанной ранее и выпускаемой в промышленных масштабах иммуноферментной тест-системе для определения аллергенспецифических Иг Е-антител в качестве референс-системы использовали твердую фазу с аллергеном амброзии и пул сывороток крови с максимально высоким уровнем Иг Е-антител, специфичных к амброзии. Применение такой референс-системы обусловлено широким распространением амброзии, особенно в южных регионах страны, наличием большого количества больных, чувствительных к амброзии и имеющих высокий уровень аллергенспецифических Иг Е-антител в крови. Но эта референс-система имеет существенный недостаток, который заключается в том, что для изготовления референс-препарата необходимо использование сыворотки больных с высоким уровнем Иг Е-антител, соответствующем 4 классу в радиоаллергосорбентном тесте (РАСТ). Такая концентрация аллергенспецифических Иг Е-антител выявляется в крови у относительно небольшого количества пациентов. Это существенно усложняет выпуск данного реагента в промышленных масштабах. Поэтому нами была поставлена задача: разработать референс-систему на основе более доступных реагентов.
С этой целью мы попытались обосновать возможность замены в рефереис-системе сыворотки больных с высоким уровнем Иг Е-антител, специфичных к амброзии на пул сывороток с высоким уровнем общего Иг Е, а аллергены на твердой фазе - на моноклональные анти-Иг Е антитела. Такая замена теоретически обоснована тем, что обе реакции - между аллергеном на твердой фазе и аллергенспецифнческими антителами п первом случае и между моноклональными анти-Иг Е антителами, иммобилизованными на твердой фазе и общим Иг Е во втором случае проявляются одним и тем же обнару-ж и ва ю щи м р еа ге нто м - ко и ь ю гатом м о но кл о нал ь и ы х ан ги-Иг Е антител и фермента. В качестве стандарта в разрабатываемой рефереис-системе брали пул сывороток больных аллергическими заболеваниями с общим уровнем ИгЕ 200-8000 КЕ/л, который разводили до содержания ИгЕ 75-100 КЕ/л. Концентрацию Иг Е в сыворотках, пуле и приготовленных образцах стандартов определяли набором IgE EIA kit фирмы Эббот (США). Стандарт использовали цельным и разводили в 5; 25 и 50 раз.
Твердую фазу сенсибилизировали моноклональными анти-Иг Е антителами, клон РИ-8Е-5Д4 производства Санкт-Петербургского НИРРИ. Дозу моноклональных анти-Иг Е антител на твердой фазе подбирали таким образом, чтобы и в этой референс-системе, и в амброзий-ной оценка уровня чувствительности больного к данному аллергену была одинаковой. При сравнении уровней сигналов стандартов Иг Е в обеих референс-систе-мах не выявлено достоверных различий ни в одном из разведений стандартов, что позволило сделать вывод об адекватности двух вариантов референс-систем в тесте ИФА.
Парадоксальные реакции иммунокомпетентных клеток на гидрокортизон in vitro при экстремальных воздействиях или терапии глюкокортикоидами
Горелов А.И.,Волчек И. А.,Тимофеева Н.Н.
Научно-производственный центр медицинской биотехнологии М3 РФ
Взаимодействие элементов гипофизарно-адреналовой оси и системы иммунитета является одним из основных механизмов по поддержанию антигено-струк-турного гомеостаза и имеет большое значение для обеспечивания нормальной жизнедеятельности организма. Исследование этих взаимодействий весьма важно при изучении различных заболеваний и патологических состояний.
В разное время и по различным причинам нами предпринято исследование функциональных характеристик иммунокомпетентных клеток в ответе на гидрокортизон in vitro в группах пациентов, находящихся в условиях длительного воздействия повышенной концентрации ппюкокортикоидных гормонов.Одну из групп составили военнослужащие из состава действующих войск на территории Афганистана, другую группу - больные бронхиальной астмой, получавшие терапию глюкокортикоидами. Результаты сравнивали с показателями здоровых доноров. Мононуклеарные клетки периферической крови инкубировали 15 минут при 37 градусах С в присутствии гидрокортизона 0,001 мкг/мл. После этого оценивали уровень экспрессии поверхностных Е-рецеп-торов и CD4 антигенов, а также ответ в реакции БТЛ на ФГА,
Установлено, что у 79,9% пациентов, находившихся в экстремальных условиях, и у 46,1% больных реакция на гидрокортизон инвертирована, что выражалось в увеличении экспрессии поверхностных рецепторов и в усилении ответа на ФГА, тогда как в контроле данные показатели были ингибированы. Механизм данного явления требует дальнейшего изучения и, по всей видимости, связан с нарушением синтеза и/или истощением пула внутриклеточнх глюкокортикоидных рецепторов.
Исследование напряженности иммунитета против дифретии и столбняка у лиц с аллергическими заболеваниями при вакцинопрофилактике
Грек Е. А.
Поликлиника ГУВД Санкт-Петербурга и ЛО Санкт-Петербург, Россия
Вакцинопрофилактика АДС-М анатоксином взрослого населения широко применяется в настоящее время. Известно, что для предотвращения развития токсических форм дифтерии необходимо привить не менее 70% контингента. Однако нередки случаи, когда некоторые врачи продолжают широко отводить от вакцинации против дифтерии и столбняка лиц, нуждающихся в иммунизации. И это—несмотря на то что, во-первых, в 93 -94 годах отмечался подъем заболеваемости по дифтерии, сопровождающийся, довольно часто, случаями летального исхода непривитых взрослых. Во-вторых, сам по себе АДС-М анатоксин является малореактогенным препаратом, и побочные реакции с осложнениями встречаются редко.
Принимая во внимание разнообразие аллергических заболеваний по своей структуре и их сочетание друг с другом, практические врачи сталкиваются с затруднениями по проведению вакцинопрофилактики АДС-М анатоксином у взрослых, в результате чего иммунизация откладывается на неопределенный срок, и они оказываются не защищенными перед инфекцией.
Было проведено серологическое обследование на напряженность иммунитета против дифтерии и столбняка до и после вакцинопрофилактики. При обследовании до иммунизации были выявлены лица с титрами ниже 1:40 для дифтерии, а для столбняка ниже 1:20, которые подлежали 3 -кратной иммунизации АДС-М анатоксином. Первые две вакцинации проведены 40 пациентам. Ревакцинация была сделана 20 лицам из этой группы и 20 больным, имевшим две вакцинации в анамнезе. Иммунизацию осуществляли обычным АДС-М анатоксином не ранее чем через 1,5 месяца после исчезновения клинических симптомов обострения аллергических заболеваний и не позже чем за 1,5 месяца до сезона привычных обострений. Учитывалась тяжесть течения заболевания, в связи с чем назначалась медикаментозная терапия до и после вакцинопрофилактики, что способствовало неосложненному течению аллергических заболеваний.
Серологические обследования на напряженность иммунитета против дифтерии и столбняка, проводившиеся через 2 месяца после второй вакцинации АДС-М анатоксином показали, что противодифтерийные антитела вырабатывались в титрах, средний показатель которых 1:160, а противостолбнячные антитела—в титрах 1:320. Окончательные результаты исследования напряженности иммунитета против дифтерии и столбняка, т. е. уже после ревакцинации АДС-М анатоксином спустя 2 месяца, позволили выявить противодифтерийные антитела в более высоких
