CC BY
22
ная инфекция, подтвержденная выявлением IgG антител к вирусам простого герпеса I и II типа, приводит к выраженному истощению продукции интерферонов, что способствует более тяжелому течению основного заболевания.
Динамика иммунологических показателей при проведении сублингвальной специфической иммунотерапии и их сравнительный анализ у детей с атопической бронхиальной астмой
Геворкян А.К., Ботвиньева В.В., Балаболкин И.И.
НИИ педиатрии НЦЗДРАМН Москва
В настоящее время большое значение имеет оценка иммунного статуса у детей, страдающих бронхиальной астмой, так как развитие этого заболевания у детей определяют иммунологические механизмы.
При проведении специфической иммунотерапии (СИТ) наиболее часто используется парентеральный способ введения причинно-значимых аллергенов, имеются сообщения об эффективности эндоназальной и перорапьной иммунотерапии. Сообщения же о проведении сублингвальной иммунотерапии единичны, и клинико-иммунологическая эффективность данного метода лечения остается малоизученной.
Целью работы явилось изучить клинико-иммуноло-гическую эффективность сублингвальной СИТ у детей с атопической бронхиальной астмой.
В задачи исследования входило изучение состояния гуморального и клеточного иммунного ответа слизистых оболочек у детей с атопической бронхиальной астмой при проведении СИТ парентеральным и сублингвальным методами.
Из 140 больных 109 получили СИТ сублингвальным способом, а 31 - парентеральным.
Определение уровней IL-2, IL-6 и уровня общего IgE проводилось методом ИФА “ELISA”, a IgG, его субклассов IgG 1, IgG2, IgG3, IgG4 и SIgA методом радиальной иммунодиффузии по Mancini et al.
Полученные данные свидетельствуют о том, что проведение сублингвальной СИТ приводит к достоверному повышению уровня SIgA (р<0,05) в слюне по сравнению с исходными показателями, что может служить критерием проводимого лечения.
Продукция IL-2 на фоне сублингвальной СИТ достоверно повышалось (р^0,02), а уровень IL-6 не изме-янялся, что может свидетельствовать об активации Т-лимфоцитов. Лечебный эффект сублингвальной иммунотерапии может быть обусловлен отмеченным повышением уровней IgG и IgG4 в крови и секреторных IgAe секрете слизистых, а также повышением IL-2 ответа.
Моноспецифические О-сыворотки для диагностики Yersinia enterocoiitica
Гефан Н.Г., Андреевская Н.М., Климов В.Т., Каретникова Э.С.
Научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока •
Иркутск, Россия
Введение. Одной из главных причин, затрудняющих диагностику иерсиниозов и эпидемиологический мониторинг, является отсутствие доступных коммерческих О-ан-тисывороток для внутривидового типирования иерсиний.
Цели и задачи. Целью настоящего исследования являются разработка надежных способов получения диагностических агглютинирующих кишечно-иерсиниозных О-сывороток для внутривидового типирования и изучение антигенного родства У. enterocoiitica и У. pseudotuberculosis.
Материалы и методы. Для получения моноспеци-фических О-сывороток использовали двенадцать референтных штаммов К enterocoiitica: IP 134, IP 124, IP500, IP480, IP553, IP 102, IP846, IP845, IP1110, IP 1367, IP106, IP383 (Институт Пастера, Национальный Центр Yersinia, Париж). Бактериальную массу получали путем культивирования на казеиново-дрожжевом агаре при температуре 28°С в течение 48 часов. Кроликов породы “шиншилла” (вес — 2.5-3.0 кг) иммунизировали трехкратно с интервалом после первого введения 7 и 11 дней. Бактерии инактивировали кипячением и вводили внутривенно в дозах 5-109(1 день), Ю10 (7 день), 1.5- 10ю (11 день) в 1.0 мл 0.9% раствора NaCI. Одновременно бактерии в дозах 5* 10‘° (1 и7 дни) и 1010 (11 день), эмульгированные в 0.6 мл полного адъюванта Фрейнда, вводили в подушечки задних и передних лап и подколенные лимфатические узлы. Через 18 дней проводили тотальное кровопускание. Для удаления гетерологичных антител сыворотки адсорбировали цельными бактериальными клетками, инактивированными формалином.
Результаты. Получено двенадцать О-антисывороток к Y. enterocoiitica 0:3,0:5,0:6.30,0:7.8,0:9,0:10,0:14,0:13.7, 0:18,0:20,0:21,0:22 сероваров. Титры антител в РА после адсорбции были 1:3200-1:6400. О-антисыворотки апробированы на штаммах Y enterocoiitica, выделенных от людей, животных и из объектов окружающей среды (общее количество штаммов—2330). В реакции агглютинации на стекле идентифицированы патогенный серовар 0:3 иубиквитарные штаммы — 0:10,0:14,0:6.30,0:13.7, 0:7.8. “Американские”штаммы сероваров 0:18,0:20,0:21 не были зарегистрированы. О-антисыворотка к У. enterocoiitica 0:18 агглютинировала в развернутой РА штаммы Y. pseudotuberculosis 1 серовара (изолированные в Сибири) до титра 1:1600-1:3200. Адсорбция кишеч-но-иерсиниозной сыворотки бактериальными клетками Y. pseudotuberculosis привела к полной элиминации антител к гомологичному штамму Y. enterocoiitica IP846, что указывает на антигенную общность Y enterocoiitica IP846 и Y. pseudotuberculosis 1 серовара.
Заключение. Предлагаемая схема иммунизации позволяет в короткий период (18 дней) получить О-антисы-норотки к У еШетсоНИса в титрах 1:3200-1:6400, пригодные для диагностического серотипирования. Обнаруженное сходство антигенов У. еШегосоНИса 1Р846(0:18) м У. р±-еш1о1иЬегси1ох1х 1 серовара представляет интерес, поскольку У.етегосоКиса серовара 0:18 относится к клиническим штаммам I биотипа, вызывающим тяжелую форму гастроэнтерита в Америке.
Определение абсолютного количества аллергенспецифических Иг Е-антител методом ИФА
Головин Г.Г., Ермолов В.В., Герпазнсва В.Б.,
Райкпс Б.Н.
ФГУП "Аллерген", г. Ставрополь
При разработке иммуноферментиых тест-систем (ИФТС) для определения аллергенспецифических Иг Е-антител к пыльце злаковых трав и деревьев оценку уровня Иг Е-антител к этим аллергенам в сыворотках больных и здоровых людей проводили в сравнении со стандартизованной сывороткой больных, чувствительных к указанным аллергенам. В стандартизованной сыворотке содержание аллергенспецифических Иг Е соответствовало 4 классу, определенному в радиоаллергосорбент-иом тесте. Для отработки параметров референс-систе-мы необходимо было провести первичную стандартизацию сывороток, уровень Иг Е которых соответствовал 4 классу в РАСТ, т. е. определить абсолютное количество аллергенспецифических Иг Е-антител. При этом мы использовали ИФТС для определения общего Иг Е и аллергенспецифических Иг Е-антител.
На первом этапе в лунках стрипов, сенсибилизированных соответствующими аллергенами, инкубировали сыворотки крови больных с высокой чувствительностью к данному аллергену. После инкубации с аллергосорбентом подсчитывали количество аллергенспецифических Иг Е, связавшихся с аллергеном, и тех, что остались в растворе. Для оценки количества Иг Е-антител, связавшихся с аллергеном, их элюировали с поверхности твердой фазы путем добавления в лунки фосфатносолевого буферного раствора рЫ 11.0. Далее элюаты отбирали из лунок, и содержание ИгЕ в них определяли иммуноферментным анализом.
После удаления элюатов подсчитывали количество оставшихся на поверхности лунок иеэлюированных Иг Е-антител. Количество иеэлюированных Иг Е-аитител определяли путем сравнения уровней сигналов иммуно-ферментной реакции исследуемых образцов и разных концентраций стандарта общего ИгЕ на калибровочной кривой.
Таким образом, процедура определения абсолютного количества аллергенспецифических Иг Е-антител методом элюции с твердофазного аллергена состоит из
определения количества аллергенспецифических Иг Е. зафиксированных на аллергене, и Иг Е-антител, не связавшихся с аллергеном.
Разработка референс-системы в иммуноферментном тесте для определения аллергенспецифических Иг Е-антител
Головин Г.Г., Ермолов В.В., Гсрвазиева В.Б.,
РаПкис Б.Н.
ФГУП “Аллерген" г. Ставрополь
В разработанной ранее и выпускаемой в промышленных масштабах иммуноферментной тест-системе для определения аллергенспецифических Иг Е-антител в качестве референс-системы использовали твердую фазу с аллергеном амброзии и пул сывороток крови с максимально высоким уровнем Иг Е-антител, специфичных к амброзии. Применение такой референс-системы обусловлено широким распространением амброзии, особенно в южных регионах страны, наличием большого количества больных, чувствительных к амброзии и имеющих высокий уровень аллергенспецифических Иг Е-антител в крови. Но эта референс-система имеет существенный недостаток, который заключается в том, что для изготовления референс-препарата необходимо использование сыворотки больных с высоким уровнем Иг Е-антител, соответствующем 4 классу в радиоаллергосорбентном тесте (РАСТ). Такая концентрация аллергенспецифических Иг Е-антител выявляется в крови у относительно небольшого количества пациентов. Это существенно усложняет выпуск данного реагента в промышленных масштабах. Поэтому нами была поставлена задача: разработать референс-систему на основе более доступных реагентов.
С этой целью мы попытались обосновать возможность замены в рефереис-системе сыворотки больных с высоким уровнем Иг Е-антител, специфичных к амброзии на пул сывороток с высоким уровнем общего Иг Е, а аллергены на твердой фазе - на моноклональные анти-Иг Е антитела. Такая замена теоретически обоснована тем, что обе реакции - между аллергеном на твердой фазе и аллергенспецифическими антителами п первом случае и между моноклональными анти-Иг Е антителами, иммобилизованными на твердой фазе и общим Иг Е во втором случае проявляются одним и тем же обнару-ж и ва ю щи м р еа ге нто м - ко и ь ю гатом м о но кл о нал ь и ы х ан ги-Иг Е антител и фермента. В качестве стандарта в разрабатываемой рефереис-системе брали пул сывороток больных аллергическими заболеваниями с общим уровнем ИгЕ 200-8000 КЕ/л, который разводили до содержания ИгЕ 75-100 КЕ/л. Концентрацию Иг Е в сыворотках, пуле и приготовленных образцах стандартов определяли набором IgE EIA kit фирмы Эббот (США). Стандарт использовали цельным и разводили в 5; 25 и 50 раз.
